浙江省重点科技创新团队项目(2010R50047)
- 作品数：6 被引量：14H指数：2
- 相关作者：楼宜嘉朱丹雁王志强吴博文沈圆圆更多>>
- 相关机构：浙江大学浙江大学医学院附属第二医院浙江大学医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：浙江省重点科技创新团队项目浙江省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 胚胎干细胞与促再生药物研究被引量：1
- 2012年
- 具有体外诱导干细胞定向分化的药样小分子,在再生医学领域可望有以下潜在用途:利用其固有的促组织再生作用,到达靶组织后促进成体干细胞定向分化;通过体外诱导,获得足够量的均一前体细胞用于细胞移植治疗用;细胞移植的同时给药,促进被移植的前体细胞在体内进一步定向分化,达到提高疗效,降低致瘤性的目的。近年来,由于诱导多能干(induced pluripotentstem,iPS)细胞的问世,同样具有多能性的人类胚胎干(embryonic stem,ES)细胞研究可为iPS的命运提供借鉴,因而再次受到高度关注。人类ES细胞定向分化体系在药物筛选应用中有独到之处,可在药物研发早期获得人类细胞易感的有效性与安全性资料。研究促再生的药样小分子可通过体外初级筛选和次级筛选,进一步在合适的动物模型进行研究。再生医学微环境学将推动细胞移植和促再生药研究的进程。
- 楼宜嘉李璐吴博文
- 关键词：胚胎干细胞定向分化
- Junctophilin 1在小鼠胚胎干细胞定向分化心肌细胞及大鼠胚胎心肌发生中的表征被引量：2
- 2012年
- 目的:评价膜连接蛋白Junctophilin 1(JP1)亚型在哺乳动物心肌发生过程中,基因转录和蛋白表达特征,为心肌发育生物学及心脏再生医学相关生命现象本质提供实验依据。方法:小鼠胚胎干(embryonic stem,ES)细胞相继制成单细胞悬液和悬滴,收集拟胚体转至培养皿中悬浮分化培养。每隔2 d收集细胞供分子生物学评价,并于心肌分化成熟期(第17天),免疫荧光成像原位检测JP1与心肌小节蛋白α-Actinin和Troponin-T是否呈共表达,流式细胞术定量确认JP1阳染率。另以大鼠胎心为研究对象,大鼠受精后第14天起,每隔2 d取胎心直至分娩新生鼠,供RT-PCR和免疫印迹实验用。结果:ES细胞分化过程中,JP1在基因转录层面全程表达,至第11天达高峰。蛋白层面呈一过性表达,在第9天达高峰,此后迅速下降,至分化培养第15天消失,分化成熟期未见表达。大鼠胎心表达趋势与ES细胞分化过程基本一致,但JP1蛋白表达持续在出生后。在分化终端,流式细胞术显示JP2和肌小节蛋白双染率达16.59%,而未见JP1阳染细胞。结论:JP1基因在小鼠ES细胞定向分化心肌细胞全程均有转录,但JP1仅在分化早期有一过性表达。大鼠胎心JP1表达趋势与ES细胞分化过程基本相一致。
- 梁星光吴博文张维晨周立民朱丹雁楼宜嘉
- 关键词：连接蛋白类定向分化大鼠胚胎
- 基于光镜表型的促神经元亚型分化药物初筛法被引量：2
- 2012年
- 目的:建立基于光镜表型的促胚胎干(embryonic stem,ES)细胞神经元亚型分化药物筛选法,供早期发现促神经再生药初筛用。方法:采用悬滴培养4-/4+法,形成拟胚体,继而贴壁培养向神经细胞分化,光镜确认表型呈神经元样的基础上进一步评价各类亚型。以10-7mol/L异补骨脂甲素(Isobavachin,IBA)和10-6mol/L淫羊藿苷(Icariin,ICA)为例,分化终点以光镜下轴突为胞体三倍长以上者为神经元样细胞,继续以免疫荧光成像法确认神经元(β-tubulinⅢ阳染),并进一步以特异性抗体(ChAT、GABA)阳染共定位鉴别相应神经元亚型。结果:基于光镜表型评价,在分化终点即可剔除轴突分化不全的细胞,取代了以往免疫荧光成像所需的人力、物力与时间;并避免进一步ELISA或流式细胞术评价的假阳性。光镜显示IBA处理者大部分显示神经元样表型,而ICA处理的细胞却不然,免疫荧光成像结果与此相一致。因此,仅对IBA处理的神经元做亚型鉴定,显示胆碱能神经元以及γ-氨基丁酸能神经元亚型。结论:基于光镜表型的促神经元分化初筛法在化合物促神经元亚型分化上具有简便易行、节约物力与时间,避免假阳性的独到之处;经该法初筛后供后续研究,可见IBA具有促胆碱能和γ-氨基丁酸能神经元分化活性。
