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国家自然科学基金(30472139)

作品数:8 被引量:16H指数:3
相关作者:廖飞赵利娜赵运胜杨晓兰张灵更多>>
相关机构:重庆医科大学更多>>
发文基金:国家自然科学基金重庆医科大学创新基金重庆市教委科研基金更多>>
相关领域:生物学医药卫生更多>>

文献类型

  • 8篇中文期刊文章

领域

  • 7篇生物学
  • 2篇医药卫生

主题

  • 3篇尿酸
  • 3篇尿酸酶
  • 3篇黄嘌呤
  • 2篇动力学
  • 2篇抑制剂
  • 2篇制剂
  • 2篇米氏常数
  • 2篇积分
  • 2篇积分法
  • 2篇谷胱甘肽
  • 1篇单酯
  • 1篇动力学参数
  • 1篇动力学方法
  • 1篇融合标签
  • 1篇酸酶
  • 1篇配体
  • 1篇亲和配体
  • 1篇转移酶
  • 1篇自由基
  • 1篇自由基共聚合

机构

  • 7篇重庆医科大学

作者

  • 7篇廖飞
  • 3篇赵运胜
  • 3篇杨晓兰
  • 3篇赵利娜
  • 2篇廖娟
  • 2篇张灵
  • 2篇龙高波
  • 1篇赵华
  • 1篇张奕
  • 1篇蒲军
  • 1篇陶佳
  • 1篇刘红博
  • 1篇杨宪峰
  • 1篇程真莉
  • 1篇白婧
  • 1篇左渝平
  • 1篇陈虹
  • 1篇刘冬

传媒

  • 4篇重庆医科大学...
  • 3篇第四军医大学...
  • 1篇Journa...

