Mounting evidence has shown that side population(SP)cells are enriched for cancer stem cells(CSCs)responsible for cancer malignancy.In this study,SP technology was used to isolate a small subpopulation of SP cells in human gallbladder cancer cell line GBC-SD,and SP cells which had superior potential for proliferation in vitro and tumorigenesis in vivo were identified.Importantly,the abundance of GBC-SD SP cells was increased by a transforming growth factor-β(TGF-β)-induced epitheli-al-mesenchymal transition(EMT),and this effect was accompanied with a strong up-regulation of ABCG2 mRNA expression,and a decreased sensitivity to mitoxantrone.SP cells were restored upon the removal of TGF-β and the reversion of the cells to an epithelial phenotype,and smad3-specific siRNA reduced SP abundance in response to TGF-β.In conclusion,TGF-β-induced EMT by smad-dependent signaling pathway promotes cancer development and anti-cancer drug resistant phenotype by augmenting the abundance of GBC-SD SP cells,and a better understanding of mechanisms involved in TGF-β-induced EMT may provide a novel strategy for preventing cancer progression.
目的探索在人胆囊癌细胞系中是否存在具有干细胞特性的SP细胞（side population cells）以及SP细胞、非SP细胞、GBCSD细胞系之间在耐药基因ABCG2和胚胎干细胞表面标志Oct-4表达方面的差异性。方法采用FACS（流式激活细胞分选）技术分选出人胆囊癌SP细胞和非SP细胞，通过RTPCR、Western blot以及流式技术来检测SP细胞、非SP细胞以及GBC—SD细胞系在ABCG2和Oct-4表达方面的差异情况。结果人胆囊癌GBC—SD细胞系中存在着具有干细胞潜能的SP细胞，其所占的比例为（0．64±0．08）％。并且ABCG2在胆囊癌SP细胞中呈现出高表达的状态[（89．56±3．86）%]．在非SP细胞中几乎不表达[（1．32±0．49）％]，两者之间的差异具有统计学意义（P〈0．05）．在GBCSD细胞系中呈弱表达[（12．37±1．61）％]。Oct-4在三种细胞中的表达分别为：（94．87±1．40）％、（88．16±2．34）％、（90．17±1．61）％，三者之间差异没有统计学意义（P〉0．05）。结论人胆囊癌的起源与肿瘤干细胞密切相关并且在胆囊癌细胞系中存在着具有干细胞特性并且高表达耐药基因ABCG2的人胆囊癌SP细胞。
目的研究人胆囊癌细胞系GBC—SD侧群细胞（side population cells，SP）的致瘤特性。方法利用流式细胞术从GBC—SD中分选SP、非SP细胞（non—SP），分别进行软琼脂克隆形成实验和非肥胖性糖尿病联合免疫缺陷（NOD／SCID）小鼠的移植瘤形成实验。通过流式细胞术检测5例人胆囊癌组织中SP细胞的比例。结果人胆囊癌细胞系GBC-SD中存在SP细胞，其比例约为0．87％；SP细胞的克隆形成率高于non-SP细胞（14．74％±3．53％比5．17％±1．05％，t=2．75，P〈0．05）。NOD／SCID小鼠移植瘤实验表明，5×10^3个SP细胞可成瘤（4／7），而non—SP细胞成瘤则需要1×10^5个细胞（1／7），且来源于SP细胞亚群的NOD／SCID小鼠移植瘤中存在SP、non—SP细胞。SP细胞存在于人胆囊癌组织中，其范围为0．27％～2．3％。结论来源于GBC—SD的SP细胞亚群具有类似肿瘤干细胞的高致瘤性。
目的:探索在人胆囊癌GBC-SD细胞系中是否存在具有干细胞特性的SP细胞(side population cells),以及SP细胞、非SP细胞和GBC-SD细胞系表达常见干细胞标记物ABCG2、Oct-4、CD34的情况。方法:采用荧光激活细胞分选技术(FACS)分选出人胆囊癌SP细胞和非SP细胞,通过RT-PCR、Western blot、流式细胞术以及免疫荧光化学技术检测SP细胞、非SP细胞以及GBC-SD细胞系表达ABCG2、Oct-4和CD34的情况。结果:人胆囊癌GBC-SD细胞系中存在着少量的具有干细胞潜能的SP细胞,其所占的比例为(0.64±0.08)%,SP细胞相对于非SP细胞和GBC-SD细胞,具有更强的体外侵袭力(P<0.05);并且ABCG2在胆囊癌SP细胞中呈现出高表达的状态(89.56±3.86)%,在非SP细胞中几乎不表达(1.32±0.49)%,在未分选胆囊癌细胞系中ABCG2呈弱表达(12.37±1.61)%,P=0.001;Oct-4在三种细胞中的表达分别为:(94.87±1.40)%、(88.16±2.34)%、(90.17±1.61)%,P>0.05;CD34在mRNA水平高表达于非SP细胞和GBC-SD细胞,不表达于SP细胞;在蛋白水平几乎均不表达于这三种细胞,其含量依次为:(1.78±0.51)%、(0.63±0.21)%、(0.96±0_38)%,P>0.05。结论:人胆囊癌GBC-SD细胞系中存在具有干细胞特性的SP细胞,并且具有ABCG2^+Oct-4^+CD34^-的表型特征。
目的研究人胆囊细胞系GBC—SD中侧群细胞（side population cells，SP）的耐药特性，并探讨其耐药机制。方法利用流式细胞术分选SP、非sP细胞，采用MTT检测2种细胞亚群对5种化疗药物吉西他滨、顺铂、5-氟尿嘧啶、表阿霉素、米托蒽醌的药物敏感性；利用流式细胞术检测吉西他滨处理的人胆囊癌细胞系GBC—SD中SP细胞比例的变化，并通过RT—PCR、Western印迹检测SP、非SP细胞亚群中ABCG2mRNA和蛋白的表达。结果吉西他滨、顺铂、5-氟尿嘧啶、米托蒽醌以对胆囊癌细胞系GBC—SD的IC50浓度分别作用SP、非SP细胞亚群1d后，SP细胞的增殖能力高于非SP细胞，两组之间的差异具有统计学意义（P〈O．05），而表阿霉素处理水平的两组间差异无统计学意义（P〉O．05）；人胆囊癌细胞系GBC—SD经过吉西他滨处理3周后，sP细胞的比例显著升高（8．02％±0．13％比0．62％±0．08％，P〈O．05），且SP细胞明显高表达ABCG2基因。结论人胆囊癌细胞系GBC—SD中sP细胞具有类似干细胞的耐药特性，耐药基因ABCG2高表达是其耐药的重要机制。
目的探索在人胆囊癌GBC-SD细胞系中是否存在具有干细胞特性的SP细胞（side population cells）群。方法采用荧光激活细胞分选技术（FACS）分选出人胆囊癌SP细胞、非SP细胞。培养3～5周后再次进行FACS，用以检测SP细胞的分化情况。利用流式细胞术检测ABCG2蛋白在SP细胞的表达。结果SP细胞群在人胆囊癌GBC-SD细胞中占（0．64±0．08）％，分离出的SP细胞在培养3～5周后会产生SP细胞和非SP细胞，而非SP细胞则不具备此特性；并且ABCG2在胆囊癌SP细胞群中呈现出高表达状态[（89．56±3．86）％]，在非SP细胞中几乎不表达[（1．32±0．49）％]，两者之间的差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论人胆囊癌GBC-SD细胞系中存在着很少量的干细胞样SP细胞群，并且高表达ABCG2。
