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Sox2诱导小鼠胚胎成纤维细胞直接重编程为神经干细胞被引量：2: 2015年; 目的：探讨Sox2诱导小鼠胚胎成纤维细胞（ mouse embryonic fibroblasts ， MEFs）直接重编程为神经干细胞的方法，为诱导神经干细胞（induced neural stem cells ， iNSCs）作为种子细胞治疗脊髓损伤（spinal cord injury， SCI）奠定实验基础。方法：逆转录病毒感染Sox2转录因子的MEFs在神经干细胞培养基中贴壁培养10 d。随后，悬浮、贴壁反复循环培养3次。 Real-time PCR检测神经干细胞标志基因和多潜能标志基因的表达。 iNSCs在分化培养基中贴壁培养7～14 d，免疫荧光分别检测神经干细胞、神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的标志物nes-tin、MAP2、GFAP和MBP的表达。将iNSCs显微注射至小鼠大脑皮质，7～14 d后免疫荧光检测神经细胞标志物nestin、MAP2、GFAP和MBP的表达。结果：Real-time PCR显示iNSCs的多种神经干细胞标志基因nestin、Blbp、Pax6和zbtb16表达较诱导前显著增高（P＜0.05），且iNSCs不表达多潜能相关基因Nanog、Oct4和zfp42。免疫荧光显示iNSCs高表达神经干细胞标志物nestin。免疫荧光同时表明iNSCs可在体内外存活并分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。结论：Sox2可以诱导MEFs直接重编程为神经干细胞。 iNSCs具有自我更新的能力，且在体内外都具有三向分化潜能，可作为修复SCI合适的种子细胞。; 刘畅戎利民刘斌; 关键词：SOX2 小鼠胚胎成纤维细胞神经干细胞

质粒重编程诱导多潜能干细胞及定向分化神经干细胞: 2016年; 目的探讨游离质粒载体重编程诱导小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)为非整合型诱导多潜能干细胞,并在体外定向分化为神经干细胞(neural stem cells,NSCs),为神经干细胞移植治疗神经损伤提供稳定、安全的细胞来源。方法使用电转仪将质粒p EP4-EO2S-ET2K转入小鼠MEFs,经诱导培养重编程为诱导多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSCs),i PSCs在不同诱导培养基中经2次悬浮及贴壁培养分化为NSCs,在体内及体外实验鉴定i PSCs多向分化潜能特性及NSCs特性。结果体内外实验显示i PSCs具有与胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)相似的多向分化潜能,且不整合外源性基因。i PSCs进一步分化的NSCs其相关标志基因表达与野生型NSCs相近,且较i PSCs显著增加,免疫荧光显示NSCs高表达NSC标志物NESTIN及PAX6,在体外存活能分化为神经元、少突胶质细胞及星形胶质细胞。结论游离质粒能重编程诱导非整合型i PSCs,并定向分化为神经干细胞及神经元,是神经损伤修复的理想种子细胞。; 林成楷戎利民刘斌; 关键词：神经干细胞

多壁碳纳米管/聚左旋乳酸复合纳米纤维支架材料与小鼠神经干细胞的生物相容性被引量：3: 2017年; 背景:聚左旋乳酸(PLLA)支架材料在生物材料领域中尤其是组织工程学中应用广泛,但亲水性较低、缺乏表面细胞结合位点和细胞黏附性较差等缺点制约着其进一步应用。目的:体外实验观察小鼠神经干细胞与多壁碳纳米管/聚左旋乳酸(MWCNTs/PLLA)纳米纤维支架材料复合培养的生长状况并检测其生物相容性。方法:分离培养小鼠神经干细胞,静电纺丝法制备PLLA纳米纤维支架材料并用MWCNTs修饰;取第3代神经干细胞分别接种于PLLA与MWCNTs/PLLA纳米纤维支架材料上,进行体外培养。结果与结论:1神经干细胞在PLLA及MWCNTs/PLLA支架材料中生存良好,材料无明显毒性;2神经干细胞在MWCNTs/PLLA材料上表现出比PLLA支架材料更加优异的细胞黏附能力及增殖能力;3扫描电镜及Hoechst 33342染色显示神经干细胞在材料表面生长良好,形态正常;4免疫荧光MAP2染色显示神经干细胞在MWCNTs/PLLA支架材料上生长并分化为成熟神经元,且神经元突起生长方向与纳米纤维支架方向一致;5结果表明,MWCNTs/PLLA纳米纤维支架材料的细胞相容性良好,能为神经干细胞提供良好的生长载体且有定向诱导分化为神经元突起的作用,是组织工程学修复脊髓损伤的理想支架材料。; 林成楷戎利民刘斌; 关键词：细胞粘附多壁碳纳米管生物相容性细胞黏附性

