北京市优秀人才培养资助(2011D003034000022)
- 作品数：9 被引量：53H指数：4
- 相关作者：段钟平任锋时红波陈德喜张向颖更多>>
- 相关机构：首都医科大学附属北京佑安医院山西医科大学第二医院西安交通大学更多>>
- 发文基金：北京市优秀人才培养资助“首都临床特色应用研究”专项王宝恩肝纤维化研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- 内质网应激与病毒性肝炎被引量：3
- 2013年
- 在病理条件下,未折叠蛋白或者错误折叠蛋白在内质网内的大量聚集,影响内质网的稳态和正常功能,引发未折叠蛋白反应,称为内质网应激。研究表明,内质网应激对细胞凋亡、炎症反应以及病毒复制都有影响,因此参与各种肝病的发生和发展。本文重点对内质网应激和病毒性肝炎的关系进行阐述。
- 杨丙章任锋段钟平师水生
- 关键词：内质网应激炎症病毒性肝炎未折叠蛋白反应
- 新发传染病教学现状及教学改进被引量：18
- 2013年
- 新发传染病给人类生命、财产造成巨大损失,人类面临着新发传染病的严重威胁。因此,新发传染病对医务工作者和医学教学人员的认识和知识更新都提出了更高的要求。目前我国高等医学院校在新发传染病学课程的教学方面尚处于起步阶段。本文对新发传染病的定义和分类进行了简单介绍,对新发传染病教学中存在的问题和不足进行了分析,并对新发传染病的教学模式改进进行了探讨,以期达到不断优化教学模式,改革教学内容和方法,从而提高教学质量的目的。
- 任锋师社会刘梅段钟平
- 关键词：新发传染病临床教学教学模式
- 细胞自噬与肝脏疾病被引量：3
- 2013年
- 自噬，又称为细胞的自体溶解，是细胞生长、分化、存活和自我平衡的重要途径，是细胞内的物质成分利用溶酶体被降解过程的统称。细胞在缺乏营养和能量供应时，部分细胞质与细胞器被包裹进一种特异性的双层膜或者多层膜结构的自噬体（autophagosome）中形成自噬体，再与溶酶体融合形成自噬溶酶体（autolysosome），胞质和细胞器成分在这里被降解为核苷酸、氨基酸、游离脂肪酸等小分子物质，这些小分子物质可以被重新利用合成大分子或者合成ATP。近来有大量文献显示，自噬参与肝脏疾病的多个领域，本文就自噬及其在肝脏疾病中的作用作一综述。
- 魏琳琳周莉任锋段钟平
- 关键词：细胞自噬肝脏疾病小分子物质降解过程游离脂肪酸细胞生长
- 氧化应激介导糖原合成酶激酶-3β促进肝细胞凋亡被引量：12
- 2015年
- 目的探讨糖原合成酶激酶-3β(GSK3β)在氧化应激诱导肝细胞凋亡中的作用。方法以人肝HL-7702细胞为研究对象,H2O2/抗霉素A诱导细胞产生氧化应激,建立肝细胞凋亡模型。SB216763为GSK3β特异性抑制剂,在H2O2/抗霉素A给药前2 h干预。采用钙黄绿素乙酰甲酯/碘化丙啶(PI)双染色观察细胞存活情况,采用annexinⅤ-FITC/PI联合流式细胞术检测细胞凋亡,同时对细胞培养上清进行乳酸脱氢酶(LDH)检测来评价细胞死亡程度;Western blot法检测p-GSK3β、GSK3β、caspase-3、cleaved caspase-3、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和细胞色素C(Cyt C)蛋白的表达。结果 H2O2/抗霉素A诱导的氧化应激促进了GSK3β活性增加,抑制GSK3β活性缓解了氧化应激和由氧化应激引起的细胞凋亡。与氧化应激模型组相比,SB216763干预组中PI染色的细胞显著减少,流式细胞术检测细胞凋亡率降低,细胞培养上清中LDH显著降低,Western blot法结果显示干预组中cleaved caspase-3、JNK、Cyt C蛋白表达下降。结论 GSK3β是氧化应激诱导细胞凋亡通路中的一种重要信号分子,抑制其活性可减轻氧化应激而改善肝细胞凋亡。
- 张向颖郭媛媛张莉温韬朴正福时红波陈德喜段钟平任锋
- 关键词：氧化应激细胞凋亡糖原合成酶激酶-3Β
- 抑制糖原合成酶激酶3活性对Toll样受体4介导肝脏炎症反应的调节作用被引量：7
- 2012年