- 高益宁王丹音潘宗富梅宇钦王志强朱丹雁楼宜嘉
- 关键词：淫羊藿苷Γ-氨基丁酸能神经元
- 人参皂苷Rg1经线粒体通路抗Aβ_(25-35)致原代大鼠皮层神经元凋亡被引量：10
- 2012年
- 目的:通过人参皂苷Rg1与原代培养大鼠皮层神经元预培养,评价抗β淀粉样肽(β-amyloid peptide,Aβ)所致神经元损伤,并探讨Rg1的神经保护作用及相关分子机制。方法:原代神经元培养7 d成熟后,分别以1、10、20μmol/L Rg1预处理24 h,加入Aβ毒性片段Aβ25-3510μmol/L模拟阿尔茨海默病(Alzheimer's Disease,AD)脑组织局部微环境。孵育72 h后,光镜观察细胞形态学改变,评价Rg1是否具有神经保护作用及相关量效关系。采用JC-1染色,考察神经元线粒体膜电位(ΔΨm)变化,并运用Western blot技术,检测凋亡相关蛋白的表达变化。结果:Aβ25-35作用72 h严重损伤原代皮层神经元,引起神经元碎裂和死亡。Rg1预处理能对抗Aβ25-35的细胞损伤作用,显著提高神经元存活率,并呈现剂量依赖性,其中Rg1(20μmol/L)活性最强。Aβ25-35处理24 h能降低神经元的线粒体ΔΨm,下调Bcl-2/Bax的比值,引起细胞色素c从线粒体释放入胞浆,活化caspase 3和caspase 9,从而引起神经元凋亡。而Rg1预培养能保护原代神经元,减轻或避免上述损伤作用,且其抗凋亡效应可被雌激素受体(ER)拮抗剂ICI182,780和糖皮质激素受体(GR)拮抗剂RU486部分拮抗。结论:Rg1在1μmol/L至20μmol/L浓度具有抗Aβ25-35损伤原代培养大鼠皮层神经元作用,该活性与抑制线粒体凋亡通路相关联。
- 吴佳莹沈圆圆朱闻杰程梅园王志强刘琰朱丹雁楼宜嘉
- 关键词：人参皂苷RG1原代皮层神经元Β淀粉样肽细胞凋亡
- 仓鼠经口给予亚砷酸盐后血浆中砷结合蛋白的纯化
- 2013年
- 目的:探索用凝胶过滤柱和阴离子交换柱,结合电感耦合等离子质谱仪分离纯化砷结合蛋白,为阐明砷的毒理机制提供技术支持。方法:通过HPLC-ICP-MS技术,采用KW-803色谱柱、凝胶过滤柱和离子交换柱分离纯化仓鼠血浆中的砷结合蛋白;SDS-PAGE凝胶电泳分析由HPLC-ICP-MS系统凝胶过滤柱和离子交换柱获得的每个蛋白样本。结果:①仓鼠单次经口给予三价亚砷酸(iAsⅢ)后,运用三步法即利用凝胶过滤、KW-803色谱柱和阴离子交换等色谱柱联用HPLC-ICP-MS,最后纯化得到了仓鼠血浆中砷结合蛋白;②SDS-PAGE凝胶电泳分析由HPLC-ICP-MS系统联用不同凝胶过滤柱和离子交换柱获得的每个蛋白样本,检测到砷结合蛋白分子量大约40～50 kD。结论:凝胶过滤柱和阴离子交换柱,结合电感耦合等离子质谱仪是分离纯化动物血浆或组织上清砷结合蛋白简便快速的方法。
- 王文文张敏李春辉秦颖洁那仁满都拉
- 关键词：亚砷酸盐类亚砷酸盐类亚砷酸盐类砷质谱分析法仓鼠
- 小鼠胚胎干细胞衍生的肝组织微粒体Ⅱ相代谢酶表征被引量：1
- 2013年
- 目的:观察小鼠胚胎干细胞定向分化肝组织过程中,肝组织微粒体Ⅱ相代谢酶尿苷-5'-二磷酸葡醛酰转移酶(UGT)1a1、1a6和微粒体谷胱甘肽S-转移酶1(mGST1)的表达及其催化活性。方法:利用拟胚体固有的三胚层结构,直接由中胚层心肌细胞产生成纤维细胞生长因子,自发诱导内胚层细胞发育,并由同步分化的内皮细胞支持肝细胞发育形成肝样组织。在不同分化阶段,基于mRNA表达情况,以Western blot法检测UGT1a1、UGT1a6和mGST1表达特征。至分化终点(第18天)以心肌细胞搏动区域附近表达肝特异性标记物白蛋白确定为肝细胞。超声法碎裂细胞,超速离心制备肝细胞微粒体,以HPLC检测UGTs代谢活性,以色谱法测定并计算mGST1酶催化活性。结果:至分化终点,小鼠胚胎干细胞衍生的肝组织表达UGT1a1、UGT1a6和mGST1,并具有UGT1a1、UGT1a6和mGST1的催化功能。其中分化第18天肝组织GST1催化活性为7.65 nmol·min-1·mg-1。结论:小鼠胚胎干细胞分化的肝组织具UGT1a1、UGT1a6和mGST1代谢功能,可望成为肝脏病理生理和药物Ⅱ相代谢研究的体外模型。
- 李彤郭美媛马葵芬杜悦何良艳朱丹雁楼宜嘉
- 关键词：胚胎干细胞解剖学和组织学谷胱甘肽转移酶葡糖醛酸基转移酶
