教育部科学技术研究重点项目(210180)
- 作品数：6 被引量：6H指数：2
- 相关作者：许金山周泽扬党晓群刘兰兰王玲更多>>
- 相关机构：重庆师范大学西南大学教育部更多>>
- 发文基金：教育部科学技术研究重点项目国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 柞蚕微孢子虫长极丝型孢子总蛋白的鉴定及功能分析被引量：1
- 2014年
- 柞蚕(Antheraea pernyi Guerin-Meneville)是中国北方重要的吐丝经济昆虫,柞蚕微孢子虫(Nosema antheraeae)引起的柞蚕微粒子病是柞蚕产业毁灭性的病害。本研究采用梯度Percoll-NaCl溶液分离纯化柞蚕微孢子虫,提取柞蚕微孢子虫总蛋白,胰蛋白酶消化,然后通过LC-MS/MS精确获得各肽段分子量,经数据库比对后共鉴定到610个蛋白。对鉴定到的蛋白质进行GO蛋白质功能分析,发现孢子时期参与大分子复合物及结构分子活性的蛋白的较多,而参与细胞催化和绑定功能、细胞过程及代谢过程的表达蛋白的所占的比例明显低于预测基因的的比例。研究认为这一结果主要与孢子期的微孢子虫脱离宿主细胞,生理不活跃,处于相对静止的时期,没有能量和物质来源有关;微孢子虫通过降低细胞活动和物质代谢,从而适应所处的环境。
- 龚娟娟许金山李治党晓群周泽扬王林玲
- 关键词：柞蚕微孢子虫蛋白质功能分析
- 四种de novo组装软件对柞蚕微孢子虫全基因组组装结果的比较被引量：1
- 2012年
- 柞蚕是一类以柞树叶为食料的经济类吐丝结茧昆虫,柞蚕微孢子是寄生在柞蚕体内的一种微孢子虫,是柞蚕微粒子病的病原,其主要通过食下传染或者母体传染来感染柞蚕。目前在分子水平上对柞蚕微孢子虫的研究还很少,本研究通过比较分析四种常见的de novo组装软件对柞蚕微孢子虫全基因组的组装,结果显示不同的软件组装的结果相差甚远,由此表明由于柞蚕基因组本身结构的特殊性及组装软件的针对性,导致了组装质量的差异性。本研究对于今后昆虫微孢子虫基因组的组装软件的选择优化提供了重要的参考。
- 刘宗林许金山周泽扬
- 关键词：微粒子病柞蚕微孢子虫DE基因组
- 家蚕微孢子虫和柞蚕微孢子虫LINE类反转录转座子R4的鉴定及系统进化分析被引量：2
- 2014年
- 反转录转座子在物种基因组的进化中发挥重要作用,LINE元件属于non-LTR反转录转座子的类型之一。通过生物信息学分析方法,鉴定了一个全长3 855 bp的柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi)LINE元件R4Na和一个全长3 970 bp的家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)LINE元件R4Nb。R4Na在柞蚕微孢子虫基因组中有4个呈串联排列的完整拷贝,其余拷贝序列结构和R4Nb的拷贝序列结构有很大差异,显示二者的变异程度很大,暗示2种微孢子虫比较古老。利用转录组高通量测序库比对,R4Nb反转录酶编码区插入的外源序列具有转录活性,暗示这段外源序列可能被招募为外显子。依据LINE元件的反转录酶结构域序列构建2种微孢子虫以及东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)、西方蜜蜂微孢子虫(Nosema apis)、按蚊微孢子虫(Anncaliia algerae)的系统进化树,结果显示R4Na和R4Nb与其它昆虫微孢子虫的R4元件具有一定相似性,而且R4元件家族在昆虫微孢子虫基因组分化过程中形成明显的3个进化群。研究结果证明家蚕微孢子虫和柞蚕微孢子虫的基因组中均存在LINE类反转录转座子,为研究2种微孢子虫的基因组结构提供了新的线索。
- 刘兰兰吴春漫张小燕许金山周泽扬
- 关键词：家蚕微孢子虫柞蚕微孢子虫
- 家蚕微孢子虫的一个Dicer相似蛋白基因的鉴定及系统进化和转录活性分析被引量：2
