山东省自然科学基金(ZR2011HM049)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 相关机构：山东大学山东省疾病预防控制中心山东省胸科医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- pEGFP-N1-ZIP2真核表达载体的构建及对人T淋巴和单核细胞系锌转运体基因表达的影响被引量：1
- 2012年
- 目的构建pEGFP-N1-ZIP2真核表达载体,观察其在人T淋巴细胞系Jurkat-E6-1和人单核细胞细胞系THP-1中的表达,并检测ZIP2在两种细胞系中过表达及其对其他锌转运体的影响。方法利用外周血经RT-PCR扩增获得人ZIP2 cDNA序列,将其与pEGFP-N1定向连接,构建完成转染细胞48 h后,通过RT-PCR检测ZIP2过表达情况,并检测ZIP1、ZIP6、ZIP8、ZIP10、ZnT1、ZnT5等锌转运体表达变化。结果经过双酶切鉴定以及测序结果显示目的基因大小、插入方向均正确。在Jurkat-E6-1细胞中,ZIP2过表达使ZnT-1表达显著降低(P<0.05),但在THP-1细胞中,ZIP2过表达对其他锌转运体表达没有显著影响。结论成功构建pEGFP-N1-ZIP2真核表达载体,瞬时转染Jurkat-E6-1细胞和THP-1细胞,Jurkat-E6-1细胞中ZIP2过表达使ZnT1表达下调,而THP-1细胞中ZIP2过表达并未对选定的其他锌转运体产生显著影响,两种不同的免疫细胞系中ZIP2过表达对锌转运体家族其他成员影响表现出差异。
- 蒋雅丽陶艳婷胡晓燕徐春晓张莲英
- 关键词：锌转运体过表达聚合酶链反应
- 锌转运体ZIP10过表达对乳腺癌细胞侵袭能力的影响
- 2012年
- 目的:将ZIP10基因真核表达载体转染乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7细胞,研究ZIP10过表达对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。方法:经双酶切后凝胶电泳鉴定ZIP10基因表达载体pEGFP-N1-ZIP10,利用脂质体转染法将pEGFP-N1-ZIP10及其相应空载体分别转染乳腺癌细胞MDA-MB-231(ER-)及MCF-7(ER+)。RT-PCR检测乳腺癌细胞中MMP-2、MMP-9的mRNA水平,Western blot技术检测细胞中ZIP10蛋白质的表达水平,MTT法观察转染pEGFP-N1-ZIP10前后乳腺癌细胞增殖活性,Transwell实验观察转染pEGFP-N1-ZIP10前后乳腺癌细胞侵袭能力的改变。结果:乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞瞬时转染成功后,MMP-2、MMP-9的mRNA水平没有显著差异,MTT检测结果显示,pEGFP-N1-ZIP10转染乳腺癌细胞后对其增殖活性没有明显影响;Transwell肿瘤细胞侵袭实验显示,ZIP10过表达可显著增加乳腺癌细胞的侵袭能力。结论:ZIP10真核表达载体转染乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231使ZIP10过表达,对细胞增殖活性没有明显影响,但可明显增加肿瘤细胞的侵袭能力。
- 陶艳亭郭鲁孙平蒋雅丽黄庆王晓蕾张莲英
- 关键词：锌转运体乳腺癌基因转染肿瘤侵袭
