山东省自然科学基金(ZR2011HM012)
- 作品数：7 被引量：10H指数：2
- 相关作者：董晓光杨侠毕超徐海峰闫琳更多>>
- 相关机构：山东省眼科研究所山东省医学科学院济南大学更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金青岛市科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 细胞外基质相关分子在眼底新生血管形成中的作用被引量：4
- 2012年
- 眼底新生血管形成是导致增生型糖尿病视网膜病变（PDR）、早产儿视网膜病变（ROP）及年龄相关性黄斑变性（AMD）患者视力丧失的主要原因之一。细胞外基质（ECM）固有成分中的胶原蛋白、弹性蛋白等经酶解后在体外研究及动物实验中已证实可促进脉络膜新生血管（CNV）、视网膜新生血管形成的发生。ECM黏附分子中的整合素α5β1与纤连蛋白在体外可促进内皮细胞黏附、增生，其抑制剂于体内则可抑制CNV、视网膜新生血管的发生，整合素αVβ3及αVβ5的抑制剂在体内也可发挥类似作用。黏附分子中的选择素及细胞间黏附分子则主要通过介导白细胞与内皮细胞间的相互作用促进新生血管形成。ECM降解相关的丝氨酸蛋白酶，尤其是尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）（通过促进纤溶酶的生成）、基质金属蛋白酶（MMPs）（主要是MMP-2及MMP-9），在体外及体内实验中已证明可促进CNV、视网膜新生血管的发生，而I型纤溶酶原激活剂抑制剂（PAI-1）及组织金属蛋白酶抑制剂（TIMPs）则可抑制新生血管形成。对ECM相关分子在CNV、视网膜新生血管形成中作用的深入研究将为预防和治疗眼底新生血管形成提供新的思路和方法。
- 毕超刘延董晓光
- 关键词：视网膜新生血管脉络膜新生血管细胞外基质尿激酶型纤溶酶原激活物
- 膜联蛋白A2在小鼠视网膜新生血管形成过程中的表达及作用机制被引量：1
- 2013年
- 目的探讨膜联蛋白A2（ANXA2）在小鼠视网膜新生血管形成过程中的表达及作用机制。方法实验研究。将C57BL/6J小鼠分为4组：正常组（80只）、氧诱导视网膜病变（OIR）空白对照组（80只）、OIR阴性干扰组（50只）和OIR阳性干扰组（50只）。采用视网膜铺片法对比观察氧诱导视网膜新生血管形态学变化。实时荧光（real-time）PCR法检测正常组和OIR空白对照组12-30日龄小鼠视网膜组织中ANXA2mRNA的表达变化。取4组中17日龄小鼠视网膜行视网膜铺片。应用real-timePCR法及免疫印迹法检测4组17日龄小鼠视网膜组织中ANXA2、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9和组织金属蛋白酶抑制剂-2（TIMP-2）的mRNA和蛋白表达情况。应用单因素方差分析对4组结果进行比较，进一步的两两比较采用SNK-q检验。结果4组17日龄小鼠视网膜铺片结果发现，与正常组相比，OIR空白对照组视网膜新生血管迂曲、扩张，分布紊乱，渗漏严重，血管分层不清，大量异常交通支。ANXA2基因干扰后，OIR阳性干扰组视网膜新生血管迂曲现象减轻，血管渗漏较少，微血管瘤及新生血管芽数量减少，视网膜层次较明显，新生血管的危害减轻。不同日龄小鼠视网膜中ANXA2基因表达水平与新生血管生长密切相关，呈现出视网膜血管发育旺盛期高表达，而血管发育停滞期低表达的趋势。real-timePCR法检测结果显示，4组小鼠视网膜中ANXA2、VEGF-OL、MMP-2、MMP-9和TIMP-2的mRNA表达水平的差异均有统计学意义（F=8．122-74．009，P值均〈0．05）。进一步两两比较结果显示，OIR空白对照组的VEGF-α（0．22±0．04）、MMP-2（11．08±1．28）、MMP-9（4．64±0．38）的基因表达水平较正常组（0．16±0．02、2．18±1．39、1．17±0．25）显著上调（SNK-q检验：P值均〈0．01），而OIR阳性干扰组的VEGF-α（0．02±0．01）、MMP
