国家公益性行业科研专项(200902008-2)
- 作品数：7 被引量：22H指数：4
- 相关作者：李长清曹海军叶生亮张学俊杜晞更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院四川大学中蓝晨光化工研究院有限公司更多>>
- 发文基金：国家公益性行业科研专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 洗脱条件及其因素对凝血酶原复合物有效成分的影响被引量：5
- 2013年
- 目的探讨洗脱条件及其因素对凝血酶原复合物(PCC)中凝血因子(F)Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ及蛋白(P)C、S、Z、抗凝血酶(AT)8种有效成分收率及比活的影响。方法选择洗脱条件中柠檬酸钠、NaCl、pH 3种可变因素,每因素取3水平,根据正交表配制不同洗脱体系;采用DEAE-Sephadex A-50凝胶,相同平衡、洗涤条件及上述不同洗脱体系,批式吸附法制备PCC浓缩物;检测浓缩物中8种成分的活性或含量,获得各成分的收率及比活;正交试验分析不同洗脱条件及其因素对8种成分收率及比活的影响。结果不同洗脱条件8种成分收率及比活有一定差异,2.4 mol/L NaCl条件比活总体较高。在所考察范围内,柠檬酸钠对FⅡ、FⅨ、FⅩ、PC、AT收率和PC、PS、AT比活有较大影响;NaCl对FⅦ、FⅩ、PS、PZ收率和FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩ、PZ比活有较大影响。不同水平条件,柠檬酸钠及NaCl含量越高,4种凝血因子收率与比活越高,但对4种抗凝蛋白收率及比活影响无规律;pH6.6水平,4种凝血因子收率较高,pH6.9,其比活较高,pH对4种抗凝蛋白收率与比活的影响无规律。结论洗脱条件中高浓度的NaCl可提高PCC的整体比活;低浓度的柠檬酸钠对PCC有效成分收率及比活也有较大影响;pH对PCC中凝血因子(FⅡ,Ⅶ,Ⅸ,Ⅹ)收率及比活的影响分别有共性,对抗凝蛋白(PC,PS,PZ,AT)的影响则无规律。
- 曹海军李志雄叶生亮王宗奎杜晞张学俊林方昭李长清
- 关键词：凝血酶原复合物凝血因子抗凝蛋白收率
- 正交试验法优化凝血酶原复合物的制备工艺被引量：7
- 2012年
- 目的采用正交试验法优化凝血酶原复合物（Prothrombin complex concentrate,PCC）的制备工艺。方法取DEAE-Sephadex A-50凝胶平衡体系中的柠檬酸钠、氯化钠、pH值3因素,每因素取3水平设计正交试验;称取9等份DEAE-Sephadex A-50凝胶干粉,分别采用试验设计的平衡体系进行平衡;平衡后的凝胶分别与等量健康人去冷沉淀混合血浆混合,制备凝血酶原复合物浓缩物;测定浓缩物蛋白浓度及凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ活性,获得4种凝血因子比活;通过正交试验直观分析及直接对比法确定较优及较差比活制备条件,对确定的条件进行验证;测定平衡体系电导率,分析正交试验中平衡体系电导率与4种凝血因子比活的相关性。结果正交试验直观分析法与直接对比法确定的凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ较优比活凝胶平衡条件一致：柠檬酸钠0.005~0.012 mol/L,氯化钠0.06~0.10 mol/L,pH 6.9~7.2;两种方法确定的较差平衡条件不同,分别为：柠檬酸钠0.012~0.02 mol/L、氯化钠0.1~0.14 mol/L,pH 7.2~7.5及柠檬酸钠0.005~0.012 mol/L,氯化钠0.1~0.14 mol/L,pH 7.2~7.5,经实验验证,两种方法确定的较优条件比活均优于较差条件,但两种较差条件中,直接对比法确定的条件更符合实际。平衡液电导率与4种凝血因子比活之间不存在线性关系,但在不同电导率条件下,4种凝血因子比活有较大波动,电导率9.67~10.34 ms/cm,4种凝血因子比活均较高;电导率12.16~12.90 ms/cm,4种凝血因子比活均较低。结论正交试验可用于凝血酶原复合物制备工艺优化,但不同分析方法结果有一定差异。平衡体系电导率对凝血酶原复合物比活有一定影响,在工艺优化时应予注意。
- 曹海军叶生亮王宗奎张学俊杜晞刘彬李志雄狄姗姗李长清
