国家自然科学基金(30971340)
- 作品数：8 被引量：16H指数：2
- 相关作者：耿智敏王林陈晨郑见宝李文智更多>>
- 相关机构：西安交通大学医学院第一附属医院西安交通大学榆林市第二医院更多>>
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- 小鼠胚胎成纤维细胞对Lewis肺癌细胞增殖及凋亡的影响被引量：2
- 2011年
- 目的探讨小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性。方法原代培养MEF并经细胞免疫组化法鉴定α-SMA的表达情况;收集培养48h无血清高糖DMEM培养基上清并制备条件培养基MEF-CM,根据实验中Lewis肺癌细胞(LLC)细胞培养基不同,分为MEF条件培养基组、DMEM组,应用MTT法检测不同培养基对LLC增殖率的影响;再根据5-Fu作用与否,进一步应用流式细胞仪检测不同培养基对LLC凋亡的影响。结果成功获得原代培养的MEF,表达α-SMA;MEF-CM较DMEM能够明显促进LLC细胞增殖(P<0.05);MEF-CM较DMEM能够明显抑制LLC细胞凋亡,并能够明显拮抗5-Fu的肿瘤杀伤作用(P<0.05)。结论 MEF是一种活化的成纤维细胞,具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性,有促进LLC增殖及抑制凋亡的作用,可以作为肿瘤相关成纤维细胞用于肿瘤微环境的研究。
- 耿智敏姬乐郑见宝王林
- 关键词：小鼠胚胎成纤维细胞LEWIS肺癌细胞肿瘤微环境肿瘤相关成纤维细胞细胞增殖
- 神经菌毛素促进VEGF介导的血管生成作用及其机制研究进展被引量：1
- 2014年
- 神经菌毛素(neuropilin-1,NRP-1)作为NRP家族中重要成员之一,常表达于内皮细胞及一些肿瘤细胞,是信号素(Sema 3A)、血管内皮生长因子(VEGF)、血小板源性生长因子(PDGF)等相关因子的共受体。因此,它在神经轴突的生长、血管的生成发育和肿瘤生长转移中起重要作用。而血管内皮生长因子(VEGF)作为重要的血管生成调节因子,同样在促进肿瘤血管形成,发生及发展中发挥着重要作用。近年来越来越多研究证实NRP-1可以促进VEGF介导的血管形成,进而促进肿瘤发生发展。本文就近年来NRP-1促进VEGF血管形成作用及机制作一综述。
- 徐之超陈晨李文智陈强姚春和耿西林王林耿智敏
- 关键词：血管内皮生长因子血管形成
- 脂肪酸合酶在肝癌中的表达及对其生物学功能的影响被引量：2
- 2014年
- 目的 研究脂肪酸合酶（FASN）在肝癌细胞中的表达及其功能.方法 （1）采用免疫组织化学染色检测肝癌组织中FASN表达,采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）及Western blot方法,检测正常肝细胞及不同肝癌细胞（HepG2、SMMC-7721、MHCC97L、MHCC97H、SK-Hep-1）中FASN表达.（2）构建FASN ShRNA真核表达载体,干扰肝癌细胞SK-Hep-1中FASN表达后,检测对肝癌细胞增殖、凋亡及迁移侵袭的影响.结果 （1）与癌旁组织比较,FASN在肝癌组织呈高表达（P＜0.05）;与正常肝细胞系7702比较,FASN在肝癌细胞系均呈高表达,高转移性的肝癌细胞系MHCC97H与SK-Hep-1中FASN表达高于较低转移性的肝癌细胞系（P＜0.05）.（2）干扰肝癌细胞SK-Hep-1中FASN后,细胞增殖、迁移和侵袭能力均受到抑制,而细胞凋亡不受影响.结论 （1）FASN在肝癌组织及肝癌细胞系中高表达,且高转移肝癌细胞系表达高于低转移肝癌细胞系;（2）FASN促进了肝癌细胞的增殖,侵袭和迁移,提示FASN可能与肝癌的发生及转移相关.