年份

  • 2篇2012
  • 1篇2011
  • 2篇2007
  • 1篇2006
  • 2篇2005
8 条 记 录,以下是 1-8
排序方式:
用线性动力学方法表征L-苯丙氨酸对兔小肠黏膜碱性磷酸酶的抑制作用
2007年
目的:考察用线性动力学方法表征L-苯丙氨酸对兔小肠黏膜碱性磷酸酶抑制作用的可靠性.方法:测定碱性磷酸酶水解对硝基苯酚磷酸酯(PNPP)的产物生成初速度.用两个底物浓度下标定比活性计算米氏常数(Km)和最大反应速度(Vm),再据二者对抑制剂浓度的响应确定抑制剂类型和抑制常数.结果:双倒数分析法重复测定发现70%的Km和Vm随抑制剂浓度升高而同步下降,两动力学参数变化对应抑制常数的比值为(2.4±0.6,n=9).线性动力学方法所得参数精度稍高,Km和Vm随抑制剂浓度升高同时下降的出现率约80%,两抑制常数之比为(2.0±0.8,n=10),两参数变化对应的抑制常数及两抑制常数之比都与双倒数分析法一致.如允许两抑制常数之比在2.5倍内波动,则两种方法都表明L-苯丙氨酸为此碱性磷酸酶的反竞争性抑制剂.结论:此线性动力学方法可用于表征反竞争性抑制剂.
陈虹程真莉左渝平廖飞
关键词:L-苯丙氨酸碱性磷酸酶
测定谷胱甘肽-S-转硫酶动力学参数的变化表征其抑制剂被引量:3
2011年
目的:测定谷胱甘肽-S-转移酶(Glutathione-S-transferases,GST)动力学参数变化,建立表征其抑制剂的方法。方法:从猪肝经阴离子交换层析和亲和层析制备GST酸性同工酶,用还原型谷胱甘肽(Glutathione,GSH)和1-氯-2,4-二硝基苯(1,-chloro-2,4-dinitrobenzene,CDNB)合成S-(2,4-二硝基苯基)-谷胱甘肽(GS-DNB)为候选抑制剂,以GSH与CDNB为底物测定GST在GS-DNB作用下的米氏常数(Km)和最大反应速度(Vm),从而确定GS-DNB对GST的抑制常数(Ki)。结果:此GST被纯化146倍以上,活性总收率近30%。该GST对GSH和CDNB的Km分别为42μmol/L和0.86 mmol/L,属于随机双底物动力学模型。GS-DNB对CDNB竞争性Ki为(21±1)μmol/L(n=2);对GSH竞争性Ki为(17±1)μmol/L(n=2)。结论:产物GS-DNB是GST的高亲和力竞争性抑制剂;测定GST动力学参数随抑制剂浓度的变化可筛选其抑制剂。
张灵杨晓兰白婧廖娟刘红博廖飞
关键词:谷胱甘肽-S-转移酶抑制剂还原型谷胱甘肽
用线性动力学方法考察黄嘌呤对尿酸酶的抑制作用被引量:7
2005年
目的:以米氏常数相差较大的两种尿酸酶为模型,考察用两个底物浓度下标定比活性确定酶动力学参数和筛选抑制剂的可靠性.方法:用293nm吸收监测尿酸酶反应.通过两个底物浓度下标定比活性确定表观米氏常数(apparentmichaelismentenconstant,Kmapp)和表观最大反应速度(apparentmaximalreactionrate,Vmapp).据表观动力学参数随抑制剂浓度的变化确定抑制类型和抑制常数(inhibitionconstant,Ki).结果:只要所用尿酸浓度中较小者(thelowerconcentrationofuricacid,SL)大于待测Km的0.8倍且较大者(thehigherconcentrationofuricacid,SH)在SL的1.4倍以上,此线性动力学法能可靠测定Bacillusfastidiosus和Candidaspecies尿酸酶的米氏常数,且与双倒数法结果一致.如SL大于Km的3.8倍而SH为SL的3倍,此线性动力学法所得Candidaspecies尿酸酶Kmapp与抑制剂浓度成正比,Ki为(4.8±0.5)μmol/L,与双倒数法结果一致.Bacillusfastidiosus尿酸酶Km太高,底物浓度有限时不能用此方法筛选其抑制剂.结论:此线性动力学方法仅用高于Km的底物浓度也能可靠确定酶动力学参数,有利于用常规定量方法筛选对底物具有高亲合力特殊靶酶的抑制剂.
赵利娜廖飞赵运胜
关键词:尿酸酶黄嘌呤米氏常数
A new linearly-combined bi-exponential model for kinetic analysis of the isometric relaxation process of Bufo gastrocnemius under electric stimulation in vitro被引量:1
2007年
There was a slow-relaxing tail of skeletal muscles in vitro upon the inhibition of Ca2+-pump by cyclopiazonic acid (CPA). Herein, a new linearly-combined bi-exponential model to resolve this slow-relaxing tail from the fast-relaxing phase was investigated for kinetic analysis of the isometric relaxation process of Bufo gastrocnemius in vitro, in comparison to the single exponential model and the classical bi-exponential model. During repetitive stimulations at a 2-s interval by square pulses of a 2-ms duration at 12 V direct currency (DC), the isometric tension of Bufo gastrocnemius was recorded at 100 Hz. The relaxation curve with tensions falling from 90% of the peak to the 15th datum before next stimulation was analyzed by three exponential models using a program in MATLAB 6.5. Both the goodness of fit and the distribution of the residuals for the best fitting sup- ported the comparable validity of this new bi-exponential model for kinetic analysis of the relaxation process of the control muscles. After