嘉兴市科技计划项目(2011AY1048-2)
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
- 相关作者：徐水凌朱逢佳蔡玉节范宏彦金梦媚更多>>
- 相关机构：嘉兴学院嘉兴市第二医院遵义医学院更多>>
- 发文基金：嘉兴市科技计划项目浙江省大学生科技创新项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结核分枝杆菌诱导小鼠树突状细胞凋亡及caspase-3、-8活化对凋亡的影响被引量：4
- 2011年
- 目的:研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)诱导小鼠树突状细胞株(DC2.4)凋亡及caspase-3、-8活化对凋亡的影响。方法:建立小鼠树突状细胞DC 2.4的人结核分枝杆菌H37Rv细胞混合培养模型。采用DAPI荧光染色法和透射电镜分析凋亡DC 2.4细胞的形态特征;通过DNA琼脂糖凝胶电泳进行DNA片段化分析,FITC-Annexin V/PI荧光标记流式细胞术检测DC 2.4细胞凋亡情况;分光光度法检测H37Rv诱导DC 2.4细胞凋亡过程中caspase-3、-8活性变化。结果:H37Rv与DC 2.4细胞混合培养2 h后,即有细菌侵入,培养4、6、8、10、12 h后,细菌侵入现象更明显,侵入率分别为(16.1±4.3)%、(35.8±5.1)%、(50.2±5.7)%、(58.3±6.2)%和(65.9±6.9)%。H37Rv与DC 2.4细胞混合培养6 h后,DAPI染色荧光显微镜、透射电镜观察均发现DC 2.4细胞发生凋亡并出现典型的凋亡特征———染色质浓缩及边缘现象;DNA琼脂糖凝胶电泳出现特征性的凋亡条带。H37R与DC 2.4细胞混合培养6 h、12 h和24 h后,细胞凋亡率分别为(6.4±2.5)%,(11.8±5.3)%和(31.1±8.7)%。caspase-3、-8活性增高,caspase-3活性于10 h达高峰(2.01±0.09)U/μg,而caspase-8活性则在6 h达高峰(2.40±0.07)U/μg,两者与对照组相比均具有统计学意义(P<0.05),且caspase-8激活先于caspase-3。结论:结核分枝杆菌可诱导树突状细胞发生凋亡,其诱导凋亡的机制可能与caspase-3、-8活化有关。
- 朱逢佳姚扬伟徐水凌叶伟琴蔡玉节
- 关键词：树突状细胞结核分枝杆菌半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶
- 磷脂酶C分子在结核分枝杆菌触发树突状细胞细胞骨架重排中的作用被引量：1
- 2013年
- 目的:研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)侵入小鼠树突状细胞株(DC2.4)时细胞骨架微丝、微管变化及其与磷脂酶C(PLC)分子的关系。方法:建立人结核分枝杆菌H37Rv株DC2.4细胞混合培养模型。采用罗丹明标记的鬼笔环肽(Palloidin-TRITC)染细胞F-actin,用抗微管蛋白β亚单位的小鼠一抗和荧光素标记的兔抗小鼠二抗染细胞微管,检测H37Rv株侵入DC2.4细胞时细胞骨架的变化情况,并计算F-actin重排率。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测DC2.4细胞浆和细胞膜中PLC分子的表达。采用PLC分子抑制剂U73122预处理DC2.4细胞,观察H37Rv株侵入率变化以及对细胞骨架变化的影响。结果:结核分枝杆菌H37Rv株与DC2.4细胞共育2 h,即见有细菌侵入,共育4、6、8、10、12 h后,H37Rv侵入率分别为(26.1±4.5)%、(39.9±5.6)%、(51.2±5.9)%、(57.9±6.1)%和(63.9±6.8)%;H37Rv侵入2、4、6、8、10、12 h时,F-actin重排百分率分别为(26.9±1.5)%、(59.3±2.8)%、(72.7±4.8)%、(78.2±5.9)%、(63.3±2.9)%和(43.2±2.6)%,而PLC信号分子阻断后,DC2.4细胞的侵入率则分别为(13.6±3.1)%、(14.2±3.9)%、(15.1±4.3)%、(16.8±4.0)%和(18.3±5.2)%,F-actin重排率也分别为(18.5±1.2)%、(22.3±1.7)%、(23.6±2.5)%、(24.8±2.3)%、(22.3±1.3)%和(23.8±1.8)%,而微管变化不大;混合培养4、6、8、10 h,PLC信号通路阻断前的侵入率和F-actin重排率明显高于PLC分子阻断后(P<0.05)。侵入2 h后,DC2.4细胞膜中的PLC分子表达即开始升高,至8 h时达最高;U73122可抑制DC2.4细胞膜中PLC分子的表达,而对细胞浆中的PLC分子影响不大。结论:结核分枝杆菌可通过激活DC2.4细胞PLC分子触发F-actin细胞骨架重排,从而侵入DC2.4细胞,且PLC分子的表达主要存在于DC2.4细胞膜上。
- 徐水凌徐妍黄佳范宏彦金梦媚
- 关键词：树突细胞细胞骨架基因重排小鼠树突状细胞磷脂酶C
