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葡萄总RNA提取方法的研究被引量：134: 2003年; 针对葡萄组织中多酚、多糖类物质含量较高的特点,比较了改进SDS/酚法、异硫氰酸胍法和市售总RNA提取试剂盒等不同的提取方法,3种改进方法均能从葡萄幼嫩叶片中提取到总RNA。其中改进的SDS/酚法能有效抑制酚类物质和多糖对总RNA提取的影响,能够从成熟的叶片和完熟果实的果皮中获得质量高、完整性好的总RNA,28SrRNA亮度约为18SrRNA的2倍,A260/A280介于1.8～2.0之间,A260/A230大于2.0,且总RNA产率高,其中幼叶总RNA产率为261.20μg/g,成熟叶产率为191.40μg/g,完熟果皮产率为31.50μg/g,完全适于进行DDRT-PCR、Northernbolt和cDNA文库构建等研究。且该方法具有快速、简单、有效的特点。; 张今今王跃进王西平杨克强杨进孝; 关键词：葡萄总RNA

中国葡萄属野生种抗白粉病抗逆基因植物表达载体的构建被引量：15: 2005年; 将质粒pSB166中包含ED35s启动子、Omega元件及TNOS终止子的一段核苷酸序列定向克隆到质粒pCAMBIA1303,构建了中间表达载体pWR306;以中国野生葡萄华东葡萄白河35-1cDNA为模板,通过PCR扩增出葡萄芪合成酶基因(STS)、醛脱氢酶基因(ALDH),与pGEM-TEasy克隆载体连接,获得重组质粒pGEM-TEasy-STS和pGEM-TEasy-ALDH;双酶切重组质粒及表达载体pWR306,将STS、ALDH基因片段与线性表达载体pWR306进行定向连接,构建了葡萄芪合成酶基因及醛脱氢酶基因的植物表达载体pWR-STS、pWR-ALDH,并用改进冻融法导入农杆菌GV3101。; 徐伟荣王跃进王西平郝炜孙马; 关键词：中国野生葡萄植物表达载体

中国野生葡萄打破休眠研究被引量：3: 2003年; 用石灰氮对中国野生葡萄进行打破休眠研究。结果表明,在供试的7个野生葡萄株系中,留坝-7、留坝-1、江西-1(绿毛, )、通化-3涂抹5～10％石灰氮及平利-7涂抹20％石灰氮有较好的促进萌芽效果。应用同一浓度15％石灰氮处理另外10个野生葡萄株系,唯有秦岭葡萄略阳-4提高萌芽率明显,其余株系表现不明显,或表现有抑制作用,表明不同浓度及同一浓度石灰氮处理中国野生葡萄,在打破休眠方面功效不同。; 于大永王跃进张剑侠杨亚洲杨进孝; 关键词：中国野生葡萄石灰氮打破休眠萌芽

中国野生葡萄抗黑痘病基因RAPD标记的克隆、序列分析及辅助育种应用被引量：15: 2009年; 对中国野生葡萄抗黑痘病基因RAPD标记OPS03-1300进行了克隆、测序及序列分析,结果表明该标记实际长度是1354bp,因此更名为OPS03-1354,其GenBank登录号为DQ350885。该标记序列与99条来自欧洲葡萄的EST有同源性,其中与1条来自赤霞珠叶片感染葡萄皮尔斯病病原菌后获得的EST同源性为82%,与2条来自赤霞珠果实在不同发育期获得的EST同源性分别为80%和85%。该序列与1条来自中国野生华东葡萄白河-35-1叶片接种霜霉病病原菌后获得的EST同源性为67%。该序列编码葡萄的一种假定蛋白。此外,应用该标记对中国野生葡萄与欧洲葡萄的种间杂交广西-1×京可晶F1代339株、白河-35-1×佳利酿F2代207株进行了辅助选择。; 张剑侠王跃进张艳艳周邦军; 关键词：中国野生葡萄 RAPD标记克隆标记辅助育种

