重庆市卫生局科研项目(05-2-203)
- 作品数：15 被引量：69H指数：6
- 相关作者：李文桂谢婷杨梅陈雅棠曾莉蓉更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局科研项目教育部科学技术研究重点项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗的构建及鉴定被引量：20
- 2007年
- 目的构建和鉴定多房棘球绦虫(Em)重组双歧杆菌(Bb)-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗。方法通过PCR扩增EmⅡ/3和Em14-3-3抗原编码基因,然后采用基因拼接法(geneSOEing)剪接EmⅡ/3和Em14-3-3,得到EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因;将该融合基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-EmⅡ/3-Em14-3-3;用电穿孔法将该质粒导入Bb,构建多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗。结果PCR成功扩增出2554bp的EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因;双酶切证实EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因成功插入pGEX-1λT中;PCR证实rBb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗构建成功。结论成功构建了多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗,为该疫苗的开发和利用打下了坚实的实验基础。
- 杨梅李文桂朱佑明
- 关键词：多房棘球绦虫
- 结核分枝杆菌重组耻垢分枝杆菌疫苗的研究进展被引量：7
- 2006年
- 结核分枝杆菌引起的结核病是一种人兽共患的慢性传染病,短程督导化疗是治疗该病的主要措施,卡介苗是预防该病的唯一疫苗,但其免疫效果极不稳定。文章介绍了4种结核分枝杆菌重组耻垢分枝杆菌疫苗的构建及其免疫机制等方面的研究进展。
- 李文桂陈蕊陈雅棠
- 关键词：医学免疫学结核分枝杆菌
- 多房棘球绦虫EmⅡ/3抗原研究进展
- 2007年
- 本文综述了多房棘球绦虫EmⅡ/3基因及表达蛋白EmⅡ/3的抗原性和免疫性,为多房棘球蚴病的疫苗研究和免疫诊断研究提供参考。
- 杨梅李文桂
- 关键词：多房棘球绦虫疫苗
- 多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗诱导小鼠细胞因子变化的研究被引量：10
- 2008年
- 目的:研究多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗对原头蚴攻击小鼠细胞因子变化的影响。方法:将重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗分别通过皮下注射、肌肉注射、鼻腔黏膜接种和口服接种免疫BALB/c小鼠12周后,用50个多房棘球绦虫原头蚴腹腔注射进行攻击,攻击感染后18周剖杀小鼠,取脾脏制备淋巴细胞悬液体外培养,分别以多房棘球绦虫抗原(EmAg)、刀豆素A(ConA)刺激诱生白细胞介素12(IL-12)、白细胞介素10(IL-10)和干扰素γ(IFN-γ);以脂多糖(LPS)刺激诱生肿瘤坏死因子α(TNF-α)。常规ELISA测定脾细胞培养上清液中IL-12、IL-10、IFN-γ和TNF-α水平。结果:与对照组相比,疫苗免疫组IFN-γ、IL-12、TNF-α水平增加,IL-10水平降低,EmAg刺激组和ConA或LPS刺激组细胞因子水平明显高于相应的原液组。结论:多房棘球绦虫重组Bb-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗可诱导攻击感染小鼠产生Th1型细胞免疫应答,增强宿主抗多房棘球绦虫感染的保护性免疫反应。
- 杨梅李文桂
- 关键词：多房棘球绦虫原头蚴
- 产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的分布及耐药性分析被引量：18
- 2006年
- 目的了解医院产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的分布及耐药性特点。方法对我院2004年7月～2006年7月间各类临床标本分离出的大肠埃希菌307株和肺炎克雷伯菌202株，用CLSI／NCCLS推荐的表型确证法检测其ESBLs，采用K-B纸片琼脂扩散法进行药敏试验，分析产ESBLs菌株的分布及耐药性。结果大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLS菌株的检出率分别为38．4％（118／307）和31．7％（64／202），主要分布于尿和痰、咽拭子中，病区主要集中于肺科、神经外科、感染科、泌尿外科、ICU室。产ESBLs菌株对亚胺培南和美罗培南呈高度敏感，对哌托西林／三唑巴坦、头孢哌酮／舒巴坦、头孢西丁耐药率较低，对其他抗菌药物均出现较高耐药。结论产ESBLS的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分布在不同病区的不同标本中，碳青霉烯类抗生素亚胺培南和美罗培南是治疗产ESBLS菌株感染的较佳药物。
