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国家自然科学基金(30772106): 作品数：11 被引量：17H指数：3; 相关作者：赵任蔡健华朱建伟刘坤万方军更多>>; 相关机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院南通大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金江苏省自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

人结直肠癌干细胞休眠与增殖阶段细胞形态学的研究被引量：2: 2014年; 目的初步研究人结直肠癌干细胞休眠与增殖阶段细胞形态的变化。方法流式细胞仪从新鲜人结直肠癌组织中分选EpCAMhigh／CD44＋／CD133＋细胞亚群，并通过裸鼠（NOD／SCID）成瘤实验鉴定其干细胞特性：采用三维培养，WST．1绘制人结直肠癌干细胞的生长曲线；流式细胞仪测定P27及Ki一67的表达水平，区分人结直肠癌干细胞休眠和增殖时相；细胞免疫荧光显示休眠期与增殖期人结直肠癌干细胞形态的变化。结果EpCAMhigh／CD44＋／CDl33‘细胞亚群在人结直肠癌组织中占1．6％．经NOD／SCID成瘤实验证实为人结直肠癌干细胞。人结直肠癌干细胞生长曲线呈“S”型；前3d生长缓慢，细胞为静止阶段（休眠期），P27表达水平逐渐增加，Ki．67表达偏低；从第4d开始，细胞进入增殖期，Ki-67表达逐渐增加，P27表达降低。细胞免疫荧光染色显示：休眠期人结直肠癌干细胞圆而大，伪足少；而增殖期细胞伪足增多，呈现增殖和侵袭的状态。结论肿瘤的复发、转移可能与肿瘤干细胞的生长状态发生改变有一定关系；人结直肠癌干细胞增殖期与休眠期相比。呈现出明显增殖和侵袭能力：这为治疗人结直肠癌及其他肿瘤的复发和转移提供了新的切人点。; 刘贵远于嘉伟钱飞黄俊杰汤志杰王冶铭朱建伟; 关键词：结直肠肿瘤肿瘤干细胞休眠增殖

靶向干预N-WASP蛋白的ARP2/3结合功能区对抗大肠癌细胞侵袭转移的研究: 2009年; 背景与目的大肠癌等恶性肿瘤的侵袭和转移是一个多步骤的复杂过程,一般包括癌细胞的局部增殖和扩展、分离和脱落、肿瘤组织新生血管形成、癌细胞进入循环、癌细胞降解脉管基膜逸出循环及随后的定位生长等。然而，这一系列复杂步骤都离不开癌细胞自身的运动能力，其中的一个显著特点是癌细胞膜形成一种具有侵袭作用的突出。这一种具有侵袭性的胞膜突出在国际文献上称为Invadopodia，是一种特殊的细胞伪足，这种特殊伪足的形成依赖于细胞膜下的肌动蛋白的装配（Actinassembly），即肌动蛋白由蛋白单体（G—actin）形式聚合成肌动蛋白丝（F—actin）多聚体，这一过程依靠蛋白复合物-ARP2／3复合物的催化作用。; 朱建伟马利林黄宝玉刘培根赵任; 关键词：N-WASP 大肠癌

体内连续筛选法建立人结肠癌肝转移阶梯细胞模型被引量：4: 2009年; 目的:通过在裸鼠体内进行SW1116结肠癌细胞株原位种植肝转移连续筛选,建立人结肠癌肝转移阶梯细胞模型系统,为研究结肠癌转移的分子机制提供实验模型。方法:将SW1116细胞株在裸鼠皮下连续5次传代后,取皮下种植瘤在裸鼠结肠进行原位种植,继而取肝脏转移灶进行下一代裸鼠结肠原位种植,经3次结肠原位种植肝转移筛选,建立大肠癌肝转移阶梯细胞模型。用免疫组化法验证种植瘤及转移灶的组织来源,并行同期体内外侵袭实验,检测经体内连续筛选出的癌细胞侵袭转移能力变化。结果:经5代皮下连续传代及3代结肠至肝的体内转移筛选,成功建立了第三代结肠癌肝转移筛选细胞系(CRCLM3)。裸鼠种植瘤及转移灶均表达人癌胚抗原,而同期体内外侵袭试验结果显示,经体内筛选得到的结肠癌细胞株转移能力逐渐加强。结论:经体内连续肝转移筛选所建立的结肠癌细胞系侵袭转移能力增强,而CRCLM3细胞系是研究结肠癌肝转移机制的理想细胞模型。; 万方军蔡健华赵任; 关键词：大肠癌原位种植