静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸／聚乙二醇纳米纤维作为组织工程支架的体外细胞相容性研究被引量：4: 2012年; 目的探讨静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸（PLGA）／聚乙二醇（PEG）共聚物纳米纤维作为组织工程支架的可行性，及其与大鼠骨髓基质干细胞（BMSCs）的体外相容性。方法静电纺丝法分别制备PLGA／PEG和PLGA纳米纤维支架，扫描电镜（SEM）观察材料结构；分离培养大鼠BMSCs，取第3代BMSCs分别接种于PLGA／PEG纳米纤维支架和PLGA纳米纤维支架进行培养，噻唑蓝（MTr）法测定其细胞毒性及细胞增殖；接种后2、4、6h血球计数板计数法测定其黏附率；DAPI荧光染色观察细胞核形态；SEM观察细胞和支架的形态、黏附及生长情况。结果SEM观察显示两组支架呈相互交联的多孔网状无纺结构。PLGA／PEG组和PLGA组纤维直径分别为（655±57）nm和（539±48）nm；孔隙率分别为86．8％±1．5％和84．7％±1．2％。MTr检测BMSCs在两组支架中生长良好，OD值均随时间延长而增大，两组各时间点比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。各时间段PLGA／PEG组的细胞黏附率明显高于PLGA组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。DAPI染色示各组细胞核形态正常，核质均染，未见明显凋亡及坏死细胞；PLGA／PEG组细胞较PLGA组明显增多。SEM观察显示，PLGA／PEG组BMSCs在支架上生长良好，基质分泌、生长睛况优于PLGA组。结论采用静电纺丝法制备的PLGA／PEG纳米纤维支架安全无毒，具备合适的孔径和孔隙率，适合BMSCs生长，细胞相容性良好，是一种组织工程良好的支架载体。; 李宁刘斌戎利民何留民; 关键词：脊髓损伤骨髓细胞

蛋白诱导诱导多能干细胞技术的研究进展被引量：1: 2013年; 诱导多能干细胞（inducedplufipotentsterncells，iPSC）自2006年出现后被认为是干细胞研究领域的一个突破性进展。首次成功制备iPSC的日本学者将4种重编程蛋白基因Oct3／4、Sox2、Klfd、C—Myc通过反转录病毒载体导入成纤维细胞并在其中表达，进而激活内源性重编程体系，最终导致细胞性质发生改变，成为具有类似胚胎干细胞（embryonicstemcells，ESC）的一种多能干细胞，即iPSCEI。由于其可来源于自体细胞，无需破坏胚胎组织，因而不涉及伦理争议。; 杨阳刘斌庞卯戎利民; 关键词：干细胞技术蛋白诱导反转录病毒载体多能干细胞蛋白基因

静电纺丝聚乳酸复合物纳米纤维材料与小鼠神经干细胞的生物相容性被引量：2: 2014年; 背景:聚乳酸聚乙醇酸支架材料广泛应用于组织工程学领域,但其细胞黏附性较差、缺乏活性功能基团以及疏水性较强等缺点限制了其进一步的发展和应用。目的:观察小鼠神经干细胞与静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇共聚物纳米纤维支架材料的体外相容性。方法:自孕15 d CD-1小鼠胚胎大脑皮质分离培养小鼠神经干细胞。静电纺丝法制备聚乳酸聚乙醇酸和聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇纳米纤维支架材料,扫描电镜观察材料结构;取第5代神经干细胞分别接种于聚乳酸聚乙醇酸和静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇纳米纤维支架材料上,进行体外培养。结果与结论:扫描电镜检测显示,两种支架材料呈现相互交联的多孔网状结构。聚乳酸聚乙醇酸组和静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇组纤维直径和孔隙率差异无显著性意义(P>0.05)。CCK-8检测显示,两种材料无明显细胞毒性。神经干细胞在支架材料中生长良好,两组吸光度值均随培养时间延长而增大,两组在培养1,3,5,7,9,11 d吸光度值差异均有显著性意义(P<0.05)。两组材料培养3,6,9 h,静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇组的细胞黏附率明显高于聚乳酸聚乙醇酸组(P<0.05)。Hoechst染色显示两组细胞核质均染,形态正常,静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇组细胞数量明显多于聚乳酸聚乙醇酸组(P<0.05)。扫描电镜观察显示,与聚乳酸聚乙醇酸组相比,静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇组神经干细胞在支架上的生长情况和基质分泌更好。结果说明,静电纺丝法制备的静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸/聚乙二醇纳米纤维支架细胞生物相容性良好,安全无毒,具备合适的孔径和孔隙率,适宜神经干细胞生长,是一种适用于组织工程优质的支架载体。; 刘畅戎利民李尚福庞卯杨阳刘斌; 关键词：静电纺丝聚乳酸聚乙醇酸生物相容性细胞毒性国家自然科学基金

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国家教育部博士点基金(20100171120088)

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