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排序方式：

片形吸虫第一内转录间隔区DNA多态性的研究被引量：12: 2004年; 以不同地区的片形吸虫虫株为研究对象 ,经PCR扩增出了ITS 1部分基因片段 ,采用单链构象多态性 (SSCP)方法 ,并结合序列分析研究了不同地区片形吸虫ITS 1DNA的多态性。不同地区的样品经SSCP分析 ,显示 3种带型 ,第 1种为大片形吸虫的带型 ,第 2种为肝片形吸虫的带型 ,第 3种为 2种带形的混合带型。广西区样品和大部分贵州省样品属于大片形吸虫带型 ;四川省、黑龙江省和部分贵州省样品为混合带型 ;南京市和甘肃省样品为肝片形吸虫带型或混合带型。测序结果表明 ,根据ITS 1基因的序列变异位点可区分 2种片形吸虫 ;表现为混合带型的样品在变异位点具有多态性。本研究结果显示 ,ITS 1片段可作为遗传标记用以区分大片形吸虫和肝片形吸虫 ,同时也证实 ,在我国除了这 2种片形吸虫外 ,还可能存在着“中间型”; 林瑞庆董世娟胥楚雄黄维义宋慧群朱兴全; 关键词：片形吸虫 ITS-1 单链构象多态性

大片吸虫成虫cDNA表达文库的构建及其表达序列标签初步分析被引量：5: 2005年; 为发现潜在的抗大片吸虫病的候选疫苗分子,控制大片形吸虫病,本研究以大片吸虫成虫为材料,应用SMARTTcDNA文库构建技术,构建了以表达载体λTriplEx2为基础的大片吸虫成虫cDNA表达文库。经测定,库容量为1·08×106PFU/ml ,重组率为96·6 %,扩增后的文库滴度为2·41×109PFU/ml ,插入片段平均大小约为1 000 bp;经大肠杆菌BM25·8质粒化后,从文库中随机挑选40个重组克隆测序,获得32条有效ESTs ;经BLASTX和BLASTn程序检索和分析,发现有9条ESTs代表已知基因, 16条ESTs相似性较低或无匹配,列为新基因。9条已知基因代表了半胱氨酸蛋白酶、卵壳蛋白、钙连接蛋白等三类功能蛋白,其余新基因也暗示与信号传导、蛋白合成、免疫刺激等基因相关,具有潜在的研究价值[动物学报51 (5) : 879 -883 , 2005]。; 罗洪林张为宇郑小龙黄维义; 关键词：大片吸虫 CDNA表达文库表达序列标签基因

应用LD-PCR法构建大片吸虫成虫cDNA表达文库被引量：3: 2005年; 为构建大片吸虫成虫cDNA表达文库,用Trizol试剂提取大片吸虫成虫总RNA,经反转录合成cDNA第一链,应用LD-PCR扩增方法,合成双链cDNA。用SfiⅠ内切酶修饰此双链cDNA,使形成两端分别带有SfiⅠA和SfiⅠB的黏性末端。经CHROMA SPIN-400柱纯化,收集400 bp以上的双链cDNA片段,将其连接于带有SfiⅠA和SfiⅠB末端的λTriplEx2噬菌体载体,经体外包装后,以XL1-Blue为受体菌构建cDNA表达文库。经测定,库容量为1.08×106PFU/mL,重组率为96.6%。扩增后的文库滴度为2.41×109PFU/mL,插入片段平均大小约为1 000 bp。这些结果表明已成功构建大片吸虫成虫cDNA表达文库,适合进一步筛选大片吸虫新基因。; 罗洪林张为宇郑小龙黄维义; 关键词：大片吸虫 CDNA表达文库