- 王猛杨侠董晓光
- 关键词：视网膜新生血管化膜联蛋白A2血管内皮生长因子A基质金属蛋白酶类
- 高糖诱导人脐静脉内皮细胞中玻连蛋白的表达和细胞骨架重塑
- 2012年
- 目的观察高糖培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)中玻连蛋白(vitronectin,VN)表达的变化、细胞微丝骨架的改变以及细胞迁移能力、成管能力的变化。方法建立高糖培养的HUVEC体外模型,并常规培养HUVEC作为正常对照,Western blot方法检测VN蛋白的表达,免疫荧光细胞化学法观察HUVEC中微丝骨架F-actin的变化,划痕法检测HUVEC迁移能力的改变,Matrigel法检测HUVEC的成管能力。结果培养24h时,正常组和高糖组中VN蛋白表达量分别为0.893±0.119、1.295±0.080,48h时分别为0.874±0.115、1.724±0.098,差异均有统计学意义(t=-4.857、-9.710,均为P<0.05)。免疫荧光细胞化学结果显示培养24h、48h时高糖组中都伴有更加明显的细胞微丝骨架结构改变。划痕法检测培养24h时正常组和高糖组中迁移到划痕内的细胞数分别为(198.000±15.880)个、(242.000±11.130)个,48h时分别为(293.000±8.681)个、(334.000±10.863)个,差异均有统计学意义(t=-5.495、-7.193,均为P<0.05)。Matrigel法发现培养6h时高糖组中形成的闭合管腔数目(120.000±9.813)个多于正常组(91.000±9.867)个,12h时形成的闭合管腔数目(19.000±3.209)个也多于正常组(8.000±3.011)个,差异均有统计学意义(t=-5.163、-5.659,均为P<0.05)。结论 VN可能在糖尿病视网膜病变中起一定作用,且VN功能的发挥可能涉及到细胞骨架重塑,但需要进一步干扰VN的表达以证实其作用。
- 王玉风杨侠董晓光
- 关键词：高糖人脐静脉内皮细胞细胞骨架细胞迁移
- 高氧对小鼠视网膜新生血管模型中根蛋白的影响
- 2014年
- 目的探讨高氧诱导C57BL/6J小鼠视网膜新生血管形成过程中根蛋白(Radixin)的表达变化,为进一步研究视网膜新生血管性疾病的防治方法提供理论基础。方法将72只健康7 d龄小鼠随机分为2组,分别为:高氧诱导组:小鼠置于含氧体积分数为75%±2%的氧箱内饲养5 d构建高氧诱导视网膜新生血管动物模型;正常对照组:小鼠置于正常氧环境中饲养。待生后12 d、13 d、17 d、21 d、30 d分别处死小鼠。应异硫氰酸荧光素标记的右旋糖酐(FD-2000S)血管灌注造影视网膜铺片和HE染色观察视网膜新生血管的形态变化;应用免疫组织化学染色检测视网膜中Radixin的表达定位;应用RT-PCR和Westernblot检测不同时间点视网膜Radixin mRNA和蛋白表达情况。结果免疫组织化学染色结果显示两组Radixin均有表达,但高氧诱导组小鼠视网膜新生血管管壁、血管芽、内皮细胞和神经节细胞层Radixin大量表达。Real-time-PCR及Western-blot结果显示,不同组别和不同时间点间Radixin mRNA和蛋白表达水平差异均有统计学意义(mRNA:Fgroup=59.273,P=0.000,Ftime=538.071,P=0.000,Finteraction=297.126,P=0.000;蛋白:Fgroup=419.307,P=0.000,Ftime=663.946,P=0.000,Finteraction=354.538,P=0.000)。