国家自然科学基金(81370261)
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
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- Islet-1诱导成纤维细胞系C3H10T1/2向心肌细胞分化过程中组蛋白乙酰化与DNA甲基化在GATA4启动子区的关系
- 2016年
- 目的研究在Islet-1诱导间充质干细胞C3H10T1/2向心肌细胞特异分化过程中的心肌早期发育相关基因GATA4启动子区域组蛋白乙酰化与DNA甲基化的相互作用关系。方法构建过表达Islet-1细胞模型,在GATA4基因表达过程中,用染色质免疫共沉淀技术(CHIP)检测其启动子区组蛋白H3K9乙酰化的时序性变化;甲基化特异性PCR技术(MSP)检测其启动子区Cp G岛甲基化的时序性变化,明确两者之间相互作用的关系。结果随着Islet-1诱导C3H10T1/2向心肌细胞特异分化的时间延长,GATA4基因的表达增高(P<0.05),其启动子区第2个Cp G位点组蛋白H3K9乙酰化的水平升高(P<0.05),DNA甲基化水平降低(P<0.05)。结论 Islet-1诱导C3H10T1/2细胞向心肌细胞特异分化过程中,组蛋白乙酰化和DNA甲基化在调控心肌特异早期转录因子GATA4表达过程中存在相互拮抗作用,从而促其表达呈时序性变化。
- 王越朱静田杰许皓易勤赖星宇
- 关键词：组蛋白乙酰化DNA甲基化
- C6胶质瘤微环境中大鼠BMSCs恶性转变与NF-κB高表达的相关性被引量：4
- 2014年
- 目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)在C6胶质瘤微环境中是否存在NF-κB和STAT3的激活及高表达以及其与BMSCs恶性转变的关系。方法本实验共分4组:实验组(C6与BMSCs间接共培养空白)、空白对照组(BMSCs单独培养)、阴性对照组(大鼠星形胶质细胞与BMSCs间接共培养)、阳性对照组(C6单独培养)。采用流式细胞术鉴定BMSCs;ELISA检测细胞上清液中IL-6水平;RT-QPCR检测细胞中NF-κB P65、STAT3、c-Myc的mRNA的表达;Western blot及免疫荧光法检测细胞中NF-κB P65、STAT3、P-STAT3、c-Myc蛋白表达及定位。结果第三代骨髓间充质干细胞CD29、CD90均呈阳性表达,CD45呈阴性表达;实验组BMSCs与对照组相比细胞形态发生显著改变,核质比增大;实验组细胞上清液IL-6水平高于阴性对照组(P<0.05);实验组NF-κB P65、c-Myc在mRNA及蛋白水平显著高于阴性对照组,且STAT3磷酸化水平显著高于阴性对照组(P<0.05)。结论 BMSCs处在C6胶质瘤微环境中存在NF-κB和STAT3的激活和高表达,且NF-κB的激活及高表达是BMSCs恶性转变的重要因素之一。
- 燕莎朱静田杰张春敏谭彬崔建邦杨春梅
- 关键词：核转录因子-ΚB
- Islet-1促C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化过程中的电生理特性被引量：2
- 2015年
- 目的:研究Islet-1体外诱导C3H10T1/2细胞分化为心肌样细胞过程中,钠、钙离子通道电流的表达情况。方法:Islet-1慢病毒载体感染C3H10T1/2细胞,观察细胞形态变化。差速贴壁法分离培养新生小鼠心肌细胞,以免疫荧光法进行鉴定。RT-PCR检测相应钠、钙离子通道基因mRNA表达水平。全细胞膜片钳技术检测细胞钠、钙离子通道电流表达情况。结果:实验组细胞形态呈心肌样改变;实验组钠、钙离子通道基因SCN5A(INa离子通道基因)、CACNA1C(IL-Ca离子通道基因)和CACNA1H(IT-Ca离子通道基因)表达量均明显高于空白组和阴性对照组(均P<0.05);膜片钳检测空白组和阴性对照组无内向离子通道电流表达,实验组检测到与心肌细胞相似的钠电流(INa)和T型钙电流(IT-Ca),峰值电流呈现不均一性,总体水平低于小鼠心肌细胞;IL-Ca的离子通道基因虽表达增高,但未测得电流表达。结论:实验组钠、钙离子通道基因表达增高,可产生与心肌细胞相似的钠、钙离子通道电流,说明Islet-1可诱导C3H10T1/2细胞分化为有电生理功能的心肌样细胞。
- 杨春梅许皓易勤燕莎崔建邦田杰朱静
- 关键词：心肌细胞
- STAT3异常激活对人脐带间充质干细胞在乳腺癌微环境中恶性转化的影响被引量：2
