国家自然科学基金(30700940)
- 作品数：8 被引量：7H指数：2
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- 大鼠卡那霉素耳中毒后耳蜗TMPRSS3蛋白的表达被引量：1
- 2011年
- 目的:建立氨基甙类抗生素(aminoglycoside antibiotics,AmAn)致聋动物模型,观察内耳跨膜丝氨酸蛋白酶3(transmembrane protease,serine 3,TMPRSS3)的表达变化,探讨其在AmAn致聋中的作用机制。方法:选取健康SD大鼠40只,随机分为4组:对照组、硫酸卡那霉素3日组、硫酸卡那霉素7日组、硫酸卡那霉素14日组(n=10)。建立AmAn致聋动物模型,以听觉脑干反应(ABR)阈值作为评价听功能指标,采用免疫组织化学、Western印迹分析AmAn致聋后耳蜗TMPRSS3蛋白表达的变化。结果:成功建立了AmAn致聋动物模型,随着卡那霉素注射时间延长,大鼠ABR阈值逐渐升高,耳蜗TMPRSS3蛋白表达水平逐渐降低,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:蛋白酶TMPRSS3对于正常听觉功能维护起重要作用,它参与了AmAn致聋过程,其表达水平下调可能是AmAn耳毒性发生机制中的一个重要环节。
- 彭安全葛圣雷汪芹谢鼎华伍伟景肖自安
- 关键词：硫酸卡那霉素耳蜗耳毒性
- 蛋白酶TMPRSS3在小鼠耳蜗中的表达分析被引量：1
- 2011年
- 目的:观察跨膜丝氨酸蛋白酶3(transmembrane protease,serine 3,TMPRSS3)在小鼠耳蜗组织中的表达与分布,分析不同年龄阶段耳蜗TMPRSS3 mRNA表达情况,初步探讨内耳蛋白酶TMPRSS3的作用。方法:采用免疫组织化学结合免疫荧光双标技术观察C57/BL小鼠耳蜗组织TMPRSS3蛋白表达分布,解剖耳蜗、耳蜗螺旋神经元、Corti器、血管纹组织,采用实时荧光定量PCR检测上述组织细胞中TMPRSS 3的表达情况,依次取不同年龄组小鼠耳蜗标本,实时荧光定量PCR检测各年龄组耳蜗TMPRSS3 mRNA表达的变化。结果:蛋白酶TMPRSS3主要表达分布在耳蜗螺旋神经元中,耳蜗Corti器、血管纹组织细胞中也有TMPRSS3阳性表达;各年龄阶段小鼠耳蜗均存在TMPRSS3 mRNA表达,但其整体表达水平相对较低。结论:耳蜗多处部位存在蛋白酶TMPRSS3的表达,但其表达主要分布在耳蜗螺旋神经元中,提示TMPRSS3的作用可能主要体现在维护听觉螺旋神经元的生理功能方面。
- 葛圣雷汪芹彭安全伍伟景谢鼎华
- 关键词：耳蜗螺旋神经元
- 小鼠增龄过程中耳蜗MeCP2的变化被引量：1
- 2011年
- 在对不同月龄BALB/c小鼠听功能和耳蜗形态学研究的基础上,应用免疫组化技术,检测不同月龄组(3,6,12,18月龄)小鼠耳蜗组织中MeCP2的表达与分布情况,初步探讨其在听觉老化中的作用。结果显示,MeCP2蛋白在BALB/c小鼠耳蜗中有表达,主要为细胞核着色,并随月龄增长,小鼠耳蜗染色阳性程度变弱,阳性细胞比例减少;MeCP2表达降低程度与老化程度相一致。MeCP2在小鼠耳蜗组织中的表达呈增龄相关性降低,可能与听觉老化相关。
- 蒋腊梅张勇葛圣雷伍伟景
- 关键词：耳蜗免疫组化MECP2
- 增龄相关性听力损失大鼠耳蜗TMPRSS3和ENaC-α蛋白的表达
- 2013年
- 目的通过检测增龄相关性听力损失SD大鼠耳蜗中跨膜丝氨酸蛋白酶3(transmembrane protease,serine 3,TMPRSS3)、表皮钠通道α(epithelial sodium channel-a,ENaC-α)蛋白的表达,初步探讨其在增龄相关性听力损失中的作用。方法选用3、12及24月龄SD大鼠各30只,应用免疫组化、Western blot技术检测各组大鼠耳蜗中TMPRSS3、ENaC-α蛋白表达水平。结果随月龄增大,大鼠ABR阈值逐渐升高,耳蜗TMPRSS3、ENaC-α蛋白表达水平逐渐降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论增龄相关性听力损失大鼠的耳蜗TMPRSS3、ENaC-α蛋白随月龄增大而降低。ENaC-α蛋白的变化与TMPRSS3呈相关性,提示TMPRSS3可能通过调节ENaC-α蛋白而起作用。
- 汪芹葛圣雷伍伟景李友忠
- 关键词：耳蜗
- 跨膜丝氨酸蛋白酶TMPRSS3与遗传性耳聋被引量：2
- 2008年
- 跨膜丝氨酸蛋白酶TMPRSS3(transmembrane protease,serine3)属于TTSPs(typeⅡtransmembrane serine proteases)家族成员,在分子结构上,TMPRSS3具有典型的TTSPs结构域,如丝氨酸蛋白酶、LDLRA、SRCR等.TMPRSS3有不同的蛋白异构体,其中异构体A是体内最主要的存在形式,主要在内耳表达,亚细胞水平定位于内质网膜上,TMPRSS3基因缺陷是遗传性耳聋DFNB8/10的遗传基础,因此目前对TMPRSS3的功能研究主要集中在听觉系统方面,此外蛋白异构体D还可能是卵巢癌的生物学标志物.TMPRSS3是迄今为止发现的第一个基因突变能引起耳聋的蛋白酶,表明听觉通路上的某些关键调控因子可能作为它的生理学底物被水解激活,从而介导相应的信号转导途径,但它激活了哪些信号通道,目前尚不清楚.借鉴mCAP(mouse channel activating protease)的功能预测ENaC(epithelial sodium channel)可能是TMPRSS3的作用底物,推测TMPRSS3参与内耳Na+平衡调控,但仍有待于体内实验证实.当前酶学领域研究技术的革新发展,尤其酶降解组学的应用,为认识蛋白酶TMPRSS3的功能及其复杂的分子调控机制提供了新的捷径.
