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国家自然科学基金(30872689)

作品数：15 被引量：42H指数：4
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文献类型

  • 15篇中文期刊文章

领域

  • 13篇医药卫生
  • 4篇生物学

主题

  • 11篇干细胞
  • 10篇间充质干细胞
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  • 9篇脐带间充质干...
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机构

  • 14篇兰州军区兰州...
  • 3篇兰州大学第二...
  • 2篇兰州大学第一...
  • 1篇鄂尔多斯市中...

作者

  • 14篇刘毅
  • 4篇肖宏涛
  • 3篇唐军
  • 3篇徐斌
  • 3篇薛美思
  • 2篇王有虎
  • 2篇陈克明
  • 1篇宋枚
  • 1篇惠玲
  • 1篇李世龙
  • 1篇叶夏云
  • 1篇仇志强

传媒

  • 7篇中国美容医学
  • 2篇中华医学美学...
  • 2篇中国组织工程...
  • 1篇中国耳鼻咽喉...
  • 1篇实用医学杂志
  • 1篇中国修复重建...
  • 1篇解放军医药杂...

年份

  • 1篇2020
  • 2篇2014
  • 1篇2013
  • 1篇2012
  • 3篇2011
  • 6篇2010
  • 1篇2009
共 15 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
构建携带重组人胰岛素基因慢病毒表达载体及其病毒包装被引量：3
2010年
背景:腺病毒载体作为脂肪组织工程转基因载体,在应用中存在转导细胞免疫排斥及炎症反应等问题。应用慢病毒作为载体转染干细胞尤其是应用含胰岛素基因的慢病毒载体转染干细胞可避免腺病毒载体的诸多问题。目的:实验拟构建含有人重组胰岛素(insulin)与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因慢病毒表达载体pLenti6.3-insulin-IRES-EGFP,并进行病毒颗粒包装。方法:应用聚合酶链反应方法获得目的基因,在目的基因上、下游分别加上BamHⅠ,AscⅠ两个酶切位点,进行T载体克隆,转化入感受态DH5α细胞中,通过筛选获得重组质粒。用限制性内切酶酶切,将目的基因片段和pLenti6.3-IRES-EGFP载体连接,转化入感受态DH5α细胞中,通过筛选获得慢病毒表达载体pLenti6.3-insulin-IRES-EGFP,并进行测序。抽提慢病毒载体,转染293T细胞,包装病毒,测定病毒滴度。结果与结论:通过聚合酶链反应获得长度为347bp带有BamHⅠ和AscⅠ序列的目的基因。pMD18-T载体和慢病毒表达载体pLenti6.3-IRES-EGFP连接,慢病毒表达载体pLenti6.3-insulin-IRES-EGFP构建与预期相匹配,成功包装慢病毒颗粒。
薛美思刘毅
关键词：胰岛素绿色荧光蛋白克隆基因表达慢病毒表达载体
携带人胰岛素基因慢病毒载体转染人脐带间充质干细胞的实验研究被引量：15
2010年
目的构建共表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因和人胰岛素(insulin)基因的慢病毒载体,探讨其对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)的转染情况,为今后组织工程脂肪构建与体内回植研究奠定基础。方法采用DNA重组技术,将insulin基因克隆至带EGFP的慢病毒表达载体pLenti6.3-内部核糖体进入位点序列(internal ribosome entry site,IRES)-EGFP中,筛选阳性克隆,并用脂质体介导法将慢病毒包装系统和带目的基因的质粒pLenti6.3-insulin-IRES-EGFP共同转染到293T细胞内包装病毒,荧光倒置相差显微镜观察包装细胞报告基因的表达情况。