细胞内吞作用的研究进展(英文): 2009年; Endocytosis is a process through which extracellular materials are transported into cell through membrane deformation. This process is not a simple step-by-step process in which a series of proteins function according to the chronological order, but rather a complex process comprising many members which are regulated precisely. The role of endocytosis is broadly divided into two categories, phagocytosis and pinocytosis, the latter is divided into four species in accordance with the size of endocytosis substances: clathrin dependent endocytosis, the diameter of clathrin-coated vesicle is 100–150 nm; caveolin dependent endocytosis, the diameter of caveolin protein-coated vesicle is 50–100 nm; macropinocytosis, the diameter of macropinocytosis is generally 0.5–2 μm, sometimes up to 5 μm; clathrin and caveolin independent endocytosis. Many proteins including endophilin A1, A2, A3, and endocytotic proteins B, B1a, and B1b as well as dynamin, actin and Rab protein families are involved in endocytosis and play an important role in different stages. The abnormal endocytosis may be involved in the development of certain diseases.; Li ChenHui LiRen Zhaojianwei Zhu; 关键词：细胞内吞作用蛋白质功能蛋白涂层家庭参与肌动蛋白

裸鼠原位种植大肠癌肝转移三种建模方法的比较被引量：5: 2010年; 目的比较3种不同的人大肠癌裸鼠原位种植肝转移模型,建立稳定有效的人大肠癌裸鼠原位种植肝转移模型.方法逐步传代法皮下成瘤传5代,采用84只BALB/C-nu/nu裸鼠,随机分为4组,结肠原位荷包缝合法和结肠原位纤维蛋白胶黏合法和结肠微注射1×10^6和1×10^5SW1116细胞法建立大肠癌裸鼠原位种植肝转移模型.各组裸鼠死亡后立即解剖观察原位以及肝脏、肺、脾脏、胰腺、肠系膜等脏器组织的转移并且进行苏木素-伊红（HE）染色进行镜下观察有无转移.结果荷包缝合组和纤维蛋白胶组结肠原位种植肝转移成功率均为100%比微注射法50.0%和14.3%高,纤维蛋白胶法比其他两种方法所形成的结肠原位肿瘤和肝转移瘤均大而多.HE染色表明肝转移肿瘤性质与结肠原位种植瘤相同.结论结肠原位纤维蛋白胶黏合法比较其他二种原位种植肝转移模型的手术成功率高,肝转移率高、操作简单.; 蔡健华赵任万方军刘坤于颖彦朱正纲; 关键词：大肠癌原位种植肝转移

Cortactin过表达对结肠癌细胞转移能力的影响被引量：4: 2012年; 目的:通过诱导皮层肌动蛋白(cortactin)的过表达分析其在结肠癌细胞侵袭迁移以及肝转移过程中的作用。方法:构建含CTTN基因和绿色荧光蛋白的慢病毒表达载体,转染293T细胞。取含CTTN基因和绿色荧光蛋白的病毒上清液转染结肠癌细胞株SW1116使cortactin稳定表达。蛋白印迹实验检测cortactin的表达,通过Transwell实验评估结肠癌细胞侵袭迁移能力的改变。利用SW1116细胞株使裸鼠皮下成瘤,取肿瘤组织种植新一批裸鼠结肠壁并观察结肠癌肝转移的情况。结果:成功构建cortactin过表达的SW1116细胞。侵袭和迁移实验中,过表达组穿膜细胞数分别为(147±12)个、(286±17)个,而阴性对照组为(83±10)个、(112±11)个,空白对照组为(75±7)个、(103±9)个,后两组与过表达组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。动物实验显示cortactin过表达组肝转移能力明显高于阴性对照组和空白对照组(7/12比2/12和3/12)(P<0.05)。结论:上调cortactin的表达能显著促进结肠癌细胞的侵袭迁移和肝转移能力,提示cortactin在结肠癌的转移过程中发挥重要作用。; 王常刚刘坤蔡健华季晓频刘炳亚朱正纲赵任; 关键词：结肠癌肝转移皮层肌动蛋白细胞侵袭

皮动蛋白与肿瘤侵袭和转移的关系被引量：1: 2009年; 皮动蛋白（eortaetin）是由位于染色体11q13区上的CTFN基因（也称为ESM1基因）所编码、具有多种不同细胞功能的蛋白质，其最初作为致癌的酪氨酸蛋白激酶v—src的底物而被鉴定发现。皮动蛋白是一种在皮质亚细胞局部聚集且能与丝状肌动蛋白（F—actin）结合的蛋白质，因此也被命名为皮质肌动蛋白结合蛋白（cortical actin—binding protein，简称cortactin）。; 蔡健华赵任; 关键词：肿瘤侵犯肿瘤转移

