国家自然科学基金(30600128)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
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- 两种等位基因特异性扩增方法在结肠癌K-ras癌基因点突变检测中的应用比较(英文)
- 2012年
- 针对传统电泳检测方法存在操作复杂、费时等缺点,提出一种用于检测K-ras癌基因点突变的实时荧光等位基因特异性扩增(Allele specific amplification,ASA)方法。该法采用突变型引物对结肠癌基因组中的K-ras基因进行等位基因特异性扩增,只有突变型样品能被顺利扩增出双链DNA产物,该产物能与双链DNA染料SYBR GreenⅠ结合,产生荧光信号从而被检测到。通过对荧光域值和溶解曲线分析来区分不同的基因突变类型。该法可以检测到野生型DNA中含量为1/1 000的突变型DNA,整个检测时间小于1 h。我们用该法检测31例结肠癌样品中K-ras基因密码子12发生的点突变,其中有15例检出为阳性。此外,还采用等位基因特异性扩增结合电泳分析对样品进行了检测,并对两种方法进行了比较。结果显示:实时荧光等位基因特异性扩增方法具有操作简便、快速、检测成本低等优点,为临床诊断基因突变引起的疾病提供了一种可行的手段。
- 朱德斌张岚
- 关键词：SYBR结肠癌点突变
- 实时荧光等位基因特异性扩增法快速检测K-ras癌基因点突变被引量：3
- 2007年
- 将荧光定量PCR技术与等位基因特异性扩增(Allele specific amplification,ASA)方法相结合,发展了一种可以快速检测基因点突变的实时荧光等位基因特异性扩增(Real-time ASA)方法.将该法用于检测K-ras癌基因第12位密码子发生的点突变,分别采用针对其不同点突变方式(GAT,GTT,CGT)设计的突变型引物对待测样品进行ASA,只有突变型样品能被顺利扩增出双链DNA产物,该产物才能与双链DNA染料SYBR GreenⅠ结合,发出荧光信号从而被检测到.用该法检测31例结肠癌组织中的K-ras癌基因点突变,其中有15例样品检出为突变型.Real-time ASA法可检测到样品中含量为1/1000的突变型基因,具有灵敏、快速、简便、安全、高通量和低成本等优点,可望用于大量临床样本的点突变筛查.
- 朱德斌邢达李贤张岚
- 关键词：点突变结肠癌
- 电化学发光PCR方法检测结肠癌中K-ras癌基因点突变(英文)
- 2008年
- 发展了一种可用于快速检测K-ras癌基因点突变的电化学发光PCR(ECL-PCR)分析方法,该法采用三联吡啶钌标记的上游引物和生物素标记的下游引物对目的片段进行PCR扩增;随后,采用限制性内切酶MvaI对扩增产物进行酶切,由于突变导致酶切位点的丢失,所以只有野生型样品能被切断;通过生物素与链霉亲和素包被的磁珠连接,将生物素标记的DNA片段收集到反应池中进行电化学发光检测。采用该法对20例结肠癌组织中的K-ras癌基因第12位密码子进行点突变分析,得出其中有9例存在点突变,点突变率为45%。该方法操作简便、安全、快速、灵敏,可用于快速检测K-ras癌基因点突变。
- 朱德斌邢达唐亚兵周小明
- 关键词：结肠癌点突变