- 2015年
- Dicer是一种具有RNaseⅢ酶活性的蛋白质,参与RNAi起始阶段siRNA和miRNA的形成,为RNA诱导沉默复合物（RISC）形成的关键因子之一,在基因的转录后调控中扮演重要角色。采用生物信息学方法从家蚕微孢子虫（Nosema bombycis）全基因组数据中鉴定到一个Dicer相似蛋白（Dicer-like）基因,命名为Nb DCL（Gen Bank登录号：EOB15391）。预测Nb DCL的二级结构中含有RNaseⅢ结构域和dsRNA结合结构域。基于Dicer-like基因的系统进化分析显示,家蚕微孢子虫与柞蚕微孢子虫（Nosema pernyi）的亲缘关系最近,并与真菌形成姊妹枝,说明微孢子虫Dicer-like与真菌的同源基因来自共同的祖先。基因组共线性分析显示,Dicer-like基因及其两侧基因在微孢子虫基因组中的排列顺序具有显著的保守性,但兔脑炎微孢子虫（Encephalitozoon cuniculi）和比氏肠道微孢子虫（Enterocytozoon bieneusi）基因组中的Dicer-like基因在物种分化过程中发生了丢失。对Dicer-like基因和Agronaute相似蛋白基因、转座子的共存分析表明,家蚕微孢子虫等Nosema属微孢子虫均保留了古老的RNAi作用机制。RT-PCR检测被家蚕微孢子虫感染48-240 h的家蚕幼虫中肠中Nb DCL基因均有转录。研究结果为进一步探究家蚕微孢子虫RNAi的调控机制提供了有益线索。
- 王玲何承民党晓群许金山周泽扬
- 关键词：家蚕微孢子虫系统进化共线性基因转录
- 一种适用于家蚕微孢子虫膜蛋白提取的方法
- 2013年
- 细胞膜蛋白在家蚕微孢子虫对宿主细胞的抵抗性、物质能量转运和信息传递过程中发挥着重要作用,也是家蚕微粒子病诊断防控的重要候选靶标。依次采用试剂盒直接抽提法、破碎抽提同步法、破碎抽提异步法,对家蚕微孢子虫膜蛋白提取过程中的抽提时间和孢壁处理方式进行优化,通过对提取蛋白质样品的质量检测,明确最佳提取方法。SDS-PAGE检测结果表明,采用破碎抽提异步法在Buffer 2B抽提40 min时能获得较高丰度的膜蛋白,与孢子总蛋白质相比,所得膜蛋白样品中含有丰富的大小为30～170 kD的差异蛋白,进一步利用已知家蚕微孢子虫膜蛋白——类枯草杆菌蛋白酶2的抗体(anti-Nb-SLP2)进行Western blotting分析发现,膜蛋白样品中含有丰富的NbSLP2,表明破碎抽提异步法适用于孢子膜蛋白的提取。此方法的建立将有助于对家蚕微孢子虫膜蛋白的鉴定和功能研究及检测防控候选膜蛋白靶标的筛选。
- 马强李田党晓群潘国庆许金山周泽扬
- 关键词：家蚕微孢子虫膜蛋白WESTERN
- 柞蚕免疫系统相关基因ApTOLL1的克隆及两种蚕微孢子虫感染下的诱导表达被引量：1
- 2012年
- [目的]鉴定柞蚕的免疫相关TOLL样受体家族基因,以期为进一步探讨柞蚕的免疫机制奠定基础。[方法]克隆了柞蚕免疫系统相关TOLL样受体家族基因,并进行序列和系统进化分析,同时,利用两种蚕微孢子虫侵染柞蚕,检测TOLL样受体相关基因的表达差异,分析不同病原微孢子虫感染柞蚕后所引起的免疫应激差异。[结果]通过cDNA克隆测序获得一个可能与柞蚕免疫相关的基因片段,序列及系统进化分析显示它与家蚕Toll信号通路中的Toll1基因最为同源,将其命名ApTOLL1基因。进一步对柞蚕蛹分别注射家蚕微孢子虫和柞蚕微孢子虫后,通过实时荧光定量PCR技术分析显示,注射家蚕微孢子虫2 h后蚕蛹内ApTOLL1大量表达,而注射柞蚕微孢子虫11 h后蛹内该基因才开始表达,这表明柞蚕Toll信号通路针对不同病原微孢子所诱导产生的免疫响应时间有所差异。[结论]该研究结果首次克隆了柞蚕ApTOLL1基因,并为进一步研究柞蚕的免疫机制提供了帮助。
- 王丽君许金山周泽扬
- 关键词：柞蚕微孢子虫免疫防御