结肠癌肝转移细胞增殖能力减弱被引量：1: 2011年; 目的通过阶梯转移法在裸鼠中筛选出人结肠癌肝转移细胞,然后对结肠癌肝转移细胞的生长增殖能力进行鉴定.方法通过SW1116细胞株裸鼠皮下连续5次传代后取皮下种植瘤裸鼠结肠原位种植,分别取肝脏转移灶和皮下5代细胞进行原代培养,获得大肠癌肝转移细胞和皮下5代的原代细胞,分别命名为结直肠癌肝转移细胞1代（CHM-1）和皮下第5代（P5）,通过CCK-8测生长曲线、流式检测细胞周期以及细胞周期相关的蛋白的免疫细胞化学来对SW1116、CHM-1和P5增殖能力进行检测.结果细胞增殖实验显示CHM-1生长速度明显慢于SW1116和P5细胞（P＜0.05）;流式细胞周期分析中CHM-1细胞G41期（68.390±2.865）%比例高于SW1116（50.440±1.472）%和P5（53.930±2.651）%（P＜0.05）,G2期CHM-19（13.530±4.411）%比例要低于SW1116（32.030±5.645）%和P5（29.720±3.559）%（P＜0.05）,S期3种细胞差异无统计学意义（18.250±6.901）%、（19.050±4.162）%、（18.930±0.169）%（P＞0.05）;免疫细胞化学分析发现细胞周期蛋白Cyclin DI在CHM-1（23.7±4.7）%中的表达比SW1116（30.2±5.1）%和P5（32.1±4.2）%减少（P＜0.05）.结论发现侵袭能力和生长增殖能力具有反向关联,即结肠癌肝转移细胞具有更强的侵袭能力,但生长增殖速度比其他细胞更慢.; 刘坤王常刚蔡健华吕波万方军赵任; 关键词：结直肠癌增殖细胞周期

皮层肌动蛋白的差异表达与结肠癌转移的相关性研究被引量：2: 2010年; 目的检测具有不同转移能力的结肠癌细胞亚系中皮层肌动蛋白的表达,探讨皮层肌动蛋白的差异表达与结肠癌转移的相关性.方法本实验应用具有不同肝转移能力的结肠癌细胞系SW1116、人结肠癌皮下5代细胞系（SW1116_5）、人结肠癌肝转移细胞系1代（CRCLM1）和人结肠癌肝转移细胞系3代（CRCLM3）.4种细胞在皮下成瘤后再原位种植到裸鼠结肠观察其肝脏转移能力的差异,用Western blotting和real time-PCR检测皮层肌动蛋白表达的差异,同时行体外迁移侵袭实验检测癌细胞的侵袭转移能力的差异,免疫组化方法分析临床86例结肠癌组织中皮层肌动蛋白的表达情况及其与临床病理特征之间的关系.结果 Western blotting和real time-PCR均证实在4种细胞中皮层肌动蛋白表达自SW1116、SW1116_5、CRCLM1、CRCLM3逐渐增高,四者两两比较差异有统计学意义,均P＜0.05;动物实验证实CRCLM3（100%）和CRCLM1（89%）与SW1116（40%）和SW1116_5（44%）相比具有较强的转移能力,免疫组化提示皮层肌动蛋白表达在86例中57例（66%）为强阳性,29例（34%）为阴性.结论皮层肌动蛋白差异表达与结肠癌的转移以及临床分期呈正相关,皮层肌动蛋白有可能成为结肠癌临床分期以及肿瘤转移的判断指标.; 蔡健华刘坤朱建伟季晓频赵任; 关键词：结肠肿瘤基因表达肿瘤转移皮层肌动蛋白

Cortactin表达水平与结直肠癌细胞分裂状态及临床病理关系的研究被引量：1: 2014年; 目的探讨cortactin在结直肠癌组织、癌前病变（腺瘤性息肉）、癌旁正常组织中的表达及其意义，结直肠癌细胞cortactin表达水平与细胞分裂状态的关系。方法采用免疫组织化学方法，检测cortactin在结直肠癌组织、癌前病变（腺瘤性息肉）、癌旁正常组织中的表达。用Kaplan—Meier法比较cortactin不表达或者低表达患者组与高表达患者组5年生存率。分析cortactin在结直肠癌组织中的表达与临床病理参数的关系。FISH技术观察cortactin编码基因CTTN在结直肠组织中的扩增。体外合成cortactinsiRNA后转染结直肠癌细胞株SW620，用Westernblot和免疫荧光观察转染后cortactin表达量的变化及细胞分裂状态。结果Cortactin在结直肠癌组织中的表达明显高于腺瘤性息肉和癌旁结直肠正常组织。在结直肠癌组织中cortactin表达增高与结直肠癌不良分化（P〈0．01）、有淋巴结转移（P=0．006）、TNM分期（P=0．022）相关。Cortactin阴性表达或者低表达组结直肠癌患者术后5年生存率明显高于cortactin高表达组。结直肠癌组织中cortactin编码基因CTTN扩增明显，结肠腺瘤与癌旁正常组织中未见扩增。导入cortactinsiRNA的结直肠癌细胞cortactin蛋白表达下降。结论Cortactin异常表达可能与结直肠癌的生长、侵袭及转移有关。; 黄俊杰梅广林胡卫东吴寒刘贵远时雪亮朱建伟; 关键词：结直肠肿瘤细胞分裂 RNA干扰

国家自然科学基金(30772106)

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