北京市自然科学基金(5062014)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：廖志勇陈晓丽吴明江张霆吴丽华更多>>
- 相关机构：首都儿科研究所温州大学江西师范大学更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金江西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 稳定表达GHR基因和突变体的CHO细胞株的构建及其功能分析被引量：1
- 2010年
- 目的构建稳定表达先天性生长激素不敏感综合征相关基因-hGHR及突变体(hGHR-E42K、hGHR-H56R)的CHO细胞株,测定野生株和突变株的STAT5-磷酸化水平。方法利用已有的PUC-hGHR质粒,定点突变获得2个hGHR突变体(hGHR-E42K、hGHR-H56R),限制性酶切法将目的基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1/(zeo+);然后用Lipofectamine2000将重组子转染至CHO细胞,通过Zeocin抗性筛选稳定表达hGHR及突变体的细胞群;并用RT-PCR和Western blot证实hGHR、STAT5-P表达水平。结果测序验证hGHR的E42K和H56R错义突变成功引入,并克隆到真核表达载体;转染后在CHO细胞株中成功检测到hGHR和突变体的mRNA和蛋白;突变细胞株(E42K、H56R)的磷酸化STAT5蛋白表达量低于野生株。结论成功构建携带稳定表达hGHR及突变体的CHO细胞株,E42K、H56R突变部分阻碍STAT5蛋白进行磷酸化。
- 吴丽华陈晓丽唐文琴张霆廖志勇
- 关键词：CHO细胞突变体
- 中华鲟生长激素受体的分子克隆和功能分析被引量：1
- 2009年
- 为研究生长激素对中华鲟生长的调控机制,克隆了中华鲟生长激素受体cDNA.csGHRcDNA的可读框编码了611个氨基酸残基的跨膜蛋白质,含有GHR的所有特征结构域.序列对比发现其他种属GHR中高度保守的氨基酸残基在csGHR中发生了替换.我们利用CHO细胞分析了csGHR的生物功能和csGHR分子中高度保守性氨基酸残基替换的生物意义.csGHR稳定表达细胞中共转染的受丝氨酸蛋白酶抑制剂2.1(Spi1.2)启动子驱动的荧光素酶报告基因受海鲤生长激素(seabream GH,sbGH)诱导表达,并且sbGH诱导稳定表达细胞显著增殖.csGHR稳定表达细胞培养液中检测到中华鲟生长激素结合蛋白质,并且csGHBP的生成需要金属蛋白酶活性的参与.csGHR配体结合域的Asp突变为Glu显著提高csGHR介导的上述生物活性,而Asp突变为Ala则明显降低csGHR的生物活性.这些结果表明,克隆的csGHR具有完全生物功能,并且csGHBP可能通过csGHR蛋白酶解而生成.这些发现将有助于全面了解中华鲟生长调控机制.
- 廖志勇吴明江陈晓丽
- 关键词：中华鲟生长激素受体克隆突变
