国家自然科学基金(30971335)
- 作品数：3 被引量：18H指数：3
- 相关作者：梅浙川邱烈旺吕琳肖潇刘卉更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 胰岛素对人肝细胞L02水通道蛋白9表达的影响及其调控通路被引量：7
- 2010年
- 目的 探讨胰岛素对人肝细胞株L02细胞膜上水通道蛋白9（AQP9）表达的调控及其调控通路. 方法 体外培养正常人肝细胞L02,分别给予磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂LY294002、丝/苏氨酸激酶（AKT）抑制剂A-4-43654,丝裂酶原激活蛋白激酶（MAPK）抑制剂SB2030580及不同浓度胰岛素干预,逆转录-聚合酶链反应及Western blot检测肝细胞AQP9的mRNA和蛋白质表达.组间数据比较采用单因素方差分析.结果 从胰岛素100 nmol/L开始,AQP9的mRNA和蛋白质表达降低（分别为0.55±0.08和0.59±0.08）,胰岛素浓度为500 nmol/L时降低最明显（分别为0.39±0.05和0.40±0.06）,与对照组相比,差异有统计学意义（P值均〈0.05）.从胰岛素作用后3 h开始,AQP9转录逐渐降低,12 h时抑制作用明显,AQP9的InRNA和蛋白质相对表达量分别为0.53±0.08和0.54±0.08（P值均〈0.05）.PI3K抑制剂LY294002及AKT抑制剂A-443654能有效阻断胰岛素对AQP9表达的影响 而MAPK抑制剂SB2030580则对胰岛素刺激AQP9表达无明显作用. 结论 人正常肝细胞膜上AQP9的表达受胰岛素调控,且与PI3K-AKT通道相关.
- 刘卉梅浙川肖潇
- 关键词：胰岛素1-磷脂酰肌醇3-激酶蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶水通道蛋白9
- 水甘油通道蛋白在非酒精性脂肪变性肝细胞模型中的表达及意义被引量：11
- 2012年
- 目的研究水甘油通道蛋白(aquaglyceroporins)AQP3、AQP7、AQP9基因在油酸钠诱导的脂肪变性肝细胞模型中的表达变化及其意义。方法以常规培养的人肝癌HepG2细胞为对照,采用油酸钠诱导HepG2细胞脂肪变性,建立非酒精性脂肪变性肝细胞模型,利用油红O染色及细胞内甘油三酯含量测定检测肝细胞脂肪变性程度,并分别于0、12、24、48 h采用实时荧光定量PCR与Western blot方法检测水甘油通道蛋白AQP3、AQP7、AQP9基因的表达。结果油红O染色观察及肝细胞内甘油三酯含量测定显示HepG2细胞在油酸钠处理12 h后即开始出现脂肪变性,随着刺激时间延长,脂肪变性程度逐渐加重,肝细胞内甘油三酯含量在48 h组(79.76±0.75)较0 h组明显升高(P<0.05)。模型组中,AQP3mRNA水平12 h时表达开始减低,48 h时(0.39±0.08)表达最低,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05);AQP7mRNA表达与对照组相比略有升高,差异无统计学意义(P>0.05);而AQP9 mRNA表达水平自12 h(1.59±0.11)即开始增加,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。模型组中,AQP3蛋白水平12 h时表达开始减低,24、48 h组[(0.016±0.002),(0.012±0.001)]与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05);AQP7蛋白表达与对照组相比较差异无统计学意义(P>0.05);AQP9蛋白水平12 h表达开始增高,24、48 h[(0.050±0.002)、(0.079±0.002)]组与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论肝细胞脂肪变性模型中水甘油通道蛋白AQP3表达下调、AQP9表达上调、AQP7表达无明显差异,提示不同亚型的水甘油通道蛋白可能通过不同的机制参与了肝细胞非酒精性脂肪变性。
- 邱烈旺顾陆昀吕琳王奎梅浙川
- 关键词：非酒精性脂肪肝水通道蛋白3水通道蛋白9
- 叉头转录因子1基因沉默对水通道蛋白9在正常人肝细胞中表达的影响被引量：4
- 2011年
- 目的观察叉头转录因子1(Forkhead transcription factor 1,FoxO1)基因沉默对水通道蛋白9(Aquaporin 9,AQP9)在正常人肝细胞L-02中表达的影响。方法将4条特异性干扰质粒FoxO1-shRNA1～4及阴性对照质粒FoxO1-NP经脂质体介导瞬时转染L-02细胞,荧光显微镜下观察转染效率,筛选FoxO1基因沉默效率最佳的干扰质粒转染的肝细胞,经RT-PCR及Western blot法从mRNA及蛋白水平检测其对AQP9表达的影响,并在转染后不同时间点,经荧光定量PCR检测AQP9的转录时间谱。结果 4条特异性干扰质粒FoxO1-shRNA1～4均有不同程度的沉默效果,其中以FoxO1-shRNA2沉默效果最佳,与对照组相比,AQP9在L-02细胞中的mRNA及蛋白水平的表达均下降,且差异均有统计学意义(P<0.05);AQP9的表达随着转染后时间的延长而降低,在转染后60 h达抑制峰值,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 FoxO1基因沉默对AQP9在正常人肝细胞中的表达有明显的影响,为下一步采用染色质免疫共沉淀技术研究不同时间点FoxO1与AQP9启动子区IRE结合水平的动态变化提供了依据。
- 肖潇梅浙川邱烈旺刘卉吕琳
- 关键词：叉头转录因子类RNA干扰
