国家自然科学基金(30772109)
- 作品数：7 被引量：14H指数：3
- 相关作者：王曙光李天宇高占峰刘子沛夏锋更多>>
- 相关机构：第三军医大学西南医院北京世桥生物制药有限公司内蒙古医学院附属医院更多>>
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- 胆管癌细胞层黏连素受体过表达上调Fas配体的研究被引量：3
- 2008年
- 目的 探讨胆管癌细胞层黏连素受体（laminin receptor，LNR）过表达与Fas配体（Fasligand，FasL）作用的关系。方法 采用脂质体转染法转染顺义、反义LNR寡核苷酸至胆管癌细胞QBC939，中，用RT—PCR和细胞免疫组织化学方法检测两组细胞FasL及LNR的表达情况。结果 转染反义组LNR和FasL基因表达均较转染顺义组明显降低（t=14．136，25．161，P〈0．01）。结论 LNR过表达在胆管癌免疫逃逸中的作用可能是通过Fas—FasL信号通路实现的。
- 高占峰李天宇高应鸿蒋卫伟吴虹晔王曙光
- 关键词：胆管肿瘤FAS配体
- MAPK信号通路对人胆管癌细胞Fas配体基因表达的调节及其机制的初步探讨被引量：2
- 2010年
- 目的观察MAPK/ERK kinase(MEK)抑制剂PD98059对人胆管癌细胞Fas配体(Fas ligand,FasL)表达的影响及其作用机制。方法用RT-PCR和Western bolt检测PD98059处理组及未处理组人胆管癌细胞(QBC939)中c-Myc、p-c-Myc和FasL的表达;构建含FasL基因启动子的荧光素酶报告基因质粒,瞬时转染人胆管癌细胞,用PD98059处理后,检测荧光素酶相对活性,比较启动子活性的变化情况;染色质免疫共沉淀(ChIP)技术分析p-c-Myc和FasL基因启动子的结合情况。结果PD98059处理组胆管癌细胞磷酸化c-Myc(p-c-Myc)和FasL的表达均明显降低,而c-Myc未见明显变化;人胆管癌活细胞中p-c-Myc与FasL基因启动子有结合;PD98059处理组胆管癌细胞荧光素酶活性与对照组相比下降约80%。结论PD98059通过抑制MAPK/ERK kinase(MEK)的活性,降低c-Myc磷酸化水平,进而下调FasL基因启动子活性,从而抑制人胆管癌细胞FasL基因的表达。
- 段世刚李大江陈龙刘子佩王曙光
- 关键词：FAS配体启动子活性报告基因PD98059
- 兔胆囊切除术后Oddi括约肌离体收缩及肌球蛋白重链表达变化被引量：3
- 2009年
- 目的:探讨兔胆囊切除术后奥迪氏括约肌(SO)自身发生的适应性变化.方法:将60只成年新西兰大白兔随机分为4组,其中A,D组各18只;B,C组各12只.设A组为对照组,采用假手术方式,开腹暴露胆囊后即关闭腹腔,饲养8wk.B,C,D组为实验组,分别完整切除胆囊后饲养2,4,8wk.按设计的时间点饲养结束后将兔麻醉并取出SO,每组各取12只经离体测压后提取总蛋白通过Western Blot蛋白检测肌球蛋白重链(MHC)表达变化.另各取A,D组中剩余的6只大鼠的SO行石蜡切片免疫组化检测MHC表达变化.结果:与A组相比较,实验B,C,D组离体SO压力波幅和SO中的MHC表达均逐渐升高,差异具有统计学意义(P<0.01).免疫组化结果显示,D组相对于A组平滑肌细胞中的MHC浓染.结论:兔胆囊切除术后SO括约肌发生了适应性收缩能力增强,MHC表达上调变化,可能是胆囊切除术后患者SO括约肌功能障碍多发生障碍的病理基础之一.