- 目的研究抑制糖原合成酶激酶3p（GSK-3p）活性对Toll样受体4介导的炎症反应的调节作用。方法以C57BL／6小鼠为研究对象，分别建立不同灌注时间的小鼠热缺血再灌注损伤模型以及通过腹腔注射脂多糖（LPS）建立小鼠肝脏炎症模型；通过小鼠的股骨分离出骨髓干细胞，经过分化培养获得骨髓来源的巨噬细胞，随后通过LPS激活TLR4配体引发炎症细胞模型。通过SB216763抑制GSK-3D活性，分别干预小鼠肝脏炎症模型和炎症细胞模型。通过Westemblot检测肝脏丝裂原活化蛋白激酶的表达；实时定量PCR方法检测细胞炎症因子的基因表达。用SPSSl3．0统计软件进行单因素方差分析，用LSD-t检验进行组间比较。结果在肝脏缺血再灌注过程中，丝裂原活化蛋白激酶（包括ERK、JNK和p38）的磷酸化水平在灌注1h后增加，ERK、JNK和p38的活性升高，但在4h后，这种活洼激活消失，回归到起始水平。此外，LPS刺激巨噬细胞激活ERK、JNK在15rain被磷酸化而激活，p38蛋白在1h左右磷酸化而被激活。SB216763预处理一定程度上抑制了LPS刺激巨噬细胞的ERK、JNK和p38蛋白磷酸化的激活。无论是小鼠肝脏炎症模型还是炎症细胞模型，GsK-3p活性抑制均促进了抗炎细胞因子白细胞介素10（IL-10）的表达，而显著抑制了促炎细胞因子IL-12、肿瘤坏死因子（TNF）α，IL-6和IL-1D的基因表达。在对照组、炎症组及SB216763干预组小鼠炎症模型中炎症因子基因表达结果显示，IL-10相对表达量分别为0．21±0．08，0．83±0．21，1．76±0．67，F=3．16，P=0．027；IL-12相对表达量分别为0．11±0．05，0．85±0．11，0．43±0．10，F=2．67，P=0．0381TNFα相对表达量分别为0．052±0．012，8．11±0．98，3．9±0．82，F=4．13，P=0．016；IL-1β相对表达量分别为0．12±0．07，2．51±0．62，1．28±0．33，F=2．22，P=0．030；IL-6相对表达量分别为0．22±0�
- 任锋张海燕朴正福郑素军陈煜陈德喜段钟平
- 关键词：肝脏再灌注损伤炎症糖原合成酶激酶3
- 内质网应激介导糖原合成酶激酶-3β促进肝细胞凋亡被引量：1
- 2012年
- 目的探讨细胞内信号分子GSK3β在内质网应激（ERS）诱导肝细胞凋亡中的作用。方法以小鼠肝癌细胞株Hepa1细胞为研究对象，化学药物衣霉素（20μg/m1）为ERS诱导剂，建立肝细胞凋亡模型。化学药物SB216763特异性抑制GSK3β活性，在衣霉素诱导细胞凋亡前1h给予干预处理。乙酰氧基甲酯（AM）／碘化丙啶（propidiumiodide，PI）对活细胞／凋亡细胞进行检测；再利用培养细胞上清乳酸脱氢酶（LDH）的检测评价细胞死亡情况；Westernblot检测p-GSK313蛋白、ERS相关凋亡蛋白GRP78、CHOP、caspase-12以及caspase-3、cleavedcaspase-3蛋白的表达。结果研究表明，衣霉素诱导的ERS促进GSrdβ活性升高；抑制GSK3β活性缓解了衣霉素诱导的ERS：GRP78、CHOP和easpase-12的表达被抑制；与此同时抑制GSK3β活性显著减轻了ERS诱导的Hepa1细胞凋亡。与ERS诱导Hepa1凋亡模型组相比，SB216763干预组PI染色的凋亡细胞显著减少，培养细胞上清中的LDH显著下降；此外，Westernblot结果显示GSK3β活性抑制减少了cleavedcaspase-3活性蛋白的表达。结论GSK3β是ERS诱导细胞凋亡通路中的一种重要信号分子，抑制GSK3β活性通过减轻ERS而改善肝细胞凋亡。
- 杨丙章任锋温韬朴正福郑素军张晶陈煜陈德喜段钟平师水生
- 关键词：内质网应激细胞凋亡糖原合成酶激酶-3Β
- 内质网应激协同促进脂多糖诱导的巨噬细胞炎症反应被引量：4
- 2015年
- 目的研究内质网应激对脂多糖诱导巨噬细胞引发炎症反应的影响，探讨抑制内质网应激改善急性肝衰竭肝损伤的保护机制。方法通过小鼠的股骨分离骨髓干细胞，经过分化培养获得骨髓来源的巨噬细胞，再通过脂多糖诱导炎症反应细胞模型。试验分为正常巨噬细胞组、脂多糖处理巨噬细胞组和衣霉素与脂多糖联合处理巨噬细胞组。通过实时定量PCR法检测巨噬细胞炎症细胞因子肿瘤坏死因子（TNF）仅、白细胞介素（IL）-6和IL-1β的基因表达水平；用酶联免疫吸附法检测巨噬细胞培养上清液中TNFα的蛋白表达水平；通过Western blot检测巨噬细胞中炎症相关信号通路细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）、c—JunN末端蛋白激酶（JNK）和p38丝裂原活化蛋白激酶（p—p38MAPK）磷酸化水平的表达情况。