国家自然科学基金(81272095)
- 作品数：5 被引量：26H指数：2
- 相关作者：周辉赵明吴炜刘鲜艳谭洁更多>>
- 相关机构：南方医科大学南方医科大学第三附属医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 细胞分裂周期蛋白2启动子报告基因载体的构建与鉴定被引量：2
- 2014年
- 目的构建细胞分裂周期蛋白2(Cdc2)基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-Cdc2-promoter,并检测其转录活性。方法根据UCSC软件查找的人基因组DNA的Cdc2启动子序列并设计两端引物,扩增人基因组DNA中的Cdc2启动子。用限制性内切酶SacⅠ和XhoⅠ双酶切质粒pGL3-Basic和Cdc2启动子后,将Cdc2基因启动子插入到pGL3-Basic报告基因载体上。重组质粒命名为pGL3-Cdc2-promoter。将其与内参质粒pRL-SV40瞬时共转染骨肉瘤细胞U2OS,检测双荧光素酶活性。结果成功构建Cdc2基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-Cdc2-promoter,质粒酶切及测序结果完全正确。瞬时共转染pGL3-Cdc2-promoter/pRL-SV40组荧光素酶活性为1.591 5±0.199 8,高于转染pGL3-Basic/pRL-SV40组的荧光素酶活性值0.049 9±0.010 4。结论 pGL3-Cdc2-promoter在骨髓瘤细胞U2OS细胞中能被转录激活,为进一步将其用于抗肿瘤药物的筛选与评价奠定了基础。
- 周辉吴炜赵明
- 关键词：细胞周期蛋白类细胞周期蛋白质依赖激酶类转录启动子细胞周期
- 抗氧化型低密度脂蛋白的抗体通过调节单核巨噬细胞的Ca2+/K+通道抑制MCP--1的释放
- 动脉粥样硬化是一种由于脂质代谢不平衡，即高脂血症导致的慢性炎症疾病。氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)通过诱导巨噬细胞释放单核细胞趋化因子(MCP-1)和吞噬过多脂质导致泡沫细胞形成和脂质斑块在血管内膜的堆积。近几年来，研...
- 苏金玉
- 关键词：动脉粥样硬化单核巨噬细胞单核细胞趋化蛋白-1
- 文献传递
- LPS通过调节Cdc2蛋白表达诱导HeLa细胞凋亡的研究被引量：1
- 2014年
- 目的构建细胞分裂周期蛋白2(Cdc2)真核表达载体,并在P16基因缺失的肿瘤细胞HeLa细胞中表达,利用LPS诱导细胞凋亡,并探讨LPS诱导HeLa细胞凋亡的机制。方法从人U2OS细胞中提取RNA,反转录克隆Cdc2cDNA片段,利用Gateway技术构建pDEST27-Cdc2质粒。将pDEST27-Cdc2质粒瞬时转染人宫颈癌HeLa细胞,免疫印迹分析Cdc2的表达情况,并用LPS刺激,观察其对LPS引起的细胞凋亡和细胞周期的影响。结果成功构建pDEST27-Cdc2质粒,质粒酶切及测序结果完全正确。LPS刺激HeLa细胞24h后,流式细胞仪检测发现大量细胞凋亡,而转染pDEST27-Cdc2质粒的细胞凋亡率明显降低,提示Cdc2的重要作用。免疫印迹分析研究发现,LPS诱导HeLa细胞Cdc2蛋白水平下降,进一步研究发现LPS诱导HeLa细胞G2/M期阻滞,过表达Cdc2可以降低G2期细胞阻滞的发生。结论 LPS诱导HeLa细胞凋亡是由于其导致Cdc2表达下降,细胞分裂停止在G2/M期,过表达Cdc2可以阻止死亡信号诱导的细胞凋亡。
- 赵丽君周辉赵明
- 关键词：细胞周期蛋白质类细胞凋亡细胞周期
- 动脉粥样硬化与免疫被引量：21
- 2022年