CPA treatment, however, this new bi-exponential model showed an obvious statistical superiority for kinetic analysis of the muscle relaxation process, and it gave the estimated rest tension consistent to that by experimentation, whereas both the classical bi-exponential model and the single exponential model gave biased rest tensions. Moreover, after the treatment of muscles by CPA, both the single exponential model and the classical bi-exponential model yielded lowered relaxation rates, nevertheless, this new bi-exponential model had relaxation rates of negligible changes except much higher rest tensions. These results suggest that this novel linearly-combined bi-exponential model is desirable for kinetic analysis of the relaxation process of muscles with altered Ca2+-pumping activity.
GUO Rui LI Sheng-bing ZHAO Li-na ZHAO Yun-sheng LU Wei YUAN Pei DENG Ping LIAO Fei
关键词:腓肠肌
融合标签谷胱甘肽S-转硫酶高亲和配体的设计与筛选被引量:3
2012年
目的:设计与筛选融合标签血吸虫谷胱甘肽S-转硫酶(Glutathione S-transferase,GST)的高亲和配体。方法:将原核融合表达载体pGST-MOLUC转入大肠杆菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷低温诱导GST标签表达,用Glutathione Sepharose 4B亲和纯化此标签GST。初速度法测定GST对底物1-氯-2,4-二硝基苯(1-chloro-2,4-dinitrobenzene,CDNB)和还原型谷胱甘肽(Glutathione,GSH)的Km;测定GST产物S-(2,4-二硝基苯基)-谷胱甘肽(GS-DNB)、3,5-二甲基苯甲酸、对丁基苯甲酸、依他尼酸及3者对应的对称双酰丁二胺对标签GST的抑制作用。结果:纯化标签GST对GSH和CDNB顺序结合且Km都高于0.10mmol/L;GS-DNB相对CDNB的竞争性抑制常数约5μmol/L,相对GSH的非竞争性抑制常数约33μmol/L。3,5-二甲基苯甲酸、对丁基苯甲酸、依他尼酸对此GST抑制常数都大于0.20 mmol/L;N,N’-双依他尼酰-1,4-丁二胺和N,N’-双对丁基苯甲酰-1,4-丁二胺都为GST相对GSH的强竞争性抑制,抑制常数分别为31 nmol/L和(0.61±0.43)μmol/L(n=3)。结论:将标签GST低亲和力芳香羧酸用柔性短链连成对称结构,可获得结合于单个活性中心的高亲和力标签GST抑制剂。
杨宪峰张灵杨晓兰龙高波张奕廖飞
关键词:抑制剂配体
2种聚乙二醇不饱和酸单酯共聚合包被Fe_3O_4制备磁性微球及其表征被引量:1
2012年
目的:用两种聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG)不饱和酸单酯经自由基共聚包被纳米Fe3O4磁芯制备磁性微球,考察其功能化后特异性和非特异性结合作用。方法:水解沉淀法制备纳米Fe3O4磁芯;用PEG-350单甲醚丙烯酸酯和PEG-1540单顺丁烯酸单酯为单体,在正庚烷-水组成的油包水体系自由基共聚制备磁性微球;将微球表面来自PEG-1540的羟基经甲磺酸酯活化、连接乙二胺后再用活化生物素修饰。透射电镜观察其外貌;测定与碱性磷酸酶标记链亲和素(Streptavidin labeled byalkaline phosphate,AP-SAV)的特异性结合、与4-硝基-1-萘酚苯甲酸酯等的非特异性结合。结果:所得Fe3O4粒径60 nm左右,生物素修饰后粒径接近200 nm。此磁性微球可从混合蛋白中选择性分离碱性磷酸酶酶标记的链亲和素,结合容量约51 ng蛋白/g磁性微球;4-硝基-1-萘酚苯甲酸酯在浓度很低时同此磁性微球的结合低于检测限,在浓度高达64μmol/L时仍无显著结合。结论:用两种PEG不饱和酸酯共聚包被Fe3O4可制备表面亲水磁性微球,功能化后有特异相互作用且非特异性作用很弱,但还需提高此磁性微球功能化后的特异性结合容量。
刘冬龙高波杨晓兰蒲军赵华廖娟廖飞
关键词:磁性微球自由基共聚合
用积分法考察黄嘌呤对Candida species尿酸酶的抑制作用被引量:4
2005年
目的:以Candida species尿酸酶为模型,考察用积分法筛选抑制剂的条件.方法:用293 nm吸收记录尿酸酶反应.用反应时间为自变量的积分速度方程拟合反应曲线确定表观米氏常数(apparentM ichaelis-M enten constant,Km app)和表观最大反应速度(apparentm axim al reaction rate,Vm app).据上述参数随抑制剂浓度的变化确定抑制类型和抑制常数(inh i-b ition constant,Ki).结果:被分析数据中的畸异值显著降低结果可靠性.通常终点底物<1/6Km app而起始底物足够高,此积分法测定Km app的偏差和变异低于20%而Vm app精度更高.用积分法所得Km app与双倒数法一致,且和黄嘌呤浓度成正比,对应Ki为(5.4±0.8)μmol/L(n=3),也与双倒数法一致.结论:被分析数据精度足够高,用无抑制剂时米氏常数(M ichaelis-M enten constant,Km)4倍以上的起始底物浓度并固定终点底物浓度<1/6Km,此积分法能用于筛选特殊类型的抑制剂.
赵利娜廖飞赵运胜
关键词:积分法尿酸酶黄嘌呤米氏常数
不同方法测定黄嘌呤对Bacillus fastidiosus胞外尿酸酶抑制效力的比较被引量:1
2006年
赵利娜赵运胜陶佳廖飞
关键词:黄嘌呤尿酸酶效力半抑制浓度积分法
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