国家科技重大专项(2009ZX08009-062B)
- 作品数：9 被引量：17H指数：3
- 相关作者：潘洪玉刘亚静张凌云刘金亮余刚更多>>
- 相关机构：吉林大学北京林业大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 青杄PsbO基因cDNA序列克隆及生物信息学分析被引量：1
- 2012年
- 利用RACE技术从已有的青杄均一化cDNA文库中克隆得到青杄(Picea wilsonii)PsbO基因cDNA的全长,并用生物信息学的方法对该cDNA的核苷酸序列、氨基酸序列的相似性,及编码蛋白PwPsbO的理化性质、亲水性/疏水性、二级和三级结构,PwPsbO基因进化树等进行了预测和分析.采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术,测定了青杄不同组织中的PsbO基因的相对表达水平.结果发现:青杄PsbO基因编码346个氨基酸,预测相对分子质量为36.6 kD,理论pI值为5.29,属于可溶性蛋白.二级和三级结构预测表明其含有较多的α螺旋、β折叠和随机卷曲结构.RT-qPCR发现该基因在青杄针叶和茎中表达量最高.这些结果为青杄中PsbO基因的初步功能研究奠定了基础.
- 刘亚静李长江孙帆张凌云
- 关键词：RACE生物信息学
- 四翅滨藜LRR类受体蛋白激酶基因在酵母中的表达及抗逆分析被引量：4
- 2012年
- 从四翅滨藜(Atriplex canescens)cDNA文库中得到一个亮氨酸富集重复序列类受体蛋白激酶(Leucine-rich repeat receptor-like protein kinases,LRR-RLKs)的全长cDNA序列,命名为AcLRR(登录号:JN974247).为研究AcLRR的抗逆功能,将其构建到酵母表达载体pYES-DEST52,并转化到酿酒酵母INVSc1菌株中,获得重组酵母INVSc1(pYES-AcLRR),对其进行盐、碱、干旱、高温、冷冻和活性氧等胁迫,分析在不同逆境胁迫下的表型特征.实验结果表明,INVSc1(pYES-AcLRR)在各种胁迫下的存活率明显高于对照,表明AcLRR基因具有抗NaCl,KCl,NaHCO3,Na2CO3、干旱、高温、冷冻和活性氧等胁迫的能力,特别对冷冻和活性氧表现出明显抗性.由此可推测该基因参与了四翅滨藜的抗逆调控过程.
- 余刚李敬涛孙新华刘金亮潘洪玉
- 关键词：四翅滨藜LRR酵母表达抗逆性
- 拟南芥转录因子NF-YC的原核表达及多克隆抗体制备被引量：7
- 2012年
- 采用PCR方法扩增NF-YC基因得到其全长cDNA序列,并将其克隆至原核表达载体pET-48b中,在大肠杆菌BL21中用IPTG诱导出分子量约为45 kD的融合蛋白,SDS-PAGE和Western blotting检测鉴定表达产物。利用亲和层析技术对融合蛋白进行纯化,纯化后的目的蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。间接ELISA检测抗体效价大于1 62 500,Western blotting结果显示,该抗体可特异性识别NF-YC蛋白。
- 卫静李长江刘亚静黄桂雪张凌云
- 关键词：拟南芥转录因子原核表达多克隆抗体
- 植物HAP3转录因子研究进展被引量：3
- 2011年
- HAP(NF-Y或CBF)是一类重要的转录因子,可以与CCAAT框结合并控制基因的表达,广泛分布于酵母、哺乳动物及植物细胞中。在哺乳动物和植物细胞中,HAP复合体包括3个不同的亚基:HAP2/NF-YA/CBF-B、HAP3/NF-YB/CBF-A及HAP5/NF-YC/CBF-C。HAP3转录因子在植物胚胎发育、叶绿素生物合成、花期调控等方面有重要作用。介绍植物HAP3转录因子结构特点、生物学功能等方面的最新研究进展。
- 刘亚静张盾张凌云
- 关键词：转录因子叶绿素生物合成花期调控
- 四翅滨藜AcDHN基因的克隆及其抗逆功能分析被引量：3
- 2012年
- 脱水素(dehydrin,DHN)是一类胚胎发育后期丰富蛋白(LEA),在植物脱水条件下能保护细胞内蛋白质和膜结构免受破坏。本研究中,从四翅滨藜(Atriplex canescens)cDNA文库克隆得到逆境胁迫相关蛋白基因AcDHN的全长cDNA(登录号:JN974246),并进行序列分析。将AcDHN分别插入到原核表达载体pET28a和双元表达载体pYES-DEST52中,通过转化大肠杆菌和酿酒酵母进行原核表达分析和真核表达分析。结果表明:AcDHN序列全长为1408bp,完整的开放阅读框长为1017bp,由338个氨基酸残基组成,预测蛋白质分子量为38.3kDa,理论等电点为6.47,AcDHN与仙人掌中DHN蛋白同源性为55%,AcDHN基因在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达出分子质量约45.2 kDa的融合蛋白。重组酵母菌株能表现出良好抗逆性,特别是对NaCl、低温、Na2CO3和NaHCO3胁迫的抗逆性,其中抗碱胁迫能力表现最强。