- 关键词：正交试验凝血酶原复合物
- 人凝血因子Ⅷ新型离子交换树脂的筛选及吸附性能的研究被引量：1
- 2012年
- 目的筛选对人凝血因子Ⅷ吸附效果较好的新型离子交换树脂,研究其吸附性能。方法将初始浓度为(20±1)IU/ml的冷沉淀提取液,恒温摇床振荡吸附2 h,测定吸附后上清液中蛋白浓度及FⅧ活性,通过蛋白吸附量及FⅧ活性吸附率,获得人FⅧ吸附效果较好的树脂;P-15与A-15树脂相同条件下吸附FⅧ,计算FⅧ的活性吸附率以及蛋白吸附量,考察树脂骨架对吸附的影响,同种方法考察树脂孔径大小对吸附的影响;测定吸附过程中吸附液中蛋白浓度的变化,得到吸附动力学曲线,从而确定吸附速率。分别改变A-15树脂用量、吸附温度、冷沉淀粗提液的pH值以及NaCl浓度,计算FⅧ的活性吸附率以及蛋白吸附量,考察树脂用量、温度、pH值、NaCl浓度对吸附的影响。结果 A-15树脂对FⅧ的活性吸附率为(78.76±4.2)%,蛋白吸附量(77.32±3.8)mg/g;A-15树脂未接基团时对FⅧ的活性吸附率为(12.34±5.6)%,蛋白吸附量为(18.68±5.3)mg/g;随着孔径的增大,树脂对FⅧ的活性吸附率和蛋白吸附量均为先增大后减小;树脂为1.25 g时,即可满足对FⅧ的吸附要求;吸附速率常速为0.003 56 g/mg.min;摇床温度为25～30℃、pH值为6.5～7.0、NaCl浓度为(0.1～0.2)mol/L时为较佳吸附条件。结论 A-15树脂对人凝血因子Ⅷ的吸附效果较好,在较佳吸附条件下,树脂对FⅧ的活性吸附率为78±4%,蛋白吸附量为(77±4)mg/g。
- 狄姗姗赵红卫李长清曹海军何琦邱家山方为茂李志雄
- 关键词：离子交换树脂分离纯化
- 2007～2011年批签发管理制度下的血液制品供应状况被引量：3
- 2012年
- 目的分析2007～2011年国内血液制品供应情况和供应特点,对未来血液制品市场供应做出评估,为建立血液制品供应信息管理化提供理论依据。方法从供应品种、批签发批次、生产数量、实际供应数量等多个角度考察2007～2011年我国人血白蛋白,人免疫球蛋白,静注人免疫球蛋白(pH4),人凝血因子Ⅷ等血液制品的批签发信息;分析中国血液制品市场供应情况。结果生物批签发批次从2007年不完全统计的800批次增长到2011年2 353批次,其中人血白蛋白供应量从2007年59.52吨增长到2011年182.93吨,2011年进口人血白蛋白达到78.22吨,占42.76%,国产达到104.71吨,占57.24%;人免疫球蛋白(肌注)2011年减少至183.6 Kg,约合61.2万瓶;静注人免疫球蛋白(pH4)(含冻干剂型)从2007年5.30吨增长到2011年14.15吨;破伤风人免疫球蛋白2011年供应为41 662万IU;狂犬病人免疫球蛋白2011年供应为49 432.3万IU;乙型肝炎人免疫球蛋白2011年供应为65 390.9万IU;其他血液小制品,2011年人纤维蛋白原供应69 901.5 g;2011人凝血酶原复合物供应为4 400.1万IU;2011年人凝血因子Ⅷ供应增长7 159.4万IU。结论施行生物制品批签发管理制度能使国家监管部门更准确地掌握生物制品的生产及质量情况,进一步保证血液制品的临床有效性,提高了血液制品的使用安全性。
- 张学俊叶生亮杜晞谢亦武赵朝明李长清
- 关键词：血液制品人血白蛋白
- 新型树脂扩张床吸附分离PCC的工艺及其放大研究被引量：4
- 2011年
- 目的优化新型离子交换树脂CG-6从人血浆吸附分离凝血酶原复合物的工艺并作放大研究。方法采用两因素两水平正交试验,优化筛选大孔阴离子交换树脂CG-6从人血浆中吸附分离PCC的保护剂;比较2种规模扩张床流体力学性能,研究吸附柱放大规律;考察该工艺生产PCC的回收率并分析成分。结果优化保护剂0.12 mol/L甘露醇+100 IU/L肝素条件下,FⅨ一次性洗脱回收率为(90.7±7.8)%,回收率提高41%。扩张床吸附柱放大效应小。ф25 mm柱洗脱液中杂蛋白少,FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩ回收率分别为(72.6±4.9)%、(72.9±10.6)%、(70.4±6.16)%、(77.8±11.8)%。结论工艺优化后制备的PCC比活及均衡度均优于传统工艺制得的产品。
- 黄亮赵红卫李长清曹海军邱家山何琦方为茂