- 何谦李智华王铁虎熊燕刘永康张志波
- 关键词：胆囊切除术后ODDI括约肌肌球蛋白重链
- 神经生长因子对胆管癌细胞67-kDa层黏连蛋白受体表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的 研究外源性神经生长因子（NGF）对QBC939细胞67-kDa层黏连蛋白受体（67LR）表达的影响,探讨胆管癌神经浸润的机制.方法 （1）细胞免疫荧光染色法检测QBC939细胞表面NGF高亲和力酪氨酸激酶受体A（TrkA）表达情况.（2）用不同浓度的重组人神经生长因子（β-NGF）对QBC939细胞进行处理,采用Real-Time PCR和Western blot检测QBC393细胞67LR mRNA和蛋白表达情况.实验分为对照组、β-NGF（1、10、100、200μg/L）组.（3）根据上述实验结果选定最佳β-NGF浓度,再加入不同浓度的TrkA阻断剂K252a,再次检测QBC939细胞67LR mRNA和蛋白表达情况.实验分为对照组、100μg/Lβ-NGF组、K252a（100、200、300 nmol/L）阻断组.数据采用单因素方差分析,两两比较采用LSD法.结果 （1）QBC939细胞膜上TrkA表达明显.（2）对照组和β-NGF（1、10、100、200 μg/L）组QBC939细胞67LRmRNA和蛋白表达水平分别为0.35±0.06、0.38±0.14、0.62±0.14、0.90±0.08、0.70±0.10和0.32±0.05、0.50±0.09、0.69±0.13、0.93±0.07、0.76±0.07,两者比较,差异有统计学意义（F=22.4,14.6,P＜0.05）,其中100ng/ml β-NGF作用最明显（t=19.0,21.0,P＜0.05）.（3）对照组、100 μg/L β-NGF组、K252a（100、200、300 nmol/L）阻断组QBC939细胞67LR mRNA和蛋白表达水平分别为0.35±0.10、0.88±0.14、0.80±0.08、0.67±0.12、0.43±0.07和0.41±0.10、0.84±0.10、0.76±0.04、0.61±0.09、0.50±0.12,两者比较,差异有统计学意义（F=14.1,8.9,P＜0.05）,其中经300 nmol/L K252a处理后,QBC939细胞67LR mRNA和蛋白表达水平与对照组比较,差异无统计学意义（t=1.02,0.85,P＞0.05）.结论 外源性NGF通过与其高亲和力受体TrkA结合,可增强QBC939细胞67LR表达,这可能是促进胆管癌细胞延外周神经纤维间隙浸润的机制之一.
- 高杨刘子沛王曙光
- 关键词：胆管肿瘤神经生长因子层黏连蛋白受体神经浸润
- α1-肾上腺素受体对胆管癌细胞增殖的影响被引量：5
- 2009年
- 目的探讨α1-肾上腺素受体对胆管癌细胞增殖的影响。方法应用SABC免疫组织化学法检测2002年8月至2008年3月于西南医院行手术切除的36例人胆管癌组织和4例正常胆管组织中α1-肾上腺素受体的表达，并用去甲肾上腺素（NE）以及受体阻滞剂酚妥拉明、哌唑嗪处理胆管癌细胞，观察细胞的增殖变化。采用χ^2检验分析结果。结果发生胆管癌淋巴结转移的患者中α1-肾上腺素受体强阳性表达率为68％（17／25），明显高于未转移患者的9％（1／11），两者比较差异有统计学意义（χ^2=10．604，P〈0．05），且胆总管中、下段癌的α1-肾上腺素受体强阳性表达率为85％（11／13），高于肝门部胆管癌的30％（7／23），两者比较差异有统计学意义（χ^2=9．753，P〈0．05）。NE促进胆管癌细胞的增殖，此作用呈浓度依赖性，随着时间的延长，促增殖作用逐渐减弱。该作用由α1-肾上腺素受体介导，在非选择性α1-肾上腺素受体阻滞剂酚妥拉明及选择性α1-肾上腺素受体阻滞剂（哌唑嗪）存在的情况下可消除NE对胆管癌细胞的促增殖作用。结论α1-肾上腺素受体的表达受淋巴结转移以及胆管癌部位影响，呈强阳性表达的α1-肾上腺素受体参与了胆管癌细胞增殖及转移过程。
- 黄竹刘子沛夏锋海军邓小明王曙光
- 关键词：Α1-肾上腺素受体胆管肿瘤细胞增殖
- 抑制层黏素受体过表达在胆管癌细胞免疫逃逸中的作用
- 2012年
- 目的探讨抑制层黏素受体(LNR)过表达下调Fas配体基因表达在胆管癌免疫逃逸中的作用。方法采用流式细胞仪分选出过表达层黏素受体的胆管癌细胞QBC939,用脂质体转染法转染层黏素受体RNA干扰质粒和阴性对照质粒各6μg至过表达层黏素受体的胆管癌细胞QBC939中,用实时荧光定量PCR法检测未转染组、阴性组和阳性组QBC939细胞Fas配体基因的表达情况。结果分选后的QBC939细胞层黏素受体的表达率高达95%,继续转染层黏素受体RNA干扰质粒后,其FasL基因表达水平较未转染组和转染阴性对照质粒组明显降低。结论 LNR过表达在胆管癌免疫逃逸中的作用可能是通过Fas-FasL信号通路实现的。
- 高占峰李天宇王曙光
- 关键词：胆管癌FAS配体
- 层黏素受体靶向RNA干扰质粒载体的构建
- 2012年
- 目的构建层黏素受体RNA干扰质粒,为探讨抑制层黏素受体过表达在胆管癌免疫逃逸中的作用奠定基础。方法 PCR法获得U6启动子序列以及产生siRNA的相应DNA模板序列,将其克隆入pGenesil-3获得RNA干扰载体pGenesil-shLNR。脂质体法将pGenesil-shLNR导入胆管癌细胞QBC939,免疫组化法检测对胆管癌细胞QBC939LNR表达的抑制情况。结果所构建的载体pGenesil-shLNR能够干扰QBC939细胞中LNR的表达,并且具有新霉素抗性,能够用G-418筛选稳定转化的细胞株。结论成功构建了抑制胆管癌细胞QBC939表达LNR的RNA干扰质粒载体。
- 高占峰李天宇王曙光
- 关键词：RNA干扰质粒