高氧诱导组小鼠生后12 d、生后13 d Radixin mRNA和蛋白表达水平均较正常对照组同龄小鼠低,差异均有统计学意义(均为P<0.01),生后17 d、生后21 d Radixin mRNA和蛋白表达水平均较正常对照组同龄小鼠明显增高,差异均有统计学意义(均为P=0.000)。正常对照组Radixin mRNA和蛋白的表达总体稳定在较低水平。两组生后30 d时Radixin mRNA和蛋白表达水平差异均无统计学意义(P=0.058、0.082)。伴随着视网膜新生血管的增生和消退,Radixin mRNA和蛋白的表达水平均呈先升高后降低的趋势。结论 Radixin参与了视网膜新生血管的形成,可能会成为预防和治疗视网膜新生血管性疾病的新靶点。
- 王龙梅闫琳杨侠董晓光徐海峰
- 关键词：高氧小鼠视网膜新生血管
- 玻连蛋白对高糖培养的人脐静脉内皮细胞的作用被引量：1
- 2013年
- 背景玻连蛋白是一种多功能糖蛋白。本研究组前期的动物实验表明，玻连蛋白在缺氧小鼠视网膜中表达明显增高，体外细胞实验表明高糖可以诱导人脐静脉内皮细胞人（UVECs）中玻连蛋白表达的增加。但目前尚未证实玻连蛋白在视网膜新生血管病变中的作用机制。目的观察玻连蛋白对高糖培养下人UVECs的细胞骨架结构、细胞迁移、细胞成管能力的影响。方法建立高糖培养的人UVECs体外模型，利用干扰RNA技术干扰玻连蛋白的表达。实验分为高糖组（含50mmol／L葡萄糖的DMEM培养液培养人UVECs）、阴性干扰组（对照用siRNA预干扰人UVECs后，再用含50mmol／L葡萄糖的DMEM培养液培养）和阳性干扰组（玻连蛋白siRNA预干扰人UVECs后，再用含50mmol／L葡萄糖的DMEM培养液培养），在各组中分别利用Westernblot法检测玻连蛋白的表达量，免疫荧光细胞化学染色结合荧光显微镜观察人UVECs微丝骨架，划痕法观察人UVECs的迁移情况，Matrigel法检测人UVECs的成管能力。各组的总体差异比较采用单因素方差分析，组间的多重比较采用LSD—t检验。结果Westernblot结果显示，0h时3个组间玻连蛋白表达量的差异无统计学意义（F=1．064，P〉0．05）；培养24h时高糖组、阴性干扰组、阳性干扰组中玻连蛋白的表达量依次降低，差异有统计学意义（F=15．519，P〈0．05）；培养48h时高糖组、阴性干扰组、阳性干扰组中玻连蛋白表达量也依次降低，3个组间的差异亦有统计学意义（F=37．521，P〈0．05）。免疫荧光结果显示，24h时高糖组中的细胞微丝骨架结构最明显，阴性干扰组次之，阳性干扰组最不明显；培养48h细胞微丝骨架分布亦然。划痕实验表明，培养24h时高糖组、阴性干扰组、阳性干扰组中迁移人划痕区的细胞数量依次减少，3个组间的差异有统计学意义（F=90．685，P〈0．05）；培养48h
- 王玉风杨侠董晓光
- 关键词：高糖细胞骨架细胞迁移人脐静脉内皮细胞
- Radixin shRNA对高氧诱导的小鼠视网膜新生血管形成的抑制作用被引量：1
- 2015年
- 背景视网膜新生血管性疾病是多种眼科疾病的病理基础，迄今为止新生血管形成的发病机制尚不完全清楚。研究显示，视网膜新生血管形成过程中radixin表达量明显增加，因此推测在视网膜新生血管相关疾病中抑制或沉默radixin基因有望成为治疗的新方法。目的研究radixin小发卡（shRNA）干扰质粒对氧诱导视网膜病变（OIR）小鼠模型视网膜中radixin基因表达的抑制作用，观察其对小鼠视网膜新生管形成的影响。方法将64只出生后7d的SPF级C57BL／6J小鼠按照随机数字表法分为正常对照组、模型对照组、radixin shRNA质粒组和shRNA质粒组，其中模型对照组、radixin shRNA质粒组和shRNA质粒组小鼠在体积分数（75±2）％的氧环境中饲养5d，建立OIR动物模型，正常对照组小鼠饲养于正常氧环境下。