国家教育部博士点基金(20060312005)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：赵聃王迎伟夏梅车楠邱文更多>>
- 相关机构：南京医科大学更多>>
- 发文基金：江苏省教育厅自然科学基金国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 大鼠野生型Gadd45γ基因和Gadd45γshRNA真核表达质粒的构建及鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的:构建大鼠野生型Gadd45γ基因和其特异性短发卡状小干涉RNA(shRNA)真核表达质粒,并观察其在大鼠肾小球系膜细胞(GMC)中过表达及沉默Gadd45γ基因的情况。方法:用DNA重组技术将针对大鼠Gadd45γ基因的cds区序列或针对其不同位点所设计的4对shRNA序列分别克隆到真核表达质粒pcDNA3.1/HA或pGCsi.U6.neo.GFP中。在酶切分析及序列测定正确后,用GenEscortTMⅢ转染试剂将上述两种质粒分别转染至大鼠GMCs中,用免疫细胞化学和Western blot检测HA-Gadd45γ融合蛋白的表达及筛选最佳沉默效率的shRNA。结果:限制性酶切及核酸序列分析证明两种重组质粒均构建正确。免疫细胞化学和Western blot分析表明构建的pcDNA3.1/Gadd45γ质粒在大鼠GMCs中能够表达;Gadd45γshRNA-3具有最佳沉默效率。结论:成功构建了大鼠野生型Gadd45γ基因和其特异性的shRNA真核表达质粒,该实验结果为进一步研究Gadd45γ基因的生物学功能奠定了基础。
- 车楠邱文夏梅赵聃王迎伟
- 关键词：SHRNA肾小球系膜细胞
- 大鼠ATF3基因shRNA真核表达质粒的构建及鉴定
- 2009年
- 目的:构建针对大鼠ATF3(activating transcription factor3,ATF3)基因的特异性短发卡RNA(small hairpinRNA,sh RNA)真核表达质粒。方法:用DNA重组技术将针对大鼠ATF3基因不同位点所设计的5个shRNA序列克隆到真核表达质粒pGenesil-1中。在酶切分析及序列测定后,用脂质体将5个shRNA分别转染至大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cells,GMC),随后用Western blot检测蛋白的相对表达量来筛选最佳沉默效率的shRNA。结果:限制性酶切及核酸序列分析证明重组质粒构建正确。Western blot证实在重组质粒中,shATF3-1具有最佳的沉默效率。结论:成功构建了针对ATF3基因的shRNA的真核表达质粒,并且该shRNA可以特异性地降低大鼠肾小球系膜细胞ATF3的蛋白表达。
- 任琎姜孝明夏梅赵聃王迎伟
- 关键词：ATF3SHRNA肾小球系膜细胞
