国家自然科学基金(30872679)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 人外周血纤维细胞的分离、培养方法
- 2012年
- 目的:探索简便易行的外周血纤维细胞体外分离、培养方法极其生物学特征与功能。方法:采用Ficoll密度梯度离心分离法分离成人外周血,所获得的白细胞在一定条件要求下体外培养,采用流式细胞技术、细胞免疫荧光染色等对贴壁生长的成纤维样细胞进行鉴定,在扫描电镜下进一步观察其形态结构。结果:培养至第14天时,外周血纤维细胞开始分化成熟。血液来源的取材、首次换液的时间、细胞的接种密度、血清浓度等多种因素均会对外周血纤维细胞的培养造成影响。免疫荧光染色结果显示培养至12天时CD34和COLⅠ均为强阳性表达,继续培养至28天时,血液来源的细胞表面抗原CD34发生明显丢失,免疫荧光染色几乎不能显色;相反COLⅠ持续表达阳性,取培养14天的贴壁细胞,经流式细胞仪分析,ColⅠ+细胞为81.6%,显示PBFCs不断向成纤维细胞分化的特性。结论:采用密度梯度离心法配合适当的培养条件,成人外周血中存在的前体细胞经体外分离、培养可分化为外周血纤维细胞,并保持其生物学特性。
- 崔磊李学拥李跃军李金清吕晓星
- 关键词：细胞培养免疫细胞化学创伤修复
- CXCL8和CXCR2在血管内皮细胞趋化外周血循环纤维细胞中的作用被引量：2
- 2010年
- 目的:周皮细胞的分化在血管新生过程中具有重要作用,没有周皮细胞及其分泌组建的基底膜的支撑,毛细血管就没有正常的功能。作者以前的工作证明周皮细胞可能来源于外周血循环纤维细胞(PBFC),但血管内皮细胞如何趋化PBFC还不清楚。本实验重点观察CXCL8及其受体CXCR2在血管内皮细胞趋化PBFC中的作用。方法:分离纯化人PBFC后与人微血管内皮细胞(HDMEC)共培养,观察共培养条件下PBFC的形态学改变,并检测PBFC细胞内CXCR2 mRNA表达和HDMEC内CXCL8 mRNA的表达。结果:与HDMEC共培养后,PBFC由梭形向菱形改变;HDMEC内的CXCL8 mRNA水平与PBFC共培养24小时后增高约10倍,培养后48小时仍维持在高水平;PBFC内的CXCR2 mRNA水平在共培养后24小时增高约3倍,且在培养后24小时仍维持在较高水平。结论:CXCL8/CXCR2可能参与了血管内皮细胞趋化PBFC的过程。
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- 关键词：血管新生趋化
