湖北省科技攻关计划(2005AA301C15)
- 作品数：3 被引量：4H指数：2
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- 发文基金：湖北省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
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- RNA干扰抑制Nogo-A基因表达及对PC12细胞凋亡的影响被引量：2
- 2007年
- 为研究Nogo-A基因沉默对细胞凋亡的影响,本文构建了靶向Nogo-A的短发夹样RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体并经脂质体转染到培养的PC12细胞。分别以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法检测转染48h后Nogo-A mRNA及蛋白表达的变化。在转染后不同时间应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖活性,用原位末端标记(TUNEL)法及流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果显示:由shRNA产生的小干扰RNA(siRNA)可有效抑制PC12细胞Nogo-A基因的表达。Nogo-A siRNA处理组细胞的增殖活性增加、凋亡率明显下降。本结果提示,Nogo-A基因可能与细胞凋亡有关。
- 蒲建章熊南翔赵洪洋苏群姚东晓冯军
- 关键词：NOGO-A凋亡PC12细胞
- RNA干扰抑制Nogo-A基因表达对PC12细胞多巴胺释放的影响被引量：2
- 2007年
- 目的研究Nogo-A基因沉默对PC12细胞多巴胺释放的影响。方法构建靶向Nogo-A的短发夹样RNA(shRNA)真核表达载体,并经脂质体转染PC12细胞,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法检测对Nogo-A mRNA及蛋白的抑制效应。采用高效液相色谱仪(HPLC)检测转染前后多巴胺释放的变化。结果将重组质粒转染到PC12细胞48h后,Nogo-A基因表达明显受抑、多巴胺释放量减少。结论Nogo-A可能参与PC12细胞多巴胺的释放。
- 熊南翔蒲建章赵洪洋苏群姚东晓冯军
- 关键词：RNA干扰PC12细胞逆转录聚合酶链反应
- Nogo-A短发夹样RNA真核表达载体的构建被引量：1
- 2006年
- 目的:构建靶向Nogo-A基因的短发夹样RNA(shorthairpinRNA,shRNA)真核表达载体。方法:根据Genebank中提供的Nogo-A基因核苷酸序列,设计并化学合成2条shRNA,退火后克隆到pGenesil-1质粒的U6启动子下游从而构建重组载体,行限制性内切酶酶切和基因测序进行鉴定。结果:序列分析结果表明,两个重组质粒的shRNA编码序列均成功插入到预定位置。结论:成功构建靶向Nogo-A的shRNA真核表达载体,为进一步研究Nogo-A蛋白的功能及轴突再生抑制的基因治疗提供了新的方法。
- 蒲建章熊南翔赵洪洋苏群
- 关键词：NOGO-A
