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周期型马来丝虫CPI基因克隆和序列分析及编码产物B细胞表位预测被引量：3: 2010年; 目的克隆周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂（BmCPI）基因,并通过序列测定、分析及编码产物的B细胞表位预测,为进一步研究该基因的功能奠定基础.方法从周期型马来丝虫虫体中抽提总RNA,以mRNA为模板,采用RT-PCR法体外扩增BmCPI基因,扩增产物经初步鉴定后将其克隆入pGEM-T载体,转化大肠埃希菌（E.coli）DH5α,筛选阳性克隆,进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒pGEM-TBmCPI,经测序验证,并进行同源性比较.应用5种参数和方法对其编码产物进行B细胞表位预测.结果 RTPCR扩增出一条约621 bp大小的特异性条带,重组质粒双酶切的PCR结果与预期相符,DNA序列分析与GeneBank已知的基因序列同源性为99%.其编码产物经表位预测分析,B细胞表位可能在23～32、50～79、117～126位氨基酸区域.结论成功构建了周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂重组质粒pGEM-T克隆载体,并进行了序列测定及编码产物的B细胞表位预测,达到预期目标,为进一步研究该基因的功能提供条件.; 童海燕方政张赛楠徐邦生方浩黄为群谢东方石佑琴; 关键词：半胱氨酸蛋白酶抑制剂丝虫病 B细胞表位

周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶基因原核和真核表达质粒的构建被引量：2: 2007年; 目的构建我国流行的周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶(BmCP)基因原核和真核表达质粒,为进一步研究奠定基础。方法从周期型马来丝虫虫体中提取总RNA,反转录成cDNA,设计合成引物,以cDNA为模板,通过PCR从cDNA中扩增出目的基因,扩增产物经初步鉴定后将其克隆人pMD18-T载体.进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒,进行测序分析和同源性比较。阳性克隆的质粒亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+).转化感受态大肠埃希菌(E.coli)DH5α,筛选阳性克隆,用PCR和双酶切鉴定阳性重组子。结果RT-PCR扩增出1条约1201 bp的特异性条带,重组质粒双酶切和以质粒为模板的PCR结果与预期相符,DNA序列分析与GenBank已知的基因序列同源性为99%。构建了真核重组表达质粒peDNA3.1-BmCP。结论成功构建了周期型BmCP原核和真核重组表达质粒,为进一步研究该基因的功能提供了条件。; 方政黄为群陈阳谢东方姜声扬吴建军; 关键词：马来丝虫半胱氨酸蛋白酶真核表达质粒

周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶基因的扩增、克隆及序列分析被引量：2: 2007年; [目的]克隆周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶(cysteine protease of periodic Brugiamalayi,BmCP)基因到原核载体中,测定其序列,为进一步的研究奠定基础。[方法]从周期型马来丝虫虫体中抽提总RNA,以mRNA为模板,采用RT-PCR法体外扩增出BmCP基因序列,扩增产物经初步鉴定后将其克隆入pMD18-T载体,转化大肠杆菌(E.coli)DH5α,筛选阳性克隆,进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒pMD18-T-BmCP,经测序验证,并进行同源性比较。[结果]RT-PCR扩增出一条约1201bp大小的特异性条带,重组质粒双酶切和以质粒为模板的PCR结果与预期相符,DNA序列分析与GeneBank已知的基因序列同源性为99%。[结论]成功构建了周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶重组质粒pMD18-T克隆载体,为进一步研究该基因的功能提供了条件。; 黄为群方政陈阳姜声扬吴建军谢东方; 关键词：周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶基因克隆

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江苏省教育厅自然科学基金(04KJD310136)