- 郝琪伟李涛张雄高平乔培宇李胜耿智敏
- 关键词：脂肪酸合酶肝细胞肝癌增殖RNA干扰
- 神经菌毛素-1促进肝星状细胞活化对人肝癌HepG2细胞增殖、侵袭能力的影响被引量：3
- 2014年
- 目的 观察神经菌毛素-1（NRP-1）通过促进肝星状细胞（HSC）活化增殖进而对肝癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响.方法 构建NRP-1腺病毒载体pDC315-NRP-1-3 Flag,感染LX2细胞;Western blot检测NRP-1蛋白表达水平,细胞免疫化学法检测LX2中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及NRP-1表达水平;通过噻唑蓝（MTT）、Transwell间接共培养检测LX2及HepG2细胞增殖能力,Transwell实验检测HepG2细胞侵袭和迁移能力.结果 构建人NRP-1基因重组过表达腺病毒pDC315-NRP-1-3Flag,最佳感染滴度为2.0×106 PFU/ml,48 h感染效率可达90％以上,Western blot示感染后LX2细胞NRP-1表达增高,转染48 h后NRP-1表达较高水平,细胞免疫化学显示转染组LX2的α-SMA及NRP-1表达增高.MTT检测显示NRP-1过表达组LX2增殖能力强于空载体组及未转染组,差异有统计学意义（P＜0.05）.细胞共培养实验证实LX2可促进HepG2的增殖、侵袭及迁移能力,NRP-1过表达组LX2对HepG2的促进作用更为明显,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 人NRP-1基因重组腺病毒可稳定转染LX2细胞,NRP-1可促进LX2的活化及增殖,继而促进HepG2细胞增殖及侵袭、迁移能力.
- 陈晨陈强耿智敏李波郑见宝王林
- 关键词：原发性肝癌肝星状细胞肿瘤微环境
- 索拉菲尼抑制肝星状细胞活化在肝癌肿瘤微环境中的作用机制被引量：1
- 2013年
- 目的研究索拉菲尼对肝星状细胞活性及活化的影响及其在肝脏肿瘤微环境中的作用机制。方法通过LX2细胞和HepG2细胞共培养，观察LX2对HepG2细胞增殖的影响。通过MTT检测观察索拉菲尼对LX2增殖的影响。用不同浓度索拉菲尼干预LX2细胞，细胞组化检测LX2细胞α—SMA的表达；ELISA检测LX2上清液PDGF-BB和TGF-β1浓度变化；蛋白印迹检测LX2细胞ERKl、ERK2、Akt信号通路的表达。将不同浓度索拉菲尼干预的LX2细胞和HepG2细胞共培养24h，观察对HepG2细胞侵袭能力影响。结果LX2和HepG2细胞共培养后实验组HepG2细胞明显较对照组多。经不同浓度索拉菲尼干预LX2细胞12h、24h、36h和48h后，实验组细胞活性弱于对照组，具有浓度及时间依赖性。对照组α—SMA的表达强于实验组，具有浓度和时间依赖性。随着索拉菲尼药物浓度的升高及同一浓度下时间的延长，上清中PDGF-BB和TGF-β1的浓度降低。实验组与对照组中ERKl、ERK2、AKT的表达基本相同，但各自磷酸化状态的表达随着药物浓度的升高呈下降趋势。随着药物浓度的升高LX2诱导HepG2侵袭的能力逐渐减弱。结论索拉菲尼可通过抑制α—SMA的表达、抑制肝星状细胞PDGF信号通路及下调上清液中的PDGF-BB和TGF-β1的表达，从而抑制HSC的活性及活化，继而抑制HepG2的增殖及侵袭。
- 耿智敏李波王林陈晨李文智郑见宝
- 关键词：索拉菲尼肝星状细胞肿瘤微环境
- 血小板衍生生长因子促进肝星状细胞活化在肝癌肿瘤微环境中的作用被引量：1
- 2014年
- 肝星状细胞（HSC）在肝纤维化中的作用已被公认,近年来HSC在肝脏肿瘤微环境中的作用也逐渐引起人们重视.血小板衍生生长因子（PDGF）是HSC最重要的有丝分裂原,其在HSC的活化中具有极为重要的作用.HSC既是PDGF的作用靶细胞,同时也可分泌PDGF,从而形成PDGF激活HSC的双向循环模式.PDGF可通过MAPK、PI-3K、Ca2＋、JAK等信号通路激活HSC.研究PDGF激活HSC在肝脏肿瘤微环境中的作用机制,寻找靶向抑制PDGF及肝星状细胞的相应方法,有望为肝脏肿瘤的治疗提供新的方向.
