国家自然科学基金(30772196)
- 作品数：5 被引量：13H指数：2
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- Reversine对小鼠C2C12成肌细胞增殖与分化作用的初步研究被引量：2
- 2010年
- 目的初步探讨Reversine对小鼠C2C12成肌细胞增殖分化的影响。方法体外培养C2C12成肌细胞系.实验第一步分三组:A组:正常对照组,B组:1μM Reversine处理12h组,C组:1μM Reversine处理24h组。上述三组用Annexin-V/PI双染法处理C2C12成肌细胞并用流式细胞仪技术检测三组C2C12细胞凋亡的影响;实验第二步分五组:D组:正常对照组,E组:单独1μM Reversine处理7d,F组:单独成骨诱导7d,G组:1μM Reversine诱导12h+单独成骨诱导7d,H组:1μM Reversine诱导12h+1μM Reversine联合成骨诱导7d。上述五组光镜下观察细胞形态的变化,并通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测五组C2C12成肌细胞分化抑制因子(ID2),肌肉发生调节因子(Myogenin),生肌因子后结蛋白(Desmin)mRNA的表达。结果与A组相比,C组1μM Reversine处理24h能引起C2C12细胞明显的凋亡,B组1μM Reversine处理12h的C2C12细胞未见明显的凋亡。与D组相比,E组和H组的细胞增殖明显受到抑制,F组和G组细胞逐渐增殖并融合。结论 Reversine能够显著的抑制成肌细胞的增殖分化过程。
- 汪海仪吴佳明王乐禹秦建强余磊宋辰刚王齐邱小忠
- 关键词：细胞凋亡细胞增殖细胞分化
- NF-κB p65介导的前列腺素E2分泌及DNA结合抑制因子2蛋白表达在促进大鼠桡骨骨折早期愈合的作用被引量：3
- 2011年
- 目的骨再生过程包含一系列复杂的分子信号途径,通过探讨NF-κB作为骨折愈合过程中"关键性激活点"的可能性,为基因治疗骨折延迟愈合和骨不连提供实验依据。方法取6～7周龄Wistar雄性大鼠33只,体重180～220 g,随机分为4组。对照组(A组,n=3)、单纯NF-κB抑制剂Bay 11-7082处理组(B组,n=6):分别在大鼠右前肢桡骨中下段经皮注射0.3 mL生理盐水或含50μmol/L Bay 11-7082的生理盐水,每天1次,持续至处死。单纯骨折组(C组,n=12)、Bay 11-7082干预骨折组(D组,n=12):制备右侧桡骨中下段骨折模型后,C组不作任何处理,D组处理方法同B组。观察大鼠一般情况,A组于注射后7 d,B、C、D组于注射后3、7 d取标本行ALP活性、前列腺素E2(prostaglandins E2,PGE2)含量检测以及Western blot检测NF-κB p65、BMP-7和DNA结合抑制因子2(inhibitor of DNA binding 2,Id2),并取C、D组14、28 d标本行HE染色观察。结果各组大鼠均存活至实验完成。注射后3、7 d B组ALP活性及PGE2含量与A组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);C组较A组增高,D组较A组降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。注射后3、7 d,各组骨折端组织中均见NF-κB p65、BMP-7、Id2表达,B组各因子表达水平与A组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);C组NF-κB p65和BMP-7蛋白表达水平较A组增高,Id2蛋白表达水平较A组降低,差异均有统计学意义(P<0.01);D组NF-κB p65、BMP-7蛋白表达水平较A组降低,Id2蛋白表达较A组增高,差异均有统计学意义(P<0.01)。组织学观察示,注射后14、28 d C组骨折端组织见大量骨性骨痂,而D组28 d时才见骨性骨痂。结论 NF-κB p65可通过调控PGE2分泌以及BMP-7和Id2蛋白表达促进大鼠桡骨骨折的早期愈合。
- 牛增志王乐禹胡晓芳汪海仪欧阳钧黄文华余磊邱小忠
- 关键词：NF-ΚB前列腺素E2BMP-7
- LPS诱导MC3T3-E1成骨细胞增殖并增加NF-κB p65蛋白的表达被引量：4
- 2010年
