湖南省自然科学杰出青年基金(03JJY3040)
- 作品数：7 被引量：40H指数：4
- 相关作者：田道法何迎春刘宇勤卢芳国江洁琼更多>>
- 相关机构：湖南中医学院湖南中医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：湖南省自然科学杰出青年基金湖南省教育厅科研基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 爱泼斯坦-巴尔病毒潜伏膜蛋白1的结构和信号转导被引量：7
- 2005年
- 爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)是具有致瘤潜能的疱疹病毒,与多种恶性肿瘤的发生相关。近年来,对EBV潜伏感染膜蛋白1(LMP1)的结构、功能及其介导的信号转导通路的研究取得了显著进展。作者就LMP1通过核因子-κB(NF-κB)、活化蛋白1(AP-1)、双面联胎激酶(JAK)/信号转导和转录激活子(STAT)、Ets1、丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)/激活转录因子2(ATF2)途径和细胞周期依赖性激酶(Cdk)途径等,对细胞的生长、增殖、转化、分化、运动和凋亡的调控作一综述。
- 何迎春田道法
- 关键词：爱泼斯坦-巴尔病毒潜伏膜蛋白1信号转导
- 含突变型p53和LMP1双基因重组质粒的构建与鉴定被引量：3
- 2005年
- 目的构建一种双基因真核表达载体,使之表达人突变型p53蛋白(p53mt)和EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1),为研究这两个蛋白在鼻咽癌变中的交互作用奠定基础。方法通过基因重组技术,构建含突变型p53基因和EB病毒LMP1基因的真核表达载体pLMP1—p53mt;采用脂质体lipofectAMINETM2000将此载体转入体外培养的HeLa细胞中,转染后48h,采用免疫细胞化学方法分析突变型p53基因和EB病毒LMP1基因的表达。结果对重组载体进行限制性内切酶酶切及PCR鉴定分析,结果与预期相符合;转染试验观察到转染细胞中突变型p53基因和LMP1基因的阳性表达。结论成功构建了表达人突变型p53蛋白和EB病毒LMP1的真核载体pLMP1—p53mt,其研究思路可以为中医体质病机研究提供借鉴。
- 何迎春田道法
- 关键词：突变型P53基因LMP1基因基因重组
- 重组质粒pLMP1-p53mt在人鼻咽癌HNE1和人宫颈癌HeLa细胞中的表达分析被引量：8
- 2006年
- 目的:研究重组质粒pLMP1-p53mt中EB病毒LMP1基因和突变型p53(p53mt)基因在HNE1和HeLa细胞中的体外表达。方法:体外培养人鼻咽癌细胞株HNE1和人宫颈癌细胞株HeLa,采用脂质体lipofectAMINETM2000介导将重组质粒pLMP1-p53mtDNA转染细胞,利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和Sourthernblot法分析p53mt基因和LMP1基因的表达情况。结果:经重组质粒pLMP1-p53mt转染的HNE1和HeLa细胞中检测到了p53mt基因和LMP1基因的表达。结论:重组质粒pLMP1-p53mt的LMP1基因和p53mt基因能分别在EDL-2启动子和CMV启动子控制下表达。该质粒可进一步用于转基因动物的制备和基因功能研究。
- 何迎春田道法贺安意江洁琼刘宇勤
- 关键词：质粒细胞
- 转基因雄性小鼠不育原因分析被引量：2
- 2006年
- 目的研究转基因雄性小鼠不育的主要原因。方法以野生型C57BL/6J作为对照,比较检测健康性成熟雄性转基因小鼠的睾丸、附睾、前列腺、提肛肌的脏器系数和精子数、精子活动度、活精率、精子畸形率;观察睾丸组织病理学变化及睾丸组织葡萄-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)、乳酸脱氢酶(LDH)、乳酸脱氢酶同工酶(LDH-X)及琥珀酸脱氢酶(SDH)的活性。结果与正常非转基因对照鼠相比,转基因鼠睾丸的脏器系数与正常对照鼠相接近,附睾、提肛肌的脏器系数显著降低,精子数、直线运动精子数显著降低(P<0.01);转基因鼠睾丸组织曲细精管变薄,生精细胞排列不整齐,层次减少(2层),上皮部分有变性,精原细胞、初级精母细胞分裂异常,精子形成减少;G-6-PD、LDH、LDH-X及SDH的活性均显著低于对照鼠。结论外源基因整合后,引起睾丸组织酶活性下降,影响各细胞的生理、生化功能,进而引起睾丸发育严重障碍,精子减少和活动能力降低而导致不育。
