国家自然科学基金(30700973)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 乙肝病毒核心蛋白真核表达载体的构建与表达被引量：1
- 2010年
- 目的构建2种包含乙肝病毒核心蛋白(HBc)基因的真核表达载体,检测其在人肝癌细胞系BEL7402中的表达。方法以质粒pUC19/3.0HBV作为模板,PCR扩增HBc基因,分别以pcDNA3.0和pEGFP-N1为母本,构建含HBc基因的真核表达载体pcDNA-HBc-HA及pEGFP-HBc。通过单、双酶切、PCR及DNA测序鉴定其正确性。利用脂质体将其分别转染入人肝癌细胞系BEL7402,并采用RT-PCR、Western blot及荧光显微镜观察的方法,分别检测其mRNA、蛋白质水平的表达。结果获得与预期分子量大小一致的DNA片段,转染2种质粒的BEL7402细胞均可高水平表达HBc mRNA,而空载体转染组则无表达,转染pEGFP-HBc转染组及pEGFP-N1转染组,均有较强的绿色荧光表达,pcDNA-HBc-HA转染组细胞可检测到HBc-HA融合蛋白的表达。结论成功构建2种携载HBc基因的真核表达载体,并可在人肝癌细胞系BEL7402中有效表达。
- 赵培庆曲忠花盖潇潇张晓宁高立芬梁晓红
- 关键词：病毒核心蛋白质类基因表达
- 乙型肝炎病毒核心蛋白小干扰RNA载体的构建与验证
- 2014年
- 目的 构建针对乙型肝炎病毒核心蛋白的小干扰RNA真核表达载体,并验证其干扰效果.方法 设计针对HBV基因组（ayw亚型）HBc基因的小干扰RNA序列（位于2147 bp ～2165 bp序列）,目的片段与载体成功连接后转入大肠埃希菌DH5α,酶切及测序验证其正确性.最后以脂质体转入HepG2.2.15细胞中,检测其干扰效果.结果 成功构建针对乙型肝炎病毒核心蛋白的小干扰RNA真核表达载体,并命名为pshRNA-HBc..酶切及测序验证正确,pshRNA-HBc对HepG2.2.15细胞中HBc表达具有特异性干扰效果.结论 构建针对乙型肝炎病毒核心蛋白的小干扰RNA真核表达载体,为后续研究HBc的生物学功能奠定良好基础.
- 赵培庆柴巨川盖潇潇高立芬马春红梁晓红
- 关键词：病毒核心蛋白质类