多组之间均数的比较采用方差分析。结果脂多糖作用于巨噬细胞后，炎症因子TNFα、IL-1β和IL-6的相对基因表达水平明显升高，在4h时达到最高水平，分别为0．82±0．24、2．20±0．69、0．330±0．150；在用衣霉素干预炎症细胞后，则进一步上调TNFα、IL-6和IL-1β的表达水平（TNFα（1．44±0．38，=9．11，F〈0．05；IL-1β：16．00±3．40，F=12．29，P〈0．05；IL-6：31．10±10．60，F=21．37，P〈0．05）。Western blot结果显示，衣霉素干预后进一步促进了脂多糖诱导的p—p38MAPK、p—JNK和P—ERK的蛋白表达。结论内质网应激显著增强脂多糖刺激巨噬细胞诱导的炎症反应，因此内质网应激协同脂多糖诱导的炎症反应可能是内质网应激促进急性肝衰竭肝损伤发生和发展的致病机制之一。
- 郭向华任锋张向颖时红波陈德喜段钟平
- 关键词：内质网脂多糖类TOLL样受体4
- 糖原合成酶激酶3β在乙型重型肝炎肝衰竭中的作用研究被引量：5
- 2016年
- 目的探讨细胞内信号分子糖原合成酶激酶（GSK）30在HBV引起的重型肝炎肝衰竭发生过程中的作用。方法收集2009年至2011年北京佑安医院就诊患者中慢性乙型肝炎患者（12例，慢乙型肝炎患者组）和HBV感染引起的重型肝炎肝衰竭患者（12例，乙型重型肝炎肝衰竭组）以及正常人（8例，对照组）的肝组织资料，进行各项临床检测指标的统计分析，用细胞裂解液匀浆提取蛋白，用GSK3D活性测定试剂盒检测肝组织中GSK3D活性，用Westernblot方法检测p-GSK3、GSK3、β-肌动蛋白的表达；制备石蜡切片进行免疫荧光检测。用LSD-t检验进行组间比较，P〈0．05为差异有统计学意义。结果Westernblot结果显示，与对照组相比，慢性乙型肝炎患者组GSK3β第9位丝氨酸磷酸化程度上升，活性下降，重型肝炎肝衰竭患者组GSK3β第9位丝氨酸磷酸化程度显著下降，即GSK3β活性显著上升（P=0．0342）；同时，免疫荧光方法对各组样本进行检测结果显示乙型重型肝炎肝衰竭组GSK3D磷酸化水平显著下降，证明其活性明显增高；最后，GSK3D活性检测试剂盒进行GSK3β活性检测，与Westernblot和免疫荧光结果相一致，重型肝炎肝衰竭患者中GSK3β涪性显著增加，与对照组相比，P=0．0289。结论GSK3活性在重型肝炎肝衰竭发生过程中被激活，因此其是重型肝炎肝衰竭发病机制中的一种重要信号分子，抑制其活性可能在重型肝炎肝衰竭的预防和治疗中发挥一定的作用。
- 张向颖任锋魏琳琳郭媛媛张莉温韬谢棒祥时红波朴正福陈德喜段钟平
- 关键词：肝炎乙型肝功能衰竭
- Δ133p53异构体在内质网应激诱导自噬促进细胞凋亡的机制研究被引量：1
- 2011年
- 目的研究p53异构体Δ133p53在内质网应激诱导细胞凋亡过程中的作用,探讨其对自噬的调节。方法应用p53缺失型1299细胞和Δ133p531299细胞为模型,利用Tunicamycin(20μg/ml)诱导的内质网应激导致细胞凋亡;采用免疫荧光方法分别进行凋亡蛋白M30检测以及采用活细胞染料acetoxymethyl(AM)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)对活细胞/死细胞检测以评价细胞凋亡。转染GFP-LC3质粒并通过自噬体点状结构计数以及Real-timePCR方法检测自噬相关基因的表达检测细胞自噬体的形成。结果在内质网应激条件下,Δ133p531299细胞比1299(p53-/-)对细胞凋亡的诱导更加敏感。与1299(p53-/-)细胞相比,在Tunicamycin诱导下,在Δ133p531299细胞中,凋亡蛋白M30高表达并且死细胞数量明显增多。在对自噬的调节方面,在内质网应激条件下,Δ133p53显著提高细胞自噬的形成。与1299(p53-/-)细胞相比,Δ133p531299细胞中自噬体点状结构计数增加较多,并且自噬相关基因ATG5的表达显著上调。结论在内质网应激诱导细胞凋亡过程中,Δ133p53通过诱导细胞自噬而促进细胞凋亡。
- 孙华银任锋刘凯江瑛石英李莉刘秀红娄金丽段钟平陈德喜
- 关键词：内质网应激自噬细胞凋亡