- 陈晨耿智敏王林
- 关键词：肝星状细胞血小板衍生生长因子肝癌肿瘤微环境
- 联合精准半肝切除治疗肝门部胆管癌被引量：7
- 2013年
- 目的探讨联合精准半肝切除治疗肝门部胆管癌的疗效及术前精准评估的应用价值。方法回顾性分析2009年1月至2012年10月西安交通大学医学院第一附属医院采用联合精准半肝切除术治疗38例肝门部胆管癌患者的临床资料。患者术前分别行B超、CT、MRCP、CT血管造影等影像学检查以及肝功能等实验室检查。7例梗阻性黄疸患者，5例行PTCD、2例行ENBD。根据影像学检查结果确定手术方式。分析肝门部胆管癌手术切除情况，比较手术前后肝功能指标变化，术后并发症情况，术后病理检查结果以及预后的影响因素。计数和计量资料分别采用，和t检验，Kaplan-Meier法绘制生存曲线，生存分析采用Log-rank检验，多因素分析采用COX比例风险模型。结果38例患者术前均行B超、CT、MRCP检查，其阳性检出率分别为65．8％（25／38）、71．1％（27／38）、89．5％（34／38），5例行CT血管造影检查者均为阳性表现。全组患者行联合左半肝切除28例，联合右半肝切除10例，其中联合尾状叶切除22例、联合门静脉部分切除并重建4例（肝左静脉补片修补1例）、联合肝动脉切除12例（肝动脉重建3例）。R0切除32例、R．切除4例、凡切除2例。全组患者术后肝功能指标TBil、DBil、ALP、GGT、AlJrr及AST较术前均显著改善，两者比较，差异均有统计学意义（t=7．799，8．445，5．697，6．633，4．469，4．140，P〈0．05）。全组患者围手术期死亡2例，病死率为5．3％（2／38）；术后并发症主要为胆汁漏和肝功能不全，其发生率分别为28．9％（11／38）和21．1％（8／38）。术后病理检查结果：浸润型腺癌31例、结节性腺癌5例、黏液腺癌1例、腺鳞癌1例。联合半肝切除术后患者第1、2、3年总体生存率分别为66％、37％、21％，半数生存时问为22．0个月，R0切除与R1／R2切除，N0期与N1／N2期患者生存率比较，差�
- 王林耿智敏宋晓刚赵亚玲吕毅姚英民刘昌刘青光
- 关键词：胆管肿瘤肝切除术
- 沉默肝星状细胞神经菌毛素-1抑制肝癌生长的实验研究
- 2016年
- 目的探讨沉默肝星状细胞神经菌毛素-1（neuropilin-1,NRP-1）表达后,是否会影响其对肝癌的促生长作用,并初步探讨可能存在的作用机制。方法细胞免疫荧光及细胞荧光双重染色观察NRP-1在肝星状细胞LX2中的表达及其与血小板源性生长因子受体β（platelet-derived growth factor receptor-β,PDGFR-β）的共表达;MTT法检测沉默肝星状细胞NRP-1后对肝癌细胞体外增殖能力影响;建立裸鼠皮下肝癌移植瘤模型,绘制生长曲线,免疫组化法观察各组瘤体α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、NRP-1、PDGFR-β表达强度的差异。结果 LX2表面存在NRP-1表达,且NRP-1与PDGFR-β共表达于LX2;沉默LX2NRP-1后对HepG2促增殖作用降低（P〈0.05）;NRP-1KG移植瘤体积较NRP-1CG、NRP-1NG小（P〈0.05）,进一步对各组瘤体行免疫组化染色并进行表达强度积分分析,发现NRP-1KG瘤体间质NRP-1、PDGFR-β表达均较NRP-1CG弱（χ^2=25.89,P〈0.05;χ^2=28.12,P〈0.05）。结论沉默肝星状细胞NRP-1表达后,其对肝癌细胞促增殖作用降低,在体内环境中其对肝癌皮下移植瘤促生长作用也降低,其机制与肝星状细胞活化减弱有关,而肝星状细胞NRP-1表面共受体PDGFR-β表达减弱也可能参与这一过程。
- 徐之超陈晨慎浩鑫马丽李文智王林耿智敏
- 关键词：肝星状细胞肝癌肿瘤微环境