- 动脉粥样硬化是一种脂质驱动的慢性炎症性疾病,表现为富含载脂蛋白B的脂蛋白、免疫细胞以及细胞外基质在动脉内皮下积聚形成粥样斑块。修饰后的脂蛋白获得损伤相关分子模式特征,首先触发以单核-巨噬细胞为主的固有免疫反应,其次是获得性免疫反应。这些炎症反应通常是慢性的且无法消除,并可能导致动脉损伤以及血栓诱发的器官梗死。本文主要综述免疫系统在动脉粥样硬化发生发展过程中的作用以及目前动脉粥样硬化的主要免疫防治策略。
- 肖素军赵明
- 关键词：动脉粥样硬化固有免疫获得性免疫疫苗抗体
- 人细胞表面黏附分子P选择素启动子报告基因的构建及鉴定被引量：2
- 2016年
- 目的构建人细胞表面黏附分子P选择素(p-selectin)基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-pselectin-promoter,检测其转录活性,并应用于筛选药物对其转录活性的影响。方法根据UCSC软件查找的人基因组DNA的p-selectin启动子序列并设计两端引物,扩增人基因组DNA中的p-selectin启动子。用限制性内切酶KpnⅠ和XhoⅠ双酶切质粒pGL3-Basic和p-selectin启动子后,将p-selectin基因启动子插入到pGL3-basic报告基因载体上。重组质粒命名为pGL3-pselectin-promoter。将其与内参质粒p RL-SV40瞬时共转染293F细胞,检测双荧光素酶活性。对不同启动子片段长度的p-selectin报告基因进行双荧光素酶的检测。以炎症因子和药物分组刺激转染了报告基因质粒的293F细胞并检测双荧光素酶活性。结果成功构建p-selectin基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-pselectin-promoter,质粒酶切及测序结果完全正确。瞬时共转染pGL3-pselectin-promoter/p RL-SV40组荧光素酶活性为0.8573±0.4703,高于转染pGL3-Basic/p RL-SV40组的荧光素酶活性值0.03955±0.05894。pGL3-1826 bp相比较于pGL3-1092 bp组和pGL3-3738 bp组具有最强的转录活性。炎症因子LPS和TNF-α和药物As2O3均具有上调pGL3-pselectin-promoter转录活性的作用。结论 pGL3-pselectin-promoter在293F细胞中能被转录激活,并验证了炎症因子对其转录表达的作用,并为药物筛选与评价提供解决方案。
- 徐若霆周辉刘玮璐吴炜刘鲜艳张文强谭洁赵明
- 关键词：P选择素荧光素酶
- 应用哺乳动物细胞表面抗体展示技术构建动脉粥样硬化抗体库
- 2019年
- 目的:利用哺乳动物细胞表面抗体展示技术构建动脉粥样硬化(As)抗体细胞库,以寻找动脉粥样硬化治疗性抗体。方法:将载体pcDNA5/FRT改造成双表达载体pcDNA-DHL。分离动脉粥样硬化患者外周血单个核细胞,提取总RNA,逆转录为cDNA。PCR扩增抗体重链可变区和Kappa型轻链全长,连接至双表达载体pcDNA-DHL,即动脉粥样硬化抗体基因库pDHL-As,将其转染Flp-In TM-CHO细胞(FCHO),流式细胞术检测重组抗体在细胞表面的表达。加入潮霉素筛选出成功转染pDHL-As载体的细胞,即为动脉粥样硬化全长抗体细胞库。结果:成功构建双表达载体pcDNA-DHL。构建的重、轻链初库容量分别达1.79×10^5和1.80×10^5,理论上抗体库多样性为2.32×10^10。动脉粥样硬化抗体库pDHL-As可成功展示在细胞表面,并分选出45个表达抗氧化型低密度脂蛋白抗体的FCHO细胞。结论:本研究成功构建了一个动脉粥样硬化全长人源抗体细胞库。
- 施黎银周辉赵明
- 关键词：动脉粥样硬化