- 目的:研究LPS-NF-κB信号通路在骨形成过程中的作用。方法:MC3T3-E1成骨细胞常规培养,待细胞融合率为80%时,分别加入100μg/L和500μg/L LPS处理6 h。流式细胞仪检测细胞周期,计算细胞DNA相对增殖指数;RT-PCR法检测LPS处理成骨细胞后NF-κB mRNA的表达;蛋白质印迹法(Western blot-ting)检测LPS处理成骨细胞后NF-κB p65蛋白的表达;细胞免疫荧光法检测LPS处理成骨细胞后NF-κB p65的核易位情况;电泳迁移率变动分析(EMSA)LPS处理MC3T3-E1细胞后NF-κB活力的变化情况。结果:100μg/L和500μg/L LPS可诱导MC3T3-E1成骨细胞增殖;LPS处理成骨细胞后NF-κB mRNA的表达与正常组比较无显著变化(P>0.05),而NF-κB p65蛋白的表达明显高于对照组(P<0.01);LPS处理成骨细胞后免疫荧光法可明显观察到NF-κB p65从细胞质转移入细胞核,且EMSA结果显示LPS处理组细胞核内NF-κB结合活性增加。结论:低浓度的LPS可促使成骨细胞增殖,此过程中并不影响NF-κB p65的基因表达水平,但能增加NF-κB p65蛋白的表达并提高细胞核内NF-κB的结合活性。
- 王乐禹蒋萱余磊胡哓芳汪海仪欧阳钧邱小忠
- 关键词：骨重建脂多糖类成骨细胞NF-ΚB
- 前列腺素E2对MC3T3-E1成骨细胞基因表达谱的影响被引量：2
- 2011年
- 目的通过检测前列腺素E2（prostaglandins E2，PGE2）作用于MC3T3-E1成骨细胞后基因表达谱的改变，探索PGE2促进骨形成作用的分子机制。方法10μmol／L的PGE：处理MC3T3-E1成骨细胞30min后，用基因芯片技术检测PGE，处理成骨细胞后基因表达谱的变化，选取在骨再生过程中重要的基因用Western blot法检测验证。结果PGE，处理成骨细胞后，276个基因表达上调，其中和骨再生有关的基因主要有单核细胞向巨噬细胞转化基因（monocyte to macrophage differentiation，MMD）、核受体基因（nuclear receptor subfamily 4，group A，member 2，NR4A2）、骨形态发生蛋白-7（bone morphogenetic protein-7，BMP-7）、成骨细胞特异性因子（periostin，osteoblast specific factor，POSTN）和钙黏蛋白等；168个基因表达下调，其中和骨再生有关的基因有DNA结合抑制因子1，2，3（Id1，2，3）等。Western blot结果显示，与对照组比较，PGE：处理成骨细胞后核因子-κB（nuclear factor—κB，NF—κB）p65和BMP-7蛋白表达显著上升（P〈0．01），Id2蛋白表达显著下降（P〈0．01），与基因芯片结果基本一致。结论结合基因芯片结果和Western blot结果，可以推测PGE：处理成骨细胞后首先激活核受体基因NR4A2，继而引起NF-κB的活化，最后引起下游基因BMP-7和Id2等的变化从而引起成骨细胞分化，促进骨再生。
- 王乐禹胡晓芳欧阳钧汪海仪余磊秦建强邱小忠
- 关键词：前列腺素E2寡核苷酸序列分析骨再生
- Id2从核迁移到细胞质后通过调节凋亡诱导因子表达促进骨骼肌细胞分化被引量：2
- 2011年
- 目的探讨Id2在骨骼肌再生中的作用机制。方法用绿色荧光蛋白(GFP)-Id2-C2表达载体转染C2C12成肌细胞,对转染组和非转染组进行H2 O2处理和2%马血清处理,用RT-PCR法观察两组细胞Id2基因表达的差异;Western blotting观察两组细胞的成肌分化相关蛋白的表达情况;免疫荧光显微镜观察正常组、纤维损伤组以及去神经支配组大鼠的骨骼肌中Id2和凋亡诱导因子(AIF)蛋白的表达情况。结果与非转染组相比,Id2转染组细胞成肌分化明显增强。免疫荧光染色法显示,50μmol/L H2O2能增加核Id2蛋白的表达。在氧化应激条件下,Id2能抑制成肌调节因子(MyoD)而活化肌浆蛋白(myogenin)。2%马血清能引起大多数Id2从细胞核迁移到细胞质,从而抑制活性氧(ROS)诱导的线粒体AIF表达。免疫荧光分析显示,去神经支配组大鼠的骨骼肌中细胞内的Id2和AIF蛋白表达增多。结论 Id2从细胞核迁移到细胞质后能促进骨骼肌细胞分化,其作用与AIF表达水平相关。
- 胡晓芳赖桂华王乐禹欧阳钧余磊邱小忠
- 关键词：骨骼肌凋亡诱导因子ID2迁移免疫荧光