我国片形吸虫(Fasciola)线粒体细胞色素c氧化酶亚基基因(cox1)部分序列的多态性被引量：21: 2005年; 用33P对引物进行标记,对来自国内不同地区不同宿主的片形吸虫(Fasciola)的线粒体基因组细胞色素氧化酶亚基基因(pcox1)部分序列进行PCR扩增及DNA单链构象多态性(SSCP)分析,结果76个虫体均成功地扩增出约450bp的基因片段;SSCP分析显示,不同地区或同一地区的不同样品在pcox1的SSCP带型上存在多态性;代表性样品的测序结果表明,其碱基序列存在差异。试验结果显示,我国片形吸虫pcox1序列种内变异不明显,种间变异显著,表明cox1序列可以作为片形吸虫分类鉴定中一个可靠的遗传标记。; 董世娟黄维义林瑞庆钱德兴吴绍强宋慧群朱兴全; 关键词：片形吸虫 PCR-SSCP 多态性

大片吸虫成虫FG0018表达序列标签序列的电子克隆分析及实验验证被引量：3: 2005年; 用大片吸虫成虫FG0018表达序列标签(Expressed Sequence Tags,ESTs)序列对NCBI数据库进行Blastn比较,采用生物信息学方法,运用网上数据库资源,结合相关生物信息学软件将目标序列进行搜索、处理、拼接、延伸,得到的最后重叠群(contig,命名为FG0018C0N)与肝片吸虫卵壳蛋白B2序列(GenBank:M93025)相似性很高,用DNASTAR、SEQMAN程序和Blast2程序分析FG0018C0N,推测其开放阅读框为930 bp,编码310个氨基酸,蛋白质的特点及跨膜区预测其编码蛋白可能属于核蛋白,疏水性分析表明其编码一疏水蛋白。FG0018C0N基因与肝片吸虫卵壳蛋白基因有100%的相似性,310个氨基酸与之有91%的一致性。经RT_PCR、酶切验证并cDNA测序,结果证明FG0018C0N序列可能是大片吸虫的卵壳蛋白基因。; 罗洪林郑小龙张为宇覃华黄维义; 关键词：生物信息学大片吸虫电子克隆表达序列标签

片形吸虫总RNA的提取及其L-rRNA的初步分析被引量：5: 2005年; 目的为构建大片吸虫 c DNA文库 ,获得目的重组抗原 ,用以大片吸虫病的诊断及其表达序列标签 (EST)的获取 ,本试验制备了大片吸虫的总 RNA。采用 Trizol试剂 ,结合使用饱和酚、氯仿及冰乙醇从大片吸虫成虫提取总 RNA,同样方法提取了肝片吸虫总 RNA和巴马香猪的总 RNA,并作甲醛变性电泳比较。三者的总 RNA经 1 %甲醛变性电泳 ,观察到 2条主要目的带 ,分别是 2 8S和 1 8S,其中 1 8S明显较 2 8S色深且明亮 ,2 8S稍显模糊。本次试验获得纯度较高 ,完整性较好 ,无污染的总RNA,并证明大片吸虫和肝片吸虫的 L- r RNA中不存在切口现象。; 罗洪林黄维义张为宇; 关键词：大片吸虫肝片吸虫总RNA 凝胶电泳

我国片形吸虫线粒体NADH脱氢酶亚单位1基因(nad1)多态性的研究被引量：6: 2005年; 用γ33P对引物进行标记,首次对来自国内不同地区、不同宿主的片形吸虫线粒体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶亚单位Ⅰ基因部分序列(pnad1)进行PCR扩增及DNA单链构象多态性(PCR_SSCP)分析,结果76个虫体均成功地扩增出约200bp的基因片段;76个样品经过PCR_SSCP分析后,筛选出11个代表性样品进行测序。测序结果显示我国片形吸虫pnad1序列种间差异大于种内变异,表明nad1序列可以作为片形吸虫种内和种间遗传多态性研究的标记。; 黄维义董世娟杨晓野林瑞庆钱德兴张为宇宋慧群朱兴全; 关键词：PCR-SSCP 多态性

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国家自然科学基金(30260082)