- 关键词：凝血酶原复合物扩张床吸附阴离子交换树脂
- 不同吸附体系及因素水平对PCC中4类抗凝蛋白的影响研究被引量：3
- 2012年
- 目的探讨不同吸附体系及其柠檬酸钠、氯化钠、pH、电导4因素对凝血酶原复合物(PCC)中蛋白C、蛋白S、蛋白Z、抗凝血酶收率及比活的影响。方法选择柠檬酸钠、氯化钠、pH3因素3水平设计正交试验,配制9种PCC平衡吸附体系;凝胶平衡后,吸附血浆,洗涤、洗脱,制备PCC浓缩物;测定浓缩物中蛋白C和S、抗凝血酶活性、蛋白Z含量、总体积及蛋白浓度,获得四类抗凝蛋白收率及比活,比较不同吸附体系收率、比活总趋势;利用正交试验直观分析法分析柠檬酸钠、氯化钠、pH对蛋白C、S和Z收率及比活的影响;测定吸附体系电导率,分析电导率与4类抗凝蛋白收率及比活的关系。结果不同吸附体系4类抗凝蛋白收率及比活有较大差异,抗凝血酶二者均极低。柠檬酸钠对蛋白C收率及比活、蛋白S收率影响较大;pH对蛋白S比活、蛋白Z收率及比活影响极差分别为:0.120、6.847、0.716,高于其他因素;氯化钠对其影响均最小。柠檬酸钠浓度越低,蛋白C收率及比活越高,蛋白S收率则越低,0.015 mol/L水平蛋白Z收率为49.11%,高于其他水平,而蛋白S和Z比活最低;pH越低,蛋白Z收率则越高,pH7.0水平蛋白C和S收率及比活、蛋白Z比活最高;氯化钠浓度0.075 mol/L水平,蛋白C收率及比活、蛋白S和Z比活分别为:29.37%、0.533 IU/mg、0.401 IU/mg、2.362μg/mg,均高于其他水平,而蛋白S、Z收率最低。不同电导率条件,蛋白C收率及蛋白Z比活变化较大,其中蛋白Z与S收率、蛋白Z与S比活、蛋白C收率与比活变化趋势基本一致;(10.00±0.20)ms/cm条件,蛋白C、S和Z比活较高。结论不同吸附体系抗凝血酶收率及比活均极低,蛋白C、S和Z收率及比活间无规律性。氯化钠对蛋白C、S和Z收率及比活影响较小,柠檬酸钠、氯化钠、pH不同水平对蛋白C、S和Z收率影响效应无共性,0.01 mol/L柠檬酸钠,0.075 mol/L氯化钠、pH7.0水平蛋白C、S和Z比活最佳。电导率与四�
- 曹海军王宗奎胡吉军王玉梅叶生亮杜晞张学俊袁靖林方昭李长清
- 关键词：凝血酶原复合物抗凝蛋白收率
- 凝血酶原复合物制备过程吸附条件的研究被引量：5
- 2012年
- 目的探讨凝血酶原复合物制备过程凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ的吸附条件,提高活性收率。方法选择DEAE-SephadexA-50凝胶平衡体系中柠檬酸钠、氯化钠、pH 3种可变因素,每因素取3水平,根据L9(33)正交表设计试验,配制平衡液,分别对DEAE-SephadexA-50凝胶进行平衡处理后,按1.67g/L加入等量健康人混合去冷沉淀血浆,4℃搅拌,吸附凝血因子;吸附后凝胶洗涤、洗脱,检测洗脱液中凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ活性并进行活性回收率正交试验直观分析,获得较优吸附条件并进行验证。此外,分析吸附平衡体系电导率与4种因子活性收率间关系。结果柠檬酸钠、氯化钠、pH对凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ吸附影响不同;在所考察范围内,pH对4种凝血因子吸附影响效应趋势一致,pH越低,吸附效果越佳;柠檬酸钠及氯化钠浓度对4种凝血因子吸附影响效应趋势不一致,柠檬酸钠浓度越高,凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅹ吸附越佳,而凝血因子Ⅸ在(0.012～0.02)mol/L水平较佳;氯化钠浓度越低,凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ吸附越佳,而凝血因子Ⅹ在(0.1～0.14)mol/L水平较佳;平衡体系电导率与4种因子活性收率间不存在线性关系。结论吸附条件中pH及柠檬酸钠浓度对凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ吸附效果影响较大。柠檬酸钠(0.02～0.028)mol/L,氯化钠(0.02～0.06)mol/L,pH6.6～6.9条件,4种凝血因子吸附效果相对较佳。电导率对4种因子吸附效果影响不明显。
- 曹海军杜晞叶生亮张学俊王宗奎林方昭李长清
