重庆市畜牧科学院基本科研业务费项目(10615)
- 作品数：4 被引量：26H指数：4
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- 发文基金：重庆市畜牧科学院基本科研业务费项目国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
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- 蜜蜂囊状幼虫病病毒的基因型分析被引量：15
- 2012年
- 为了解蜜蜂囊状幼虫病病毒的遗传进化规律,依据SB14f/SB15r引物所扩增的RNA依赖的RNA聚合酶基因片段序列对该病毒进行基因型分析。结果表明,该病毒主要分为欧洲型、远东型和南非型3个基因型。欧洲基因型分为中欧和英国亚型,远东基因型分为东方蜜蜂和西蜂亚型。提示蜜蜂囊状幼虫病病毒总体上按地域分型。
- 曹兰沈克飞张邑帆罗文华王瑞生任勤郭军王志冬戴荣国
- 关键词：基因型蜜蜂
- 用RT-PCR方法鉴定中蜂囊状幼虫病病毒被引量：5
- 2011年
- 为了鉴定病原,依据中蜂囊状幼虫病病毒广东株基因组序列AF469603选择3对引物,运用RT-PCR方法对中蜂病死幼虫进行中蜂囊状幼虫病病毒检测。结果表明,所有样本均检出囊状幼虫病病毒,CSB3F/CSB4R RT-PCR的检出率为90%(45/50),高于CSB1F/CSB2R RT-PCR(76%)和SB14R/SB15F RT-PCR(20%)的检出率,CSB3F/CSB4R更适合于中蜂囊状幼虫病病毒的检测。
- 曹兰张邑帆戴荣国任勤王瑞生罗文华沈克飞
- 关键词：中蜂RT-PCR
- 中蜂囊状幼虫病病毒结构蛋白的表达及其抗血清的制备被引量：9
- 2013年
- 目的原核表达中蜂囊状幼虫病病毒(Chinese sarbood virus,CSBV)结构蛋白,并制备其抗血清。方法采用RT-PCR法扩增CSBV结构蛋白基因片段,克隆至pGEX-4T-1载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经Gluthathione-Sepharose 4B亲和层析纯化后,免疫小鼠,制备抗血清,并进行Western blot鉴定。结果重组表达质粒经菌落PCR鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约52 000,以可溶性形式表达;纯化后纯度可达95%以上;制备的抗血清可识别天然CSBV结构蛋白。结论成功在大肠杆菌中表达了CSBV结构蛋白,并制备了其抗血清,为进一步研究囊状幼虫病病毒与宿主的相互作用及开发血清学诊断方法奠定了基础。
- 沈克飞张邑帆曹兰王瑞生杨金龙杨柳戴荣国
- 关键词：基因表达抗血清
- 重庆地区中蜂囊状幼虫病病毒型特异性遗传变异分析被引量：8
- 2013年
- 目的分析重庆地区中蜂囊状幼虫病病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)的遗传多样性。方法采用RT-PCR法从重庆地区中蜂囊状幼虫病病死幼虫体内扩增CSBV的2段结构蛋白和1段非结构蛋白的编码序列,并克隆至pMD18-T载体进行双向序列测定,所得序列在NCBI上进行BLAST搜索,以进行同源性分析;应用ClustalW2软件进行多序列比对分析;应用SNAP软件计算同义替换率(Synonymous substitution rate,dS)、非同义替换率(Nonsynon-ymous substitution rate,dN)及其比值(dS/dN);采用MEGA 4软件的邻接法(Neighbor-joining)中的最大可能性算法(Maximum likelihood method)构建系统进化树。结果 CSBV重庆分离株片段SB1-2、SB6-7和SB14-15的序列同源性高于99.06%,序列保守,3个片段序列均只发现少数点变异碱基,属于亚洲型,与东方蜜蜂广州分离株和韩国分离株的亲缘关系最近;CSBV重庆分离株存在特有的核苷酸和氨基酸位点,且与亚洲型分离株存在广泛的共有基序;亚洲型分离株的替换率高于欧洲型分离株。结论 CSBV分离株存在型特异的遗传变异规律。
- 罗文华张邑帆沈克飞曹兰杨睿卢茵
- 关键词：中蜂多序列比对
