国家自然科学基金(30571978)
- 作品数：11 被引量：71H指数：6
- 相关作者：郭锡熔张春梅陈荣华陈小慧邱洁更多>>
- 相关机构：南京医科大学江苏省人民医院中国人民解放军更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- Visfatin在3T3-L1脂肪细胞诱导分化过程中的分泌变化及胰岛素的调节作用被引量：4
- 2009年
- 目的观察3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化过程中Visfatin蛋白分泌水平的变化,探讨胰岛素对脂肪细胞Visfatin分泌水平的调节作用。方法体外培养3T3-L1前体脂肪细胞,采用1-甲基-3-异丁基黄嘌呤(MIX)、胰岛素、地塞米松方案诱导3T3-L1前体脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞,诱导分化过程中采用油红O染料鉴定并观察细胞分化情况。在诱导3T3-L1前体脂肪细胞分化成熟的不同时段(第0、4、6、8天)收集细胞培养上清液;并以100nmol/L胰岛素干预诱导分化第6、8天的成熟脂肪细胞,设未干预组为对照组,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中Visfatin的蛋白水平。结果未诱导分化的3T3-L1前体脂肪细胞仅分泌低水平Visfatin蛋白[(29.0±2.4)μg/L],诱导分化后随3T3-L1脂肪细胞逐渐分化成熟,脂肪细胞培养上清液中Visfatin的蛋白水平逐渐升高,至分化第8天成熟脂肪细胞Visfatin分泌达到高峰[(48.0±3.4)μg/L]。以100nmol/L胰岛素干预第6天和第8天分化成熟的脂肪细胞后,细胞培养上清液Visfatin的蛋白水平均较对照组显著升高[(57.9±5.7)μg/Lvs(45.7±3.8)μg/L;(61.0±4.2)μg/Lvs(48.0±3.4)μg/LPa<0.05]。结论Visfatin蛋白分泌与脂肪细胞成熟度有关,胰岛素对脂肪细胞Visfatin的分泌可能具有正性调节作用。
- 陈小慧张敏张敏池霞邱洁季晨博张春梅陈荣华
- 关键词：VISFATIN3T3-L1前体脂肪细胞脂肪细胞分化胰岛素
- 肥胖相关新基因NYGGF4对3T3-L1脂肪前体细胞的增殖调节作用被引量：6
- 2008年
- 目的观察NYGGF4基因过表达对3T3-L1脂肪前体细胞增殖的影响,探讨该基因在肥胖发生发展中的作用。方法采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增NYGGF4开放阅读框(ORF)的全长,通过双酶切连接法构建NYGGF4-pcDNA3.1真核表达载体。采用脂体法转染3T3-L1前体脂肪细胞,以pcDNA3.1空载和未转染细胞为对照。遗传霉素(G418)压力筛选稳定转染细胞株,PCR鉴定转染细胞的NYGGF4的mRNA水平。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测稳定转染细胞株连续7 d的生长状态,以转染空载和未转染正常3T3-L1为对照,绘制生长曲线。采用SPSS 10.0软件进行统计学分析。结果1.稳定转染细胞株有NYGGF4基因的表达,而pcDNA3.1空载未见人源性NYGGF4的表达;2.转染NYGGF4基因的3T3-L1细胞增殖速度明显较未转染和转染空载的3T3-L1细胞加快。结论新基因NYGGF4可明显促进3T3-L1脂肪前体细胞的增殖,可能影响肥胖的发生发展。
- 吴伟玲王玢张敏倪毓辉潘晓勤费莉郭梅陈荣华郭锡熔
- 关键词：肥胖症细胞增殖
- 人脂肪组织NYGGF4基因表达的调控研究被引量：1
- 2011年
