中国科学院知识创新工程重要方向项目(KSCX2-YW-G-016)
- 作品数：5 被引量：40H指数：4
- 相关作者：钟瑾还连栋林宇恒孙志增蒋立科更多>>
- 相关机构：中国科学院安徽农业大学首都师范大学更多>>
- 发文基金：中国科学院知识创新工程重要方向项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 乳链菌肽(nisin)抗性机制的研究进展被引量：21
- 2010年
- 乳链菌肽（nisin）是某些乳酸乳球菌产生的一种羊毛硫细菌素。其对包括食品腐败菌和致病菌在内的许多革兰氏阳性菌具有强烈的抑制作用,是目前世界上唯一被允许用作食品添加剂的细菌素。nisin的广泛使用虽未引发大范围的抗性,但在自然界或实验室的选择压力下,某些非nisin产生菌也获得了抵御nisin攻击的抗性机制。nisin抗性机制通常涉及两种方式,即非特异性的生理适应机制和特异性蛋白酶介导的主动防御机制。本文综述了近年来nisin抗性机制的研究进展。
- 初晓东林宇恒孙志增还连栋钟瑾
- 关键词：乳链菌肽抗性
- 通过定点突变提高乳链菌肽对热及pH的稳定性被引量：5
- 2010年
- 【目的】通过定点突变技术改变乳链菌肽(nisin)特定位置氨基酸,获得性质改善的nisin突变体,为扩大其应用范围提供依据。【方法】在抑菌谱扩大的nisin单突变体M21K nisinZ的基础上,对M21K nisZ基因第29位丝氨酸密码子进行定点突变;将其克隆至乳酸菌表达载体pMG36e,并在Lactococcus lactis NZ9800中进行表达;双突变体M21K/S29K nisinZ经分离纯化后检测其在抑菌活性、抑菌谱和稳定性等方面的变化。【结果】与单突变体M21K nisinZ及野生型nisinZ(wild-type,WT)相比,双突变体M21K/S29K nisinZ对指示菌的抑菌活性虽有所下降,但其对温度及pH值的稳定性有显著提高。同时其抑菌谱与M21K nisinZ相同,可抑制革兰氏阴性菌,扩大了WT的抑菌谱。【结论】通过改变nisin分子特定位置的氨基酸可以改善nisin分子的理化性质,有可能得到应用范围更广的nisin品种。
- 路遥蒋立科陈美玲还连栋钟瑾
- 关键词：乳链菌肽稳定性温度PH定点突变
- 一种改进的SON-PCR基因扩增方法被引量：7
- 2006年
- 单侧寡聚核苷酸嵌套PCR(single oligonucleotide nested PCR,SON-PCR)是一种简便易行的由已知序列克隆其侧翼序列的方法,但该法的第二轮PCR反应引发效率低,而且得到的产物两端含相同的引物序列,不可直接测序.针对该问题,将第二轮PCR改进为两段式扩增,即先以单侧嵌套引物引发5′端做选择性线性扩增,然后再加入第一轮引物特异引发3′端,使特异性和效率都得到很大提高,并可用PCR产物直接测序.分别用已报道的和改进的SON-PCR法克隆Botrytis cinerea羟甲基戊二酰CoA还原酶基因侧翼序列,后者获得期望结果,证明改进的SON-PCR方法行之有效.国内外尚未见同类报道.
- 邓洪渊王闵霞孙雪文马欣荣曹婷婷谭红
- 关键词：基因扩增
- 大肠杆菌重组乳链菌肽抗性蛋白(NSR)的表达纯化及其功能分析被引量：3
- 2009年
- 乳链菌肽(Nisin)是由某些乳酸菌产生的一种阳离子抗菌肽,而Nisin抗性蛋白(Nisin resistance protein,NSR)的表达则使一些非Nisin产生菌获得Nisin抗性。为深入探索NSR的作用机制,本研究在大肠杆菌中表达了去除N末端38个氨基酸残基的NSR(NSRΔ38)与GST的融合蛋白GST-NSRΔ38。通过谷胱甘肽(GSH)亲和层析和GST标签的切除后,得到纯化的NSRΔ38,并测定了该蛋白可能的nisin降解活性。反应产物的抑菌活性测定结果表明被NSRΔ38作用后的Nisin丧失了抑菌活性,而反相高效液相层析(RP-HPLC)分析结果进一步表明这是由NSRΔ38具备Nisin降解活性所造成的。本研究为NSR功能的深入研究奠定了工作基础。
- 刘家乐孙志增刘一苇高学玲钟瑾
- 关键词：乳链菌肽GST融合蛋白
- 乳链菌肽自身免疫基因nisI的表达对乳链菌肽产量的影响被引量：8
- 2010年
- 【目的】通过基因工程手段增加乳链菌肽(nisin)自身免疫基因nisI在nisin产生菌Lactococcus lactisNZ9800/pHJ201中的表达水平,增强该菌对nisin的抗性,从而达到提高nisin产量的目的。【方法】将带有强组成型启动子P59的免疫基因nisI克隆到nisin表达质粒pHJ201上,将重组质粒引入L.lactis NZ9800中,使nisI基因过量表达,得到重组菌株L.lactis NZ9800/pHMI,并比较该重组菌株与对照菌株L.lactis NZ9800/pHJ201的生长曲线、对nisin的抗性水平、抑菌活性及nisin产量的差异。【结果】nisI的表达对重组菌的生长速度没有明显的影响,却能促使重组菌株对nisin的抗性水平提高25%、在发酵6h和8h时,nisin的产量分别提高32%和25%。【结论】增加乳链菌肽自身免疫基因nisI的表达可以提高产生菌对nisin的抗性,从而提高乳链菌肽产量。
- 胡红梅蒋立科林宇恒还连栋钟瑾
- 关键词：乳链菌肽抑菌活性抗性水平
