广东省科技计划工业攻关项目(83027)
- 作品数：5 被引量：22H指数：3
- 相关作者：黄宪章陈炜烨庄俊华赵学芹李曼更多>>
- 相关机构：广东省中医院广州中医药大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组人白介素1受体Ⅰ型细胞外基因在毕赤酵母的表达
- 2010年
- 目的构建白介素1受体Ⅰ型细胞外基因(可溶性白介素1受体Ⅰ型,sIL-1RⅠ)的pPICZαA-sIL-1RⅠ重组表达载体,利用毕赤酵母表达技术表达sIL-1RⅠ蛋白。方法采用RT-PCR技术扩增基因sIL-1RⅠ,经酶切连接构建重组质粒pPICZαA-sIL-1RⅠ,转化E.coliStb13;阳性克隆经测序成功后,把pPICZαA-sIL-1RⅠ重组质粒电转入毕赤酵母菌株GS115,PCR对阳性克隆进行鉴定,以及对GS115转化子表型筛选。确定表型后,对重组菌株进行甲醇诱导蛋白表达。提取菌体蛋白和上清液进行Westernblotting检测以鉴定蛋白表达属于菌内表达还是分泌表达。结果 pPICZαA-sIL-1RⅠ重组质粒构建成功;pPICZαA-sIL-1RⅠ成功电转入酵母菌GS115;转化子表型筛选结果为甲醇诱导缓慢型Muts;对培养上清和菌体蛋白进行Westernblotting检测结果:上清没有检测到蛋白,在菌体内检测到蛋白。结论成功运用毕赤酵母表达体系表达sIL-1RⅠ蛋白,为sIL-1RⅠ的研究和应用提供实验基础。
- 吕渭辉庄俊华陈炜烨张战锋黄宪章
- 关键词：重组质粒毕赤酵母
- 抑癌基因PTEN的研究进展被引量：3
- 2009年
- 抑癌基因PTEN与细胞骨架张力蛋白同源，在人类癌症中存在普遍的突变。PTEN蛋白具有脂质磷酸酶和蛋白磷酸酶活性，通过多种机制对肿瘤细胞的存活、增殖、浸润和血管新生产生重要影响。随着研究深入，发现PTEN与关节炎、白血病等疾病相关。该文就PTEN的结构、功能和PTEN与疾病的关系做一综述。
- 李曼徐宁黄宪章
- 关键词：PTEN肿瘤
- PET32a-IL-1RⅠ重组质粒的构建及表达被引量：5
- 2011年
- 目的构建含有编码白细胞介素1Ⅰ型受体(IL-1R I)胞外区蛋白基因的PET32a-IL-1RⅠ重组质粒,利用原核表达体系表达IL-1RⅠ的胞外区蛋白。方法从人白细胞中提取总RNA,采用聚合酶链反应(PCR)从总RNA中扩增出IL-1RⅠ胞外段基因,并将其插入PET32a质粒,构建重组质粒,化学法转化大肠杆菌DH5α进行克隆。将克隆得到的PET32a-IL-1RⅠ重组质粒转化入表达菌株BL21(DE3),通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其蛋白表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western-Blot鉴定蛋白表达效果。结果菌落PCR及DNA测序证实IL-1RⅠ胞外段基因已正确克隆到载体中;重组质粒成功转入表达菌株BL21(DE3),SDS-PAGE和Western-Blot结果显示表达菌经IPTG诱导后表达出相对分子质量为67×103左右的蛋白。结论成功地克隆了人IL-1RⅠ胞外段基因并在大肠杆菌中进行了表达,为IL-1RⅠ的进一步研究打下了基础。
- 徐宁张战锋黄宪章陈炜烨何敏庄俊华
- 关键词：重组质粒原核表达
- 白介素-1受体Ⅰ型研究进展被引量：2
- 2009年
- 陈炜烨庄俊华黄宪章
- 关键词：白介素-1受体IL-1受体信号通路IL-1RI胸腺细胞细胞因子
- Akt/PKB信号通路调控机制的研究进展被引量：12
- 2009年
- 赵学芹黄宪章
- 关键词：AKT信号通路调控网络苏氨酸蛋白激酶PKB调节细胞因子