- 李敬涛余刚陈宣明范臻刘金亮潘洪玉
- 关键词：四翅滨藜酵母表达
- 四翅滨藜Osmotin-like Protein基因的克隆、序列分析及其原核表达
- 2013年
- 在构建四翅滨藜(Atriplex canescens)全长cDNA文库中通过随机克隆测序并进行EST分析基础上,得到四翅滨藜osmotin-like protein的1个cDNA序列,命名为AcOLP。AcOLPcDNA包含一个全长为687 bp完整开放阅读框,编码229个氨基酸,属于GH64-TLP-SF超家族,是一种病程相关5(PR-5)蛋白,其核酸序列与大洋洲滨藜(Atriplex nummularia)的osmotin-likeprotein基因的同源性为94%,对应编码氨基酸序列同源性为87%。将得到的序列提交GenBank,序列号为JN632587.1。与其他植物PR-5蛋白的氨基酸序列比对,AcOLP具有保守的半胱氨酸残基,与二硫键的形成有关。对AcOLP与其他植物的氨基酸序列的进化分析表明,其与大洋洲滨藜的亲缘关系较近。将AcOLP基因与原核表达载体pET-28a连接,进行融合表达,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达出分子质量约29 kD的蛋白。
- 王升阳张勇王健刘言志刘金亮潘洪玉
- 关键词：四翅滨藜PROTEIN基因克隆原核表达
- 四翅滨藜BADH基因的克隆、序列分析及其原核表达被引量：2
- 2012年
- 在构建四翅滨藜(Atriplex canescens)全长cDNA文库中通过随机克隆测序并进行EST分析基础上,得到1个四翅滨藜甜菜碱醛脱氢酶(betaine aldehyde dehydrogenase,BADH)的cDNA序列,命名为AcBADH。AcBADH cDNA包含1个长度为1 500 bp的完整开放阅读框,编码500个氨基酸,属于ALDH-SF超家族,其核酸序列与中亚滨藜的BADH基因的同源性为98%,对应编码氨基酸序列同源性为99%。将得到的序列提交GenBank(登录号:JF776157)。与其他植物BADH的氨基酸序列比对,AcBADH具有相同功能区域,包括N-端信号肽,底物结合及酶催化位点,因而推测可以参与甜菜碱的合成反应。对AcBADH与其他植物BADH的氨基酸序列的进化分析表明,AcBADH与鞑靼滨藜、中亚滨藜的亲缘关系较近。将AcBADH基因与原核表达载体pET28a连接,进行融合表达,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达出分子质量约58 kD的蛋白。
- 张勇余刚冯俊毕玉迪娜.塔布斯潘洪玉
- 关键词：四翅滨藜甜菜碱醛脱氢酶基因克隆原核表达
- 青杄中sPPa1的cDNA序列克隆及其生物信息学分析
- 2012年
- 以青杄(Picea wilsonii)均一化cDNA文库为模板,通过RACE方法克隆得到青杄PPa1基因cDNA全长,对该cDNA序列、核苷酸序列的相似性、理化性质、疏水性、二级结构、三级结构及是否跨膜进行了分析预测;进行了多序列比对并构建了系统树,同时对PPa1在青杄各组织中的表达量进行了检测。结果表明:青杄PPa1基因共由216个氨基酸组成,分子量为24.55 kD,理论PI为5.83,属可溶性蛋白;二级结构主要由α-螺旋、不规则卷曲和β-折叠构成;PPa1在青杄花粉中表达量最高。研究为进一步研究青杄PPa1的功能奠定了基础。
- 曹一博刘亚静张凌云
- 关键词：克隆RACE生物信息学
- 玉米盐诱导型启动子克隆及其植物表达载体构建
- 2012年
- 首先提取B73玉米(Zea mays)的基因组DNA,以此为模板利用PCR的方法克隆Zea mays salt-inducible protein kinase(STY2)基因上游1675 bp,将其命名为STY。从网站PlantCARE上的启动子预测工具在线对克隆到的启动子进行分析,结果表明:STY启动子中含有多种调控元件,典型的调控元件有:TATA-box,CAAT-box等等。另外还有2个盐诱导顺式作用元件GT1-motif和一些冷、干旱胁迫诱导有关的顺式作用元件,以及功能未知的元件。然后将克隆到的基因与植物双元表达载体pCAMBIA1301连接,并将其转入根癌农杆菌EHA105中,然后利用农杆菌介导法转化烟草,经过GUS组织化学染色验证STY的诱导功能。研究表明:STY启动子片段具有启动活性,为解决东北地区农业生产中严重的多元逆境胁迫问题开辟了有效途径。
- 郑亚杰冯頔魏毅刘金亮贾保磊张艳华潘洪玉张世宏
- 关键词：玉米启动子