- 何迎春田道法江志超刘宇勤江洁琼贺安意
- 关键词：转基因精子
- 人突变型p53和EB病毒LMP1转基因小鼠的建立被引量：19
- 2006年
- 目的:建立含突变型p53和EB病毒LMP1基因的双转基因小鼠模型,为研究突变型p53和EB病毒LMP1基因在鼻咽癌前病变中的交互作用提供有力的工具.方法:通过分子克隆技术构建含突变型p53基因和EB病毒LMP1基因的真核表达载体pLMP1-p53mt;采用显微注射法将线性化的表达载体注射至小鼠受精卵的雄性原核中,然后将注射存活的受精卵植入假孕母鼠的输卵管;取其产3wk龄子代鼠进行PCR初选,再通过Southern杂交进一步确证;利用HE染色法观察4mo龄转基因小鼠不同组织病理变化.结果:将转基因载体进行了707枚小鼠受精卵的显微注射,然后植入30只假孕母鼠的输卵管中,其中26只母鼠怀孕,移植成功率为86.67%;共出生子代鼠179只;PCR检测显示179只子代小鼠中有9只整合了p53mt和LMP1基因,转基因阳性小鼠比例为5.03%(9/179),Southern杂交结果进一步证实了9只基因组整合了外源基因的首建者小鼠;随机抽取其中的1只转基因阳性小鼠鼻腔黏膜、鼻咽、食管表现炎症,鼻咽黏膜上皮灶性增生.结论:成功建立整合人突变型p53和LMP1的转基因小鼠,且表现鼻咽黏膜上皮灶性增生,可为鼻咽癌前病变机制的研究提供手段.
- 何迎春田道法卢芳国毛积芳
- 关键词：突变型P53基因LMP1基因鼻咽癌前病变转基因小鼠
- p53和EB病毒LMP1的信号转导通路及相互作用
- 2007年
- 江洁琼田道法
- 关键词：EB病毒LMP1信号转导通路相互作用EB病毒感染P53基因突变头颈肿瘤
- 外源突变型p53和潜伏膜蛋白1基因在转基因鼠不同器官组织中的表达被引量：19
- 2005年
- 目的:观察转基因小鼠鼻腔、鼻咽、肺、食道、胃、大肠、肝、肾、脾中外源突变型p53m t和潜伏膜蛋白1基因的表达情况。方法:实验于2005-03/04在湖南中医学院中西医结合系基础研究室完成。选取4月龄转p53m t和潜伏膜蛋白1基因F0代小鼠1只,以正常同龄未转基因C57BL/6J小鼠4只作为对照。采用免疫组化分别检测转基因鼠和对照鼠鼻腔、鼻咽、肺、食道、胃、大肠、肝、肾、脾中p53m t和潜伏膜蛋白1基因的表达强度,用图像分析系统测定阳性反应物的平均灰度值。系统设定白色最大灰度为256,黑色最小灰度为0。灰度值越小,代表阳性反映程度越高。结果:实验纳入转基因鼠1只,对照鼠4只,均进入结果分析。①蛋白质阳性表达信号的定位分布:转基因鼠p53m t和潜伏膜蛋白1基因的免疫组化阳性信号均为棕黄色的颗粒或斑块,表达量高,p53m t蛋白绝大部分分布于细胞膜和胞浆内,少数位于细胞核中。对照鼠p53mt蛋白在组织中呈弱表达,潜伏膜蛋白1的蛋白阳性信号主要位于上皮细胞的细胞膜和胞浆中。②转基因鼠和对照鼠不同组织部位中p53m t基因表达的平均灰度值:转基因鼠食道、肝、脾中平均灰度值较高(131.75±17.25,135.15±13.14,139.42±11.55),在鼻腔黏膜、鼻咽组织、大肠中平均灰度值较低(96.61±12.43,109.26±9.90,109.45±6.72)。除了胃、脾外,各组织部位与对照鼠比较均有显著差异(P<0.05)。③转基因鼠和对照鼠不同组织部位中潜伏膜蛋白1基因表达的平均灰度值:转基因鼠鼻咽部平均灰度值最低(106.75±19.57),其次为鼻腔、食道、肺、胃,而在大肠、肝、脾中表达水平较高(152.29±12.17,134.98±17.79,158.35±10.75)。除鼻腔、大肠、肝、脾外,各组织部位中潜伏膜蛋白1基因的表达水平与对照鼠比较均有显著差异(P<0.05)。④转基因鼠不同组织部位中p53mt基因与潜伏膜蛋白1基因表达水平的相关性�
- 何迎春田道法田甜卢芳国刘宇勤
- 关键词：蛋白质P53病毒包膜蛋白质类