- 目的探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)对肥胖基因NYGGF4表达的调控作用。方法取适量大网膜脂肪组织进行体外培养,分别以10 ng/ml TNF-α和20 ng/ml IL-6干预6、12、24、48、72 h,应用荧光定量RT-PCR技术检测NYGGF4 mRNA表达水平的变化。结果 (1)TNF-α对人脂肪组织NYGGF4 mRNA表达具有明显的上调作用,且具有明显的时间依赖性,呈现随作用时间延长,效应逐渐增加的趋势。(2)IL-6具有降低人脂肪组织NYGGF4 mRNA表达的作用,但起效较慢,IL-6作用时间与脂肪组织NYGGF4 mRNA水平呈明显负相关关系。结论炎性细胞因子TNF-α、IL-6对人脂肪组织NYGGF4基因的表达呈现不同模式的调控作用,TNF-α可以促进人脂肪组织NYGGF4基因表达,而IL-6对NYGGF4的表达则具有抑制作用。
- 赵一奇焦峰付海龙赵亚萍郭锡熔
- 关键词：脂肪组织肿瘤坏死因子Α白细胞介素6
- Resistin基因过表达对大鼠胰岛β细胞株RINm5F基础胰岛素分泌的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨Resistin基因过表达对大鼠胰岛β细胞株RINm5F基础胰岛素分泌的影响。方法体外培养大鼠胰岛β细胞株RINm5F,采用PCR法扩增大鼠Resistin基因全编码区cDNA片段,BamH和Xho双酶切后插入pcDNA3.1B表达载体,经测序验证正确后,采用脂质体转染pcDNA3.1-Resistin真核表达质粒入RINm5F细胞,筛选稳定表达株,并采用RT-PCR验证过表达Resistin的效率。在RINm5F细胞密度达到80%,缓冲液洗3遍,继续于缓冲液中生长2 h,收集上清液,采用ELISA法检测细胞培养上清中的胰岛素水平。同时Trizol一步法提取RINm5F细胞总RNA,采用RT-PCR法检测葡萄糖转运子2(Glut2)mRNA水平,并用紫外吸收剂凝胶密度扫描仪分析条带吸光度值。采用SPSS11.0软件进行统计学分析。结果观察过表达Resistin的RINm5F中ResistinmRNA表达,发现过表达Resistin的细胞株中Resistin mRNA水平为对照组的2.46倍(P<0.001)。过表达Resistin的RINm5F细胞的基础胰岛素分泌低于转染空载质粒的细胞,较对照组下降约32%(P<0.001)。过表达Resistin的RINm5F细胞中Glut2表达明显低于转染空载质粒的细胞,较对照组下降约38%(P<0.05)。结论Resistin基因过表达显著下调胰岛β细胞RINm5F的基础胰岛素分泌,其机制可能与Glut2有关。
- 刘峰邱洁张春梅季晨博陈小慧高春林赵亚萍陈荣华郭锡熔
- 关键词：RESISTIN胰岛Β细胞胰岛素分泌
- NYGGF4基因过表达对脂肪细胞胰岛素敏感性及分泌功能的影响被引量：10
- 2009年
- 目的观察肥胖相关新基因NYGGF4过表达对脂肪细胞的胰岛素敏感性及分泌功能的影响。方法体外培养稳定转染NYGGF4基因(NYGGF4-pcDNA3.1)的3T3-L1前体脂肪细胞,以转染空载体(pcDNA3.1)的3T3-L1细胞为对照,胰岛素加地塞米松加1-甲基-3-异丁基黄嘌呤(MDI)方案诱导细胞分化成熟,液闪仪测定3H标记的葡萄糖摄取率,Westernblot检测葡萄糖转运体4(GLUT4)的表达及转位;采用ELISA双抗体夹心法检测培养上清中TNF-α、IL-6、脂联素、抵抗素4种细胞因子的水平。结果NYGGF4过表达显著降低胰岛素刺激的葡萄糖摄取率(P<0.05)。NYGGF4过表达对总的GLUT4的表达量没有影响,但明显降低胰岛素刺激的GLUT4由细胞浆向细胞膜的转位(P<0.05)。过表达NYGGF4的脂肪细胞其培养上清中TNF-α、IL-6、脂联素及抵抗素的分泌水平与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。结论NYGGF4基因过表达通过下调胰岛素刺激的GLUT4的转位而减少脂肪细胞的葡萄糖摄取率,提示脂肪细胞对胰岛素的敏感性降低,而对脂肪细胞的分泌功能无明显影响。