收集病毒上清,纯化浓缩,测定重组病毒的滴度。取足月儿脐带以组织块培养法分离培养hUCMSCs,以不同感染复数(multiple of infection,MOI,分别为0、1、3、5、7、10、15、20)的重组慢病毒感染hUCMSCs,通过报告基因绿色荧光蛋白的表达筛选最适MOI;以最适MOI重组慢病毒感染hUCMSCs,应用实时荧光定量PCR及Western blot法分别检测细胞中insulin基因及insulin蛋白水平的表达情况。结果成功构建了共表达insulin基因和EGFP基因的重组慢病毒载体pLenti6.3-insulin-IRES-EGFP,并对其成功包装、纯化及浓缩,病毒滴度为1.3×108TU/mL。不同MOI的重组慢病毒感染hUCMSCs后,通过绿色荧光蛋白表达的阳性细胞数筛选其最适MOI为10,此时对细胞的转染效率可达到90%。实时荧光定量PCR检测示转染组insulin mRNA表达阳性,未转染组为阴性;Western blot检测示转染组细胞内及上清液insulin蛋白表达阳性,未转染组均为阴性。结论构建的携带insulin基因的重组慢病毒载体pLenti6.3-insulin-IRES-EGFP可有效转染hUCMSCs,表达insulin蛋白。
刘毅薛美思
关键词：组织工程脂肪人脐带间充质干细胞胰岛素绿色荧光蛋白基因转染慢病毒表达载体
胰岛素基因转染的人脐带间充质干细胞与丝素蛋白支架构建组织工程脂肪的研究被引量：5
2012年
目的探讨携带重组人胰岛素基因慢病毒载体转染的人脐带间充质干细细（human um—bilical cord mesenchymal stem cells．hUCMSCs）与丝素蛋白支架在体外构建组织工程化脂肪（tissue en—gineering adipose）的可行性。方法以最适感染复数（MOI）为10重组慢病毒pLenti6．3-insulin-IRES-EGFP转染hUCMSCs组为实验组（A组），EGFP基因转染组为对照组（B组）；将两组细胞接种于丝素蛋白支架．观察细胞在支架上的生长及黏附情况；尔后行细胞一支架复合物成脂诱导。四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测蓖组慢病毒转染对hUCMSCs生长增殖的影响以及基因转染后的hUCMSCs在丝素蛋白支架上的活性。结果细胞支架复合物成脂诱导5～7d后，见A组支架内脂肪样细胞数量明显多于B组．差异有显著统计学意义（P=0．007，P〈0．01）；逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测显示，A组hUCMSCs表达的成脂特异性基因PPARγ-2明显高于B组。MTT法检测结果显示，转染重组慢病毒的hUCMSCs与末转染组各刚‘问点吸光度A值比较，差异均无统计学意义（P=0．056，P〉0．05）。细胞组与细胞支架组A值比较．差异无统计学意义（P=0．066。P〉0．05）。结论转染胰岛素基因的hUCMSCs成脂分化能力明显提高，且能有效地与丝素蛋白支架在体外构建组织工程化脂肪。
唐军刘毅徐斌
关键词：人脐带间充质干细胞丝素蛋白胰岛素基因转染
绿色荧光蛋白和胰岛素基因共表达重组腺病毒载体的构建及感染人脐带间充质干细胞的实验研究被引量：3
2013年
目的构建同时表达绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因和人胰岛素(insulin,INS)基因的重组腺病毒载体pAdxsi-EGFP-INS,并感染人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs),观察其表达及诱导hUCMSCs成脂分化的作用。方法用EcoRI/XhoI将胰岛素基因从原始质粒上切下,定向插入至pShuttle-CMV-EGFP穿梭质粒,将验证正确的pShuttle-CMV-EGFP-INS中的EGFP-INS片段转移至pAdxsi载体上,构建pAdxsi-EGFP-INS重组腺病毒载体,用PacI限制性内切酶线性化后转染人胚肾细胞系HEK293细胞,扩增纯化重组腺病毒,测定病毒滴度。