- 刘成伟李文桂郑行萍李崇智余登高
- 关键词：大肠埃希菌肺炎克雷伯菌耐药性
- 细粒棘球绦虫AgB研究进展被引量：4
- 2008年
- 李文桂陈雅棠
- 关键词：细粒棘球绦虫人兽共患寄生虫病AGB囊型包虫病感染病例现症患者
- 结核分枝杆菌融合基因疫苗的研究进展
- 2007年
- 谢婷李文桂
- 关键词：融合基因疫苗结核分枝杆菌免疫保护作用免疫保护效果抗原免疫BCG
- 结核分枝杆菌重组质粒pGEX-ESAT-6构建及其在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达效率的研究被引量：1
- 2008年
- 目的构建结核分枝杆菌(MTB)重组质粒pGEX-ESAT-6,分析ESAT-6抗原在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达效率。方法以结核分枝杆菌H37Rv标准株基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到ESAT-6抗原编码基因;将该基因定向克隆于含有谷胱甘肽-S-转移酶(GST)基因的高效原核表达载体pGEX-1λT,经酶切鉴定后以IPTG诱导表达ESAT-6/GST融合蛋白;SDS-PAGE及Western blot对表达产物进行鉴定。结果PCR扩增出288bp的ESAT-6基因;双酶切证实ESAT6基因成功插入pGEX-1λT中,构建了pGEX-ESAT-6穿梭表达载体。SDS-PAGE分析重组质粒pGEX-ESAT-6表达产物的分子质量单位为35ku,表达效率为20%,Western blot检测该蛋白能被活动性结核病人血清特异识别。结论结核分枝杆菌重组质粒pGEX-ESAT-6在大肠埃希菌中获得了高效融合表达,表达的ESAT-6重组蛋白具有抗原特异性。
- 谢婷李文桂
- 关键词：分枝杆菌结核大肠埃希菌
- 结核分枝杆菌重组Bb-MPT64疫苗的构建、鉴定及表达被引量：7
- 2008年
- 目的:构建和鉴定结核分枝杆菌重组双歧杆菌(Bifidobacteria bifidum,Bb)-MPT64疫苗。方法:以结核分枝杆菌H37Rv标准株基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到MPT64抗原编码基因序列,定向克隆入大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT中,构建重组质粒pGEX-MPT64;用电穿孔法将该质粒导入Bb及BL21(DE3),构建结核分枝杆菌重组双歧杆菌-MPT64疫苗。用IPTG诱导重组BL21(DE3)菌表达MPT64/GST融合蛋白;SDS-PAGE及Westernblot对表达产物进行鉴定。结果:PCR成功扩增出688bp的MPT64目的基因;双酶切证实MPT64目的基因成功插入pGEX-1λT中;PCR证实rBb-MPT64疫苗构建成功。免疫印迹分析发现重组质粒pGEX-MPT64的表达产物在相对分子量(50ku)处有明显的蛋白表达条带,且能被活动性结核病人血清特异识别。结论:成功构建了结核分枝杆菌rBb-MPT64疫苗,为发展新型结核病疫苗奠定了基础。
- 谢婷李文桂
- 关键词：结核分枝杆菌
- 结核分枝杆菌重组Bb-ESAT-6疫苗的构建、鉴定和表达及其保护力被引量：4
- 2008年
- 目的构建和鉴定结核分枝杆菌(MTB)重组双歧杆菌(Bifidobacteria bifidum,Bb)-ESAT-6疫苗,研究该疫苗对鼠结核杆菌感染的免疫保护效果。方法以结核分枝杆菌H37Rv标准株基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到ESAT-6抗原编码基因;将该基因定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-ESAT-6;用电穿孔法将该质粒导入Bb及BL21(DE3),构建结核分枝杆菌重组Bb-ESAT-6疫苗。用IPTG诱导重组BL21(DE3)菌表达ES-AT-6/GST融合蛋白;SDS-PAGE及Western blot对表达产物进行鉴定。65只BALB/c雌性小鼠,随机分为5组:A组(SC)、B组(IM)、C组(IN)、D组(Bb)、E组(PBS)。分别于免疫后8周用5×105CFU MTB H37Ra减毒株悬浮于10μL PBS中进行鼻腔粘膜接种感染。攻击感染后6w剖杀各组小鼠8只,计数肝、肺组织荷菌量,常规ELISA检测血清IgG及其亚类和IgE,MTT法检测特异性脾淋巴细胞增殖。结果PCR成功扩增出288bp的ESAT-6基因;双酶切证实ESAT6基因成功插入pGEX-1λT中;PCR证实rBb-ESAT-6疫苗构建成功。免疫印迹分析发现重组质粒pGEX-ESAT-6的表达产物在相对分子量(35kDa)处有明显的蛋白表达条带,表达效率为20%,且能被活动性结核病人血清特异识别。鼻腔内接种组的肝、肺组织荷菌量明显低于其他免疫组。疫苗接种组IgG、IgG1、IgG2a和IgG2b明显升高,IgG3和IgE无明显变化;疫苗接种组的脾淋巴细胞明显增殖。结论成功构建了结核分枝杆菌重组Bb-ESAT-6疫苗,重组Bb-ESAT-6疫苗在抗结核分枝杆菌感染过程中具有一定免疫保护作用。
- 谢婷李文桂曾莉蓉
- 关键词：结核分枝杆菌保护力
