广东省科技计划工业攻关项目(2010B020316003)
- 作品数：5 被引量：40H指数：3
- 相关作者：张菊梅吴清平杨小鹃董晓晖莫树平更多>>
- 相关机构：广东省微生物研究所中国科学院大学中国科学院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广州市科技计划项目广东省教育部产学研结合项目更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程医药卫生生物学更多>>
- 显色培养基和传统XLD培养基检测沙门菌效果比较被引量：3
- 2013年
- 沙门菌是肠杆菌科的重要致病菌属，也是引起细菌性食物中毒的主要致病菌之一”。因此，寻找一种快速准确鉴定沙门菌的检测方法尤显重要。目前国内沙门菌检测仍以常规分离培养、生化鉴定为主，而生化鉴定的前提就是在选择性平板上挑取可疑单菌落。木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂（XLD）、沙门菌属显色培养基是食品安全国家标准推荐使用的两种选择性培养基。相对于显色培养基，XLD培养基仅适用于沙门菌选择性分离培养，不能特异性鉴定沙门菌。显色培养基由于添加了特异的显色底物组合，直接观察菌落颜色就可对菌种做出鉴定，特别是能与常规检测方法较好地接轨而越来越受到国内外的关注。为了解显色培养基在实际工作中的应用效果，特以HKM沙门菌显色培养基（简称HKSal）和传统XLD培养基对不同食品样品的分离效果进行比较分析，为显色培养基的广泛应用提供借鉴。
- 杨小鹃吴清平张菊梅王君李程思郭伟鹏
- 关键词：沙门菌
- 阪崎肠杆菌α-葡萄糖苷酶的原核表达及其多克隆抗体制备被引量：2
- 2013年
- 以阪崎肠杆菌(ATCC29544)的基因组DNA为模板通过PCR扩增出α-葡萄糖苷酶基因malA,将其克隆入表达载体PET22b(+),构建重组表达质粒pET22b-malA。将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),进行优化表达。采用尿素洗涤包涵体并切胶回收纯化融合蛋白,然后再免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。通过ELISA测定效价,并通过免疫荧光法鉴定与菌体表面结合能力。结果表明克隆的目的基因全长1677bp,与Genebank的malA比较具有100%的同源性。带His标签的融合蛋白以包涵体形式表达,其最优化的表达条件是37℃下用0.8mmol/L IPTG诱导5h。ELISA测定效价为5×105;免疫荧光法鉴定表明多克隆抗体能与阪崎肠杆菌表面结合。本实验为阪崎肠杆菌的免疫磁珠检测奠定了基础。
- 徐晓可吴清平张淑红张菊梅李程思郭伟鹏
- 关键词：阪崎肠杆菌Α-葡萄糖苷酶克隆原核表达多克隆抗体
- 食品污染克罗诺杆菌(阪崎肠杆菌)的分离及鉴定被引量：24
- 2013年
- 【目的】对300份奶粉样品和50份非奶粉类食品中克罗诺杆菌的污染情况做定量检测,并对分离得到的克罗诺杆菌进行鉴定。【方法】通过分子方法和9管法对奶粉和其他食品中克罗诺杆菌的污染情况做定量检测;通过吲哚产生、丙二酸盐利用、卫矛醇、肌醇、松三糖和松二糖发酵产酸等六种生化试验对分离株进行鉴定;同时对分离株的16S rRNA基因序列进行同源性分析,通过N-J(Neighbour-Joining)法构建系统发育树。【结果】定量检测结果表明,350份样品中有23份样品分离出克罗诺杆菌,共分离到24株克罗诺杆菌,检出率为6.6%;23份受污染样品中有4个样品的克罗诺杆菌大于100 MPN/100g;24株克罗诺杆菌被鉴定到种或亚种,其中19株为阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii);2株为丙二酸盐克罗诺杆菌(C.malonaticus);2株为都柏林克罗诺杆菌奶粉亚种(C.dublinensis subsp.lactaridi);1株为莫金斯克罗诺杆菌(C.muytjensii)。【结论】分子方法和9管法联用适合污染率低而定量检测要求高的克罗诺杆菌的奶粉调查;采用生化和分子生物学方法将24株分离株鉴定到种或亚种,其中阪崎克罗诺杆菌为优势种;奶粉中克罗诺杆菌的污染问题对婴幼儿安全存在隐患,应引起消费者和有关部门的重视。
- 董晓晖李程思吴清平张菊梅莫树平郭伟鹏杨小鹃徐晓可
- 关键词：RRNA基因系统发育树
- 阪崎克罗诺杆菌全菌蛋白质双向电泳技术和图谱的建立
- 2012年
- 建立阪崎克罗诺杆菌全菌蛋白双向电泳技术。采用2种不同的尿素-3-[3-(胆酰氨丙基)二甲氨基]-1-丙磺酸(CHAPS)-二硫苏糖醇(DTT)裂解法兼反复冻融提取阪崎克罗诺杆菌ATCC 29544全菌蛋白,在2种pH范围的固相pH梯度等电聚焦对全菌蛋白进行双向电泳,胶体考染后获得的双向电泳图谱进行Image Master 2DPlatinum软件分析。结果表明,获得全菌的蛋白浓度为5.32μg/μL;裂解液成分:尿素7 mol/L,硫脲2 mol/L,CHAPS 4%(m/V),DTT 1%(m/V),PMSF 45mg/L,pH 3～10IPG缓冲液2%(V/V)。该技术成功构建了阪崎克罗诺杆菌全菌蛋白质双向电泳图谱。
- 董晓晖吴清平莫树平张菊梅
- 关键词：蛋白质组学双向电泳蛋白质图谱
- 克罗诺杆菌检测方法研究进展被引量：13
- 2013年
- 克罗诺杆菌(Cronobacter spp.)是一类重要的食源性致病菌,其引起的奶粉安全事件和新生儿致病问题受到了社会的高度重视。随着对该菌研究的深入和现代分类技术的不断发展,克罗诺杆菌的分类经历了从种到属的变化。但是截至目前,克罗诺杆菌的污染源和致病机制仍不清楚,为了防止易感人群的大规模疾病暴发,对于该菌的检测和预防尤为重要。本文对克罗诺杆菌的生化检测和分子检测的发展历程及存在问题进行综述,以期为该菌的研究提供参考。
- 董晓晖吴清平莫树平张菊梅杨小鹃
- 关键词：生化检测分子检测
