北京市自然科学基金(5062012)
- 作品数:8 被引量:40H指数:5
- 相关作者:吴忠义黄丛林张秀海王玉华王永勤更多>>
- 相关机构:北京市农林科学院农业生物技术研究中心首都师范大学南京农业大学更多>>
- 发文基金:北京市自然科学基金国家自然科学基金陕西省教育厅自然科学基金更多>>
- 相关领域:农业科学生物学更多>>
- 采用RNA干扰技术分析拟南芥Ca^(2+)泵基因ECAJ的功能被引量:3
- 2008年
- 构建了含拟南芥Ca^(2+)泵基因ECA1特异片段反向重复结构的RNA干扰(RNAi)载体,以根癌农杆菌介导转化拟南芥,用卡那霉素筛选和PCR检测,获得了11个T_3代纯合体转基因株系;半定量RT-PCR方法检测ECA1在转基因株系中转录的结果表明,其转录产物比野生型(WT)明显低,且转基因株系之间差异明显,表达水平有一个梯度关系;在1/2MS培养基上转基因株系与野生型的差异不明显,相对于野生型而言,在相对低Ca^(2+)(0.2mmol·L^(-1))或相对高Mn^(2+)(0.5 mmol·L^(-1))的培养基上的转基因株系生长受到不同程度的抑制,ECA1转录量越低,生长受到的抑制越大。据此认为:ECA1对植物的生长发育和抵御逆境胁迫有作用。
- 朱炜黄丛林张秀海王永勤魏建民于荣吴忠义
- 关键词:RNA干扰(RNAI)转录后基因沉默
- 甘薯叶绿体rbcL基因的克隆与序列分析被引量:7
- 2008年
- 根据烟草、水稻和菠菜叶绿体的全基因组序列设计引物,以甘薯的叶绿体基因组DNA为模板,PCR扩增包含甘薯叶绿体rbcL完整基因(GenBank登录号为AY942199)在内的一段序列。序列分析表明:此片段的全长为1627bp,包括1443bp的编码区序列在内,推测编码480个氨基酸,同时构建了此片段的限制性酶切图谱。相似性比较显示,此基因编码区序列与烟草、菠菜、小麦、水稻、玉米、矮牵牛、紫花苜蓿、拟南芥、莨菪、葡萄以及甜菜的rbcL基因核苷酸的同源性为85%~98%,氨基酸的同源性为92%~95%。
- 王玉华吴忠义贾敬芬张秀海黄丛林
- 关键词:甘薯叶绿体基因RBCL基因
- 玉米叶绿体表达载体构建及绿色荧光蛋白基因瞬时表达检测被引量:4
- 2008年
- Tps1是生物保护物质海藻糖的关键合酶基因。构建含Tps1的玉米叶绿体表达载体,首先从玉米叶绿体基因组中克隆16S/trnI-trnA/23S片段,作为定点整合同源片段;然后将编码酵母海藻糖合酶基因Tps1表达盒(Prrn-Tps1-TpsbA-ter)、草丁膦抗性基因Bar表达盒(RpsbApro-Bar-RpsbAter)、卡那霉素抗性基因Npt II和绿色荧光蛋白基因Gfp构建的融和基因表达盒(Prrn-Npt II/Gfp-RrbcLter)一起克隆到定点整合同源片段之间,构建了玉米叶绿体的稳定表达载体mTKGB。通过基因枪轰击法将mTKGB转化到玉米幼嫩叶片中,培养2 d后,在激光扫描共聚焦显微镜下观测到玉米一些细胞的叶绿体中有很强的GFP绿色荧光,结果表明构建的载体可在玉米叶绿体中表达。
- 赵彤黄丛林张秀海于荣王永勤吴忠义
- 关键词:玉米
- 海藻糖的应用及其合酶基因TPS在植物转基因中的研究进展被引量:5
- 2009年
- 海藻糖是一种非还原性双糖,具有很高的稳定性和很强的吸水性等性质,能够提高生物体对各种非生物胁迫的抵抗能力。目前有很多研究表明通过转化海藻糖合酶基因增加体内海藻糖含量可能成为选育作物抗逆品种的新方法。该文对海藻糖的理化性质、生物学特性及其应用情况作了简要的概述,并介绍了编码酵母海藻糖合酶复合体基因的组成以及各个组成基因的功能,着重阐述了海藻糖合酶基因在植物转基因方面(尤其在提高植物抗逆性)的研究进展。
- 刘占磊黄丛林张秀海吴忠义
- 关键词:海藻糖抗逆性
- 密度对不同玉米杂交组合穗部性状及产量构成因素的影响被引量:5
- 2015年
- 利用4个新组配的玉米杂交组合,研究3种不同密度对其穗部性状及产量构成因素的影响。结果表明,随着密度的增加,穗长、穗粒数、百粒重在逐渐减少;出籽率变化有所不同,组合1和组合4表现为增加,组合2与其相反,组合1和组合3的变化不明显;秃尖长、空秆率均呈增加的趋势,而穗粗、穗行数、粒深及品质等性状所受影响较小。方差分析显示,组合间、密度间及两者间的互作均达到显著和极显著水平;4个组合的产量受密度影响较大,除组合2外,增加密度对其余3个组合增产有利,且在密度超过75 000株·hm-2时,产量均高于对照,说明密度在其增产过程中起着关键作用。
- 李向龙张晓东张中宝张立全吴忠义
- 关键词:玉米穗部性状产量构成因素
- 花粉管通道法在玉米基因工程改良中的应用被引量:10
- 2010年
- 利用转基因技术对玉米进行遗传改良,培育出具有不同特殊优良性状和不同用途的玉米品种,为解决目前玉米生产上的众多问题提供了一条行之有效的新途径,并显示出巨大的作用和潜力。对花粉管通道法转化机理及其在玉米基因工程改良中的应用情况进行综述,分析了该方法的优点及存在问题,并对其应用前景进行展望。
- 李志亮李志亮吴忠义杨清张秀海
- 关键词:玉米基因工程花粉管通道法
- phaG和phaC基因在烟草叶绿体中的转化及其遗传分析被引量:1
- 2009年
- 中长链羟基脂肪酸聚酯(medium-chain-length-PHAs,mcl-PHAs)属于微生物聚酯。羟酰-CoA-ACP-转移酶和II型PHA合酶是mcl-PHAs生物合成途径中的两个关键酶。将编码羟酰-CoA-ACP-转移酶的基因phaG与水稻叶绿体psbA基因的启动子和终止子连接构建表达盒RpsbA-pro-phaG-RpsbA-ter,将II型PHA合酶的基因phaC与水稻叶绿体16SrRNA基因的强启动子Prrn及rbcL基因的终止子连接构建表达盒prrn-phaC-RrbcL-ter,连同壮观霉素抗性基因aadA表达盒prrn-aadA-TpsbA-ter一起克隆进烟草叶绿体基因组同源片段rbcL和accD之间,得到烟草叶绿体表达载体pTGC。用包裹有质粒pTGC的金粉子弹轰击烟草无菌苗叶片,经壮观霉素筛选后获得6株叶绿体型转基因植株。对T0代和T1代转基因植株进行PCR检测和Southern blot分析表明,外源基因已整合进烟草叶绿体基因组中,且T1代转基因植株已同质化。RT-PCR分析结果证实外源基因已在转录水平上表达。转基因植株的自交及正反交结果表明,外源基因在转基因后代中能够稳定遗传,遗传方式遵循母性遗传规律,不存在转基因的花粉漂移现象。
- 王玉华吴忠义张秀海王永勤黄丛林贾敬芬
- 关键词:烟草叶绿体转化