- 张春梅邱洁陈小慧王玢张敏郭锡熔
- 关键词：葡萄糖转运体43T3-L1脂肪细胞
- 游离脂肪酸、白细胞介素-6对人成熟脂肪细胞中NYGGF4基因表达的调控被引量：2
- 2009年
- 目的观察游离脂肪酸(FFA)、IL-6对人成熟脂肪细胞中NYGGF4基因表达水平的调节作用。方法体外培养人前体脂肪细胞,采用1-甲基-3-异丁基黄嘌呤(MIX)、胰岛素、地塞米松、罗格列酮方案诱导人前体脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞,以1mmol/L混合FFA(油酸、亚油酸、月桂酸、肉豆蔻酸和花生四烯酸)、30μg/L人重组IL-6干预成熟脂肪细胞6、24h,均设未干预细胞为对照,采用实时荧光定量RT-PCR技术检测干预后成熟脂肪细胞中的NYGGF4基因mRNA表达水平。结果1mmol/L混合FFA干预人成熟脂肪细胞6h,NYGGF4基因mRNA相对表达量为0.00151±0.00024,与对照组(0.00114±0.00028)比较无显著性差异,干预时间延长至24h,NYGGF4基因mRNA相对表达量为0.00191±0.00019,显著高于对照组(0.00142±0.00019)(P<0.01);30μg/LIL-6干预人成熟脂肪细胞6hNYGGF4基因mRNA相对表达量为0.00058±0.00031,显著低于对照组(0.00114±0.00028)(P<0.05),干预24h,NYGGF4基因mRNA相对表达量为0.00123±0.00019,与对照组(0.00142±0.00019)比较无显著性差异。结论FFA可显著上调人成熟脂肪细胞中NYGGF4基因的表达,IL-6对人成熟脂肪细胞中NYGGF4基因表达具有一过性下调作用。
- 赵亚萍陈小慧季晨博高春林张春梅陈荣华郭锡熔
- 关键词：游离脂肪酸白细胞介素-6
- 新基因NYGGF4在肥胖患儿脂肪组织中的表达验证及生物信息学分析被引量：19
- 2008年
- 目的验证新基因NYGGF4在肥胖患儿脂肪组织中的表达,初步探讨NYGGF4的生物信息学特征。方法采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术验证肥胖与健康儿童脂肪组织中NYGGF4基因的表达差异,应用DNA Star、Blast、ProtParam、SOPMA、TargetP、TMHMM、ProtScale、SOSUI、InterproScan和SMART等软件或数据库分析NYGGF4的核苷酸基本特征、蛋白质理化性质、二级结构、信号肽、跨膜结构域、疏水性/亲水性、可溶性、结构域及亚细胞定位等。采用SPSS 11.0软件进行统计学分析。结果NYGGF4基因是一个未知的新基因,差异高表达于肥胖患儿脂肪组织中,生物信息学分析该基因cDNA全长1 527 bp,开放阅读框(ORF)长753 bp,编码250个氨基酸,预测相对分子质量28 271,定位在胞质,蛋白序列分析显示无跨膜螺旋结构,为一非分泌、可溶的亲水性蛋白,蛋白结构域分析提示NYGGF4的N端有一较短的亲脂性靶向序列、C端有一PTB结构域。结论NYGGF4基因是一差异高表达于肥胖患儿脂肪组织中的新基因,可能是胞质内一个信号转导分子,在肥胖的发生发展过程中发挥重要功能,有进一步研究的价值。
- 邱洁郭锡熔李晓南王玢倪毓辉张敏吴伟玲陈荣华
- 关键词：肥胖症计算生物学
- NYGGF4小鼠同源基因mRNA在遗传性ob／ob肥胖小鼠体内的表达被引量：17
- 2008年