- 葛圣雷易彦谢鼎华
- 关键词：内耳底物信号转导途径
- 骨髓增生异常综合征合并自身免疫病的WPSS分析被引量：2
- 2010年
- 目的探讨骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)合并自身免疫病(autoimmune disease)患者的WPSS积分与临床特点及预后的关系。方法对该院收治的23例合并自身免疫病的MDS患者进行临床回顾性分析和随诊观察,并与同时期收治的52例不合并自身免疫病的普通MDS患者进行比较,分析其临床特点、WPSS积分及预后差异。结果合并自身免疫病的MDS患者与普通MDS患者比较,两组患者中转化为白血病者的比率无显著性差异,但合并自身免疫病MDS患者的生存时间较短。WPSS分析提示,合并自身免疫病的MDS患者中,低危和极低危患者比例较低,而高危和极高危患者比例较高。如WPSS评分相同,合并自身免疫病的MDS患者与普通MDS患者的生存时间无显著性差异。结论合并自身免疫病MDS患者的生存时间较普通MDS患者短,其原因可能是合并自身免疫病MDS患者中,高危和极高危患者比例较高,而低危和极低危患者比例较低。合并自身免疫病的MDS具有高度异质性,WPSS是判断其预后的良好指标。
- 易彦葛圣雷
- 关键词：骨髓增生异常综合征自身免疫病
- TGF-α对鼻咽癌CNE2细胞作用的蛋白质组学分析
- 2007年
- 目的通过蛋白质组学方法观察转化生长因子α(transforming growth factorα,TGF-α)对鼻咽癌细胞系CNE2蛋白质表达谱的影响,从而解析表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)在鼻咽癌中的作用信号途径。方法以TGF-α作为配体,激活EGFR信号通道,采用无血清细胞培养法,将鼻咽癌CNE2细胞在有或没有TGF-α作用下培养24 h,收集2组细胞总蛋白,通过比较蛋白质组学方法分析蛋白表达谱的变化,质谱鉴定差异蛋白质。结果鉴定了16个差异蛋白,包括EF-Tu precursort、riosephosphate isomerase、nucleoside-diphosphate kinase、annexinA1、hemoglobin beta chain、Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H等,它们广泛参与了信号转导、细胞凋亡与侵袭转移等重要生理过程。结论EGFR可能通过上述差异蛋白所介导的信号转导途径而发挥作用,为鼻咽癌细胞EGFR信号通路的深入研究提供了依据。
- 葛圣雷陈主初肖志强贺湘波谢鼎华
- 关键词：鼻咽癌转化生长因子Α表皮生长因子受体比较蛋白质组学
- 鼻咽癌成纤维细胞分泌性蛋白质的变化分析
- 2008年
- 【摘要】目的建立细胞分泌性蛋白质组学研究方法，分析鼻咽癌形成过程中成纤维细胞分泌蛋白的变化特征。方法分别收集5份鼻咽癌和正常鼻咽组织标本，无血清培养成纤维细胞，收集细胞上清液，超滤法脱盐并浓缩上清液中分泌性蛋白，运用双向凝胶电泳（2．DE）技术建立分泌性蛋白表达图谱；并用比较蛋白质组学方法分析2组成纤维细胞分泌蛋白的差异，基质辅助激光解析飞行时间质谱分析鉴定差异蛋白；ELISA分析2组细胞上清液中半乳糖凝集素1的表达。结果用自建细胞分泌性蛋白2-DE图谱，从2组细胞上清液中筛查出表达差异大于2倍的蛋白质点18个，质谱分析鉴定出11个分泌性蛋白；其中半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、补体组分Cls前体、不均一性核糖核蛋白Al在鼻咽癌间质成纤维细胞（CAFs）上清液中表达下调，而其余8个包括半乳糖凝集素1、14-3-3sigma蛋白、组织蛋白酶L等分泌性蛋白在CAFs上清液中表达上调；2组细胞上清液中半乳糖凝集素1分别为（4．95±0．76）ng／ml、（9．90±0．36）ng／ml（CAFs组），二者差异有统计学意义（P〈0．05）。结论鼻咽癌形成过程中成纤维细胞分泌性蛋白的变化涉及细胞信号转导、蛋白合成与降解等途径，CAFs可能通过上述途径调控肿瘤微环境，影响鼻咽癌的发生、发展、侵袭转移；这为今后分泌组学研究奠定了实验基础。
- 葛圣雷易彦陈主初谢鼎华肖志强陈勇
- 关键词：鼻咽肿瘤成纤维细胞蛋白质组学半胱氨酸蛋白酶