- 2015年
- 目的探讨人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)在MCF-7B乳腺癌微环境中是否存在恶性转变并探究其生物学变化与STAT3异常激活及高表达的关系。方法将hUCMSCs分为3组:空白对照组(hUCMSCs单独培养)、实验组(hUCMSCs与MCF-7B共培养)和阳性对照组(MCF-7B单独培养)。倒置显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞周期;RT-q PCR检测STAT3及其下游原癌基因c-Myc及抗凋亡Bcl-x LmRNA的表达;细胞免疫荧光检测p-STAT3、c-Myc和Bcl-x L蛋白表达及定位;Western blot检测p-STAT3、STAT3、c-Myc和Bcl-x L蛋白表达。结果实验组hUCMSCs与对照组比较核质比增大,细胞大小不一,排列紊乱;实验组细胞G1期比例显著低于对照组(P<0.05),S期和G2期比例均显著高于对照组(P<0.05);实验组STAT3、c-Myc和Bcl-x LmRNA的表达均显著高于对照组(P<0.05);实验组p-STAT3、STAT3、c-Myc和Bcl-x L的蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.05),且主要定位于细胞核内。结论 hUCMSCs在MCF-7B乳腺癌微环境中存在恶性转化趋势,且STAT3的异常激活及高表达是hUCMSCs恶性转化的重要因素之一。
- 汪玲朱静田杰谭彬燕莎
- 关键词：人脐带间充质干细胞恶性转化
- Islet-1促MSCs心肌特化过程中Nkx2.5启动子区域DNA甲基化水平变化被引量：2
- 2014年
- 目的:研究Islet-1诱导C3H10T1/2细胞定向分化为心肌样细胞过程中表达增加的心肌早期发育相关基因Nkx2.5启动子区域DNA甲基化水平的变化情况。方法:高表达Islet-1基因的慢病毒载体转染间充质干细胞C3H10T1/2,免疫荧光检测Islet-1表达情况,在Nkx2.5表达达高峰的时间点,通过甲基化特异性PCR技术检测其启动子区域DNA甲基化水平,比较C3H10组(空白对照组)、阴性对照组(转染慢病毒空载体)和实验组(转染高表达Islet-1基因的慢病毒载体)上述基因启动子区域的DNA甲基化水平。结果:实验组Nkx2.5基因启动子区域DNA甲基化水平低于其他两组(均P<0.05)。结论:高表达Islet-1促C3H10T1/2细胞特异性向心肌细胞方向分化过程中,心肌早期发育相关基因启动子区域DNA甲基化水平降低,促进其表达增加。
- 尹耐靖杨春梅谭彬张春敏燕莎崔建邦田杰朱静
- 关键词：DNA甲基化心肌细胞
- 脑胶质瘤微环境中人脐带间充质干细胞STAT3过度激活及生物学行为改变分析被引量：2
- 2016年
- 目的 :探讨人脐带间充质干细胞hUCMSCs(human umbilical cord mesenchymal stem cells)在U251脑胶质瘤微环境中是否存在STAT3(signal transducer and activator of transcription 3)过度激活及细胞生物学行为改变。方法:本实验将不同处理的细胞分为3组:空白对照组(h UCMSCs单独培养)、实验组(hUCMSCs与U251共培养)、阳性对照组(U251单独培养)。流式细胞术检测细胞周期;RT-qPCR检测STAT3及其下游原癌基因c-Myc和抗凋亡基因Bcl-xl的m RNA的表达;Western blot及免疫荧光检测激活状态的p-STAT3及c-Myc和Bcl-xl蛋白表达及定位;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果:实验组h UCMSCs排列紊乱,成簇分布,呈现轻度异型性;实验组细胞周期G1期比例显著低于对照组(P=0.000);实验组STAT3、c-Myc和Bcl-xl的mRNA表达水平均明显高于空白对照组(P<0.05);实验组p-STAT3、STAT3、c-Myc和Bcl-xl的蛋白表达明显高于空白对照组(P<0.05),且主要定位于细胞核内。实验组细胞的迁移和侵袭能力均显著高于对照组(P<0.05)。结论:hUCMSCs在U251胶质瘤微环境中存在STAT3的过度激活及生物学行为改变,出现恶性转变倾向。
- 汪玲朱静田杰谭彬燕莎
- 关键词：人脐带间充质干细胞