- 目的观察NYGGF4小鼠同源基因在遗传性ob/ob肥胖小鼠(以下简称ob/ob小鼠)与正常C57/BL6J小鼠脂肪组织中的差异表达,分析NYGGF4小鼠同源基因在ob/ob小鼠体内的多组织表达特征,探讨NYGGF4小鼠同源基因与肥胖之间的关系。方法雄性10周龄ob/ob小鼠、正常小鼠(对照组)各12只,以乌拉坦(0.4g/kg)深度麻醉后取腹膜后脂肪、肝、脑、骨骼肌、心肌、结肠、肾、小肠、肺、胸腺、脾等组织,采用RT-PCR技术检测NYGGF4小鼠同源基因的mRNA表达水平,比较NYGGF4小鼠同源基因在ob/ob小鼠与正常对照小鼠腹膜后脂肪组织中的差异表达及在ob/ob小鼠各组织中的表达。结果1.ob/ob小鼠体质量[(38.94±1.97)g]显著高于对照组小鼠[(18.47±0.66)g](P<0.001);2.NYGGF4小鼠同源基因在ob/ob小鼠腹膜后脂肪组织中的表达水平[(89.18±8.31)%]显著高于对照组小鼠[(56.84±9.54)%](P<0.001);3.NYGGF4小鼠同源基因在肝脏、脑、腹膜后脂肪、骨骼肌、心肌、结肠、肾脏等组织中均有表达,从高至低依次为肝脏>脑>腹膜后脂肪>骨骼肌>心肌>结肠>肾脏,虽在小肠、肺、胸腺、脾等组织中未检测到阳性信号,但总体上呈现多组织表达特征。结论NYGGF4小鼠同源基因可能参与肥胖发生的病理生理机制,并在肝脏、脑、腹膜后脂肪、骨骼肌等胰岛素作用的靶组织中表达水平相对较高。
- 夏黎钱玲梅孔祥清倪毓辉张春梅童梅玲池霞吴伟玲郭锡熔
- 关键词：肥胖
- NYGGF4基因在人前体脂肪细胞分化过程中的表达及肿瘤坏死因子α对其调控的研究被引量：4
- 2010年
- 目的观察人前体脂肪细胞诱导分化过程中NYGGF4基因mRNA表达水平的变化，探讨重组肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factorα，TNFα）对成熟脂肪细胞中NYGGF4基因表达水平的调节作用。方法体外培养人内脏来源的原代前体脂肪细胞（human preadipocytes—visceral，HPA—v），在诱导HPA-v分化成熟的基础上，应用不同浓度重组TNFα干预成熟脂肪细胞16h，或以10ng／mL TNFα分别干预不同时间，采用实时荧光定量逆转录PCR技术检测的NYGGF4 mRNA表达水平。结果（1）HPA—v诱导分化至第17d，具备成熟脂肪细胞特征；（2）NYGGF4基因低表达于人前体脂肪细胞中，随脂肪细胞分化成熟其表达水平逐渐升高；（3）随TNFα干预浓度增高及干预时间延长，人成熟脂肪细胞中NYGGF4 mRNA水平呈现逐渐升高的趋势。结论NYGGF4基因具随脂肪细胞分化成熟表达逐渐上调的特征，TNFα能显著上调成熟脂肪细胞中NYGGF4基因的表达，其效应具有剂量依赖和时间反应性。
- 赵亚萍王加林蔡友群陈小慧张春梅郭锡熔
- 关键词：细胞分化肿瘤坏死因子Α
- 轻度维生素A缺乏对不同时期胎鼠肺发育的形态学影响被引量：12
- 2009年
- 目的观察轻度维生素A缺乏(MVAD)对不同时期胎鼠肺发育的形态学影响。方法24只SD雌鼠随机分为MVAD组(n=15)和对照组(n=9)。通过喂养缺乏维生素A(VA)饲料建立MVAD孕鼠模型,高效液相色谱法检测2组雌鼠血清VA水平和孕20 d胎鼠肝脏VA水平。取孕16 d、20 d、出生1 d MVAD组和对照组胎(乳)鼠肺组织,经HE染色,光镜下观察其肺形态学改变,比较MVAD组和对照组鼠血清VA、孕20 d肝VA水平及胎肺发育的形态学区别。应用SPSS 13.0软件进行统计学分析。结果MVAD组雌鼠毛色干枯,少食少动,孕鼠体质量下降,部分流产不孕,平均孕胎数较对照组下降(P<0.05);出生1 d MVAD组乳鼠体质量、身长、尾长值均较对照组小(Pa<0.01)。MVAD组雌鼠血清VA水平显著低于对照组(P<0.01),孕20 d胎鼠肝脏VA水平MVAD组亦显著低于对照组(P<0.01)。HE染色显示MVAD组16 d胎鼠支气管圆形管腔较对照组分支样管腔幼稚;MVAD组20 d胎鼠较对照组原始肺泡少,平均肺泡表面积较小,肺泡间隔较厚(P<0.01);MVAD组出生1 d乳鼠表现为肺发育的不均一性,较多区域有肺泡过度膨胀,肺泡间隔较薄(P<0.01),有离断;局部又有肺泡膨胀不全,间质充血,肺泡间隔增厚。结论VA在肺发育中起重要作用,MVAD会导致胎鼠肺发育不全。
- 许春阳丁明郭锡熔张劲松
- 关键词：维生素A缺乏胚胎肺发育形态学