抗病无核葡萄胚挽救技术体系优化及新品系培育: 以田间人工杂交的13个葡萄种间杂交组合和6个种内杂交组合为材料进行胚挽救技术体系的优化研究。通过胚挽救获得了19个杂交组合的葡萄新种质814份;获得了抗病无核葡萄胚挽救的适宜培养基、培养方式和最佳母本,三者搭配使胚发育率...; 潘学军王跃进张剑侠唐冬梅; 关键词：葡萄无核胚挽救; 文献传递

葡萄感白粉病基因的RAPD标记及其序列分析被引量：6: 2008年; 【目的】为葡萄抗白粉病育种的辅助选择提供理论依据。【方法】以抗病的中国野生葡萄白河-35—1与感病的欧洲葡萄佳利酿杂交亲本及其F1、F2代为试材，通过对520个随机引物的筛选，从佳利酿中获得了葡萄感白粉病基因的RAPD标记OPV06-1100，并在欧洲葡萄、中国野生华东葡萄和美洲野生葡萄中进行了分析验证。【结果】经克隆、测序，RAPD标记OPV06-1100实际长度为1016bp。该标记与欧洲葡萄黄酮醇合成酶基因有92％的同源性，与13条欧洲葡萄叶片非生物胁迫数据库的EST序列有89％～97％的同源性；与3条来自欧洲葡萄感染葡萄皮尔斯病原菌后转录反应获得的EST序列有93%～95％的同源性；与拟南芥感白粉病基因PMR6序列有27．1%的同源性。[结论]OPV06—1100为葡萄属植物感白粉病基因的RAPD标记。该标记为认识葡萄感病基因和基因组以及标记辅助育种奠定基础。; 张剑侠王跃进徐伟荣张艳艳; 关键词：葡萄白粉病 RAPD标记

植物遗传转化中农杆菌抑制的研究: 2007年; 以农杆菌GV3101侵染预培养的无菌烟草叶方块，共培养2d后，外植体通过5种表面脱菌处理后转接在培养基上进行抑菌和筛选培养。结果表明，共培养后的材料先用无菌水冲洗6～8遍，以脱去材料表面大部分农杆菌，再用2％（V/V）NaClO漂洗10min，然后无菌水冲洗5遍，捞出后放在无菌滤纸上吸干多余水分，转接在抑菌和筛选培养基Ms＋BA2．0mg／L＋NAA0．1mg／L＋Cef500mg／L＋HygB20mg／L上的抑菌效果良好。; 孙伟生王跃进; 关键词：农杆菌

华东葡萄抗白粉病基因差异表达cDNA克隆与序列分析被引量：2: 2011年; 为筛选和克隆华东葡萄抗白粉病相关基因,以高抗葡萄白粉病的华东葡萄株系白河-35-1为材料,采用mRNA差异显示(DDRT-PCR)技术进行在白粉病病原菌诱导下抗白粉病差异表达基因的研究,筛选出适宜DDRT-PCR的引物组合184对,获得抗白粉病差异表达的cDNA片段13个,序列分析结果显示其功能分别涉及转录调控、能量代谢、蛋白合成、防御反应等生理生化过程,表明华东葡萄白河-35-1抗白粉病是诸多代谢途径相互协调作用的结果。这些差异片段的获得为探明葡萄抗白粉病分子机制提供了前期理论基础。; 王西平王倩王跃进; 关键词：华东葡萄抗白粉病 MRNA差异显示

基于表达序列标签(EST)的基因克隆和基因表达分析研究进展被引量：20: 2002年; 表达序列标签 (expressed sequence tag,EST)是在生物体特定时空表达基因的一段 c DNA序列。随着生物信息学的发展 ,EST已成为基因定位、基因克隆、基因表达分析的有力工具。文章对应用 EST克隆基因和分析基因表达的研究进展进行了综述 ,并讨论了利用; 杨克强王跃进张今今王西平张剑侠万怡震; 关键词：表达序列标签基因克隆基因表达

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国家自然科学基金(30170653)