原代培养hUCMSCs,分别用pAdxsi-EGFP-INS(感染组)及pAdxsi-EGFP(对照组)腺病毒感染hUCMSCs,观察荧光蛋白的表达情况,成脂诱导剂诱导分化,油红O染色观察胰岛素对hUCMSCs成脂的诱导作用。结果成功构建pAdxsi-EGFP-INS重组腺病毒载体,包装、纯化后获得滴度达4×1011pfu/ml的重组腺病毒。分离获得hUCMSCs并传代、纯化,pAdxsi-EGFP-INS感染hUCMSCs后,EGFP-INS在胞浆及胞核表达;成脂诱导培养18 d后,感染组细胞呈现出含有大量小脂滴的脂肪样细胞,而对照组细胞含有少量较大的脂滴,感染组含脂滴的脂肪样细胞数量多于对照组。结论获得的pAdxsi-EGFP-INS重组腺病毒可高效感染hUCMSCs,为进一步研究胰岛素在干细胞成脂诱导分化中的作用,追踪其在体内、体外表达情况提供了新工具。
惠玲刘毅宋枚
关键词：胰岛素基因绿色荧光蛋白质类腺病毒间质干细胞
骨髓间充质干细胞辅助脂肪移植术填充头颈术后腔隙的初步研究
2014年
目的研究骨髓间充质干细胞(MSCs)辅助脂肪移植术后脂肪体积的变化,探索头颈肿瘤术后填充可行性方法。方法分离培养雄性大鼠骨髓间充质干细胞,Wistar雌性大鼠60只,按数字随机法分为对照组和实验组,颗粒脂肪1 ml+0.4 ml DMEM-LG为对照组,脂肪颗粒1 ml+0.4 ml DMEM-LG+1×106MSCs为实验组;均匀震动5 min,移植于背部皮肤与肌肉之间。移植后3、5、7、14、28、60 d每组各取5只脱颈处死,沿被膜分离出移植物。免疫组化法测定CD34观察血管生成,28、60 d测移植物体积,观察其病理改变。结果 28 d时对照组与实验组的脂肪体积保持率无明显差别(P>0.05),60 d时实验组脂肪体积保持率好于对照组(P<0.05),且脂肪结构完好,细胞分化成熟。结论骨髓间充质干细胞辅助脂肪移植术有效保持了移植术后的脂肪体积,为临床应用脂肪移植填充头颈术后腔隙奠定了基础。
王有虎仇志强刘毅
关键词：骨髓间充质干细胞
适宜于构建组织工程化脂肪的蚕丝蛋白支架:最佳孔径筛选被引量：12
2010年
背景:既往组织工程脂肪的研究中,支架材料的孔径往往被忽略。如孔径过大,细胞会顺着过大的孔隙流走,难以保留在支架中;孔径过小,细胞则主要分布于支架材料的表面,不易进入支架中,同时也不利于新生血管生长。目的:筛选用于构建组织工程脂肪的蚕丝蛋白支架的适宜孔径。方法:在保持蚕丝蛋白浓度不变条件下,通过改变冷冻-干燥温度与时间,制备出6批次不同孔径的蚕丝蛋白支架;贴壁法分离脐带间充质干细胞,化学染色检测其体外诱导成骨和成脂的能力;电镜下测定6批次蚕丝蛋白支架的孔径;观察脐带间充质干细胞在不同孔径蚕丝蛋白支架上黏附、增殖的能力。结果与结论:6批次蚕丝蛋白支架的孔径分别为:(39.94±17.27),(53.51±16.18),(63.97±19.76),(71.08±18.07),(87.33±21.78),(121.97±44.10)μm。脐带间充质干细胞在2号支架材料上黏附良好,并充分伸展,而第1,3,4,5,6号支架材料,除第1,3号支架上偶见细胞外,其余支架材料上均未见细胞生长。由此说明人脐带间充质干细胞与蚕丝蛋白支架构建组织工程脂肪时,支架材料的最佳孔径为50μm。
刘毅肖宏涛薛美思
关键词：孔径组织工程脂肪脐带间充质干细胞
不同分离方法及培养条件对人脐带间充质干细胞生物活性的影响
2020年
目的:观察不同分离方法及培养条件对人脐带间充质干细胞(Human umbilical cord-mesenchymal stem cells,hUCMSCs)生物活性的影响。方法:分别用组织块贴壁法、酶消化法获取hUCMSCs,进行原代培养,记录各组首次传代时间,相差显微镜观察细胞的形态,流式细胞仪鉴定其CD29、CD44、HLA-ABC、CD34、CD45、HLA-DR抗原表达。分别用DMEM-LG、DMEM-HG和DMEM-F123种培养基培养第3代、第7代细胞,MTT法比较不同时间点3种培养基培养细胞的生长情况。结果:两种分离方法均能得到较均一的梭形或者多角形贴壁细胞,胞核大胞浆丰富,CD29、CD44、HLA-ABC抗原表达阳性,CD34、CD45、HLA-DR抗原表达阴性。用DMEM-F12培养的细胞活力更好,细胞生长更迅速。结论:两种分离方法均能得到hUCMSCs,DMEM-F12培养基更能够促进细胞的增殖,较适合于培养hUCMSCs。