radixin shRNA质粒组和shRNA质粒组小鼠于出生后第12天分别于玻璃体腔注射1μg radixin shRNA质粒和对照shRNA质粒，小鼠出生后第17天，对各组小鼠行FD-2000S血管造影术，制备视网膜铺片，观察视网膜血管形态和分布；摘取各组小鼠眼球制备视网膜切片，采用视网膜苏木精－伊红染色法观察突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核和新生血管；应用免疫组织化学染色法检测radixin在视网膜中的表达分布；分别采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测radixin mRNA及其蛋白在视网膜组织中的表达情况。结果正常对照组小鼠视网膜铺片显示视网膜血管走行正常，模型对照组小鼠视网膜后极部大片状无灌注区，可见大血管迂曲和血管壁荧光素渗漏和新生血管，shRNA质粒组小鼠视网膜可见无灌注区和微血管瘤，而radixin shRNA质粒组小鼠视网膜后极部无灌注区面积较小，血管迂曲和渗漏现象较模型对照组和shRNA质粒组明显减轻。视网膜组织病理学检查显示，模型对照组和shRNA质粒组小鼠视网膜内界�
- 王龙梅杨侠闫琳刘廷董晓光徐海峰
- 关键词：视网膜新生血管细胞骨架蛋白
- 膜联蛋白A2在糖基化终末产物诱导的内皮细胞骨架重构及迁移中的作用被引量：3
- 2012年
- 目的观察膜联蛋白A2(annexin A2,ANXA2)对糖基化终末产物牛血清白蛋白(advanced glycation bovine serum albu-min,AGE-BSA)培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)骨架重塑、细胞迁移能力的影响,探讨ANXA2在糖尿病视网膜新生血管病变中的作用,为视网膜新生血管性疾病的防治寻找有效的分子靶点提供理论依据。方法用含AGE-BSA(0.2g·L-1)的高糖型DMEM培养液培养HUVEC,并用ANXA2 siRNA干扰AGE-BSA培养的HUVEC中ANXA2的表达;免疫沉淀及Western blot检测各组中ANXA2蛋白的表达;FITC-鬼笔环肽染色观察ANXA2对HUVEC骨架重塑的影响;划痕法观察ANXA2对HUVEC迁移能力的影响。结果空白对照组、阴性干扰组、阳性干扰组ANXA2蛋白的表达量分别为1.17±0.03、1.18±0.04、0.68±0.05,阳性干扰组与空白对照组之间差异有显著统计学意义(F=152.76,P=0.000);空白对照组、BSA组、AGE-BSA组、阴性干扰组、阳性干扰组处理24h后骨架染色显示:AGE-BSA组同空白对照组相比,细胞骨架应力纤维排布改变,而阳性干扰组同空白对照组骨架排布相仿;空白对照组、BSA组、AGE-BSA组、阴性干扰组、阳性干扰组处理24h后迁移入划痕的细胞数分别为153±12、143±16、192±8、176±6、142±14,AGE-BSA组与空白对照组之间、阳性干扰组与AGE-BSA组之间差异均有统计学意义(均为P<0.05);空白对照组、BSA组、AGE-BSA组处理24h后磷酸化ANXA2蛋白的表达量分别为0.94±0.57、0.94±0.32、1.12±0.95,AGE-BSA组与空白对照组之间差异有统计学意义(F=6.899,P<0.05)。结论 ANXA2参与AGE-BSA诱导的HUVEC细胞骨架重塑及细胞迁移能力改变,并且极可能通过其酪氨酸磷酸化形式来发挥中介作用,针对ANXA2生物学特性的深入研究可能为糖尿病视网膜病变的预防治疗提供新的思路及方法。
- 毕超杨侠董晓光
- 关键词：膜联蛋白A2糖基化终末产物细胞骨架迁移磷酸化