徐斌刘毅
关键词：酶消化法人脐带间充质干细胞培养基生物活性
人脐带间充质干细胞与蚕丝素多孔支架的体外复合培养被引量：11
2010年
目的观察蚕丝素多孔支架对人脐带间充质干细胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells，hUCMSCs）吸附作用及支架对hUCMSCs形态、功能及活性的影响，为脂肪组织工程支架选择提供实验依据。方法将hUCMSCs制成细胞悬液接种在蚕丝素多孔支架，荧光倒置相差显微镜、扫描电镜和四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察hUCMSCs的吸附和生长情况。结果培养1～2d后可见hUCMSCs与蚕丝素多孔支架充分附着。培养5～7d细胞生长增殖十分活跃，10d左右时，蚕丝素多孔支架孔中hUCMSCs成片状融合。荧光倒置相差显微镜和扫描电镜见细胞与支架黏附良好并有大量基质分泌，且活性指标与正常培养的hUCMSCs比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论蚕丝素多孔支架对hUCMSCs具有良好的吸附作用，并能维持其正常形态、功能及活性，蚕丝素多孔支架是hUCMSCs三维立体培养时的良好天然支架。
刘毅肖宏涛
关键词：脐带间充质干细胞
低氧对人脐带间充质干细胞成脂肪分化的影响被引量：3
2011年
目的:研究低氧(2%O2)对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)成脂肪分化的影响,为脂肪组织工程种子细胞的筛选提供实验依据。方法:培养条件有低氧(2%O2)、常氧(20%O2)、10%FBS完全培养基(GM)、10%FBS成脂培养基(DM);将第3代hUCMSCs根据培养条件分为3组,对照组(常氧+GM5天,常氧+DM2周)、实验组1(低氧+GM5天,低氧+DM2周)、实验组2(低氧+GM5天,常氧+DM2周);在诱导后2周分别进行油红O染色并观察其成脂效率。结果:与对照组相比,实验组1脂肪样细胞数量明显减少,实验组2脂肪样细胞数量明显增加。结论:将hUCMSCs预先进行低氧处理再转换为常氧培养可显著提高其成脂分化能力。
唐军徐斌刘毅
关键词：低氧人脐带间充质干细胞分化
胰岛素类似物对人脐带干细胞增殖活性的影响被引量：1
2010年
目的:探讨胰岛素类似物对人脐带干细胞增殖活性的影响。方法:分别采用3种不同浓度(1、10、100nmol/L)的人胰岛素、门冬胰岛素和甘精胰岛素作用于体外培养的人脐带间充质干细胞,于培养的24、48和72h,采用MTT法检测细胞的增殖活性。结果:与对照组比,10、100nmol/L人胰岛素、门冬胰岛素和甘精胰岛素作用24h后脐带干细胞的增殖活性均明显增加(P<0.05);与对照组比,1、10、100nmol/L的人胰岛素、门冬胰岛素和甘精胰岛素作用48、72h脐带干细胞增殖活性均明显增加,且促细胞增殖效应各组均呈剂量依赖性,在高浓度组最明显;与人胰岛素组比较,门冬胰岛素组细胞增殖活性无明显增加(P>0.05),甘精胰岛素组在培养48h(P<0.05)和72h(P<0.01)细胞增殖活力显著强于人胰岛素组。结论:人胰岛素和胰岛素类似物均能促进脐带干细胞的增殖活性,门冬胰岛素促进干细胞增殖活性与速效胰岛素相当,甘精胰岛素促细胞增殖的能力明显强于人胰岛素,这为脂肪组织工程获得足够的种子细胞提供了一种新途径。
叶夏云刘毅徐斌陈克明
关键词：干细胞速效胰岛素甘精胰岛素门冬胰岛素
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