广东省自然科学基金(06104920)
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 相关作者：梁海鹰夏立群张红莲秦启伟刘森林更多>>
- 相关机构：广东海洋大学中山大学广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 新加坡石斑鱼虹彩病毒ORF162蛋白的表达、纯化及抗体制备被引量：1
- 2010年
- 将新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)的ORF162的开放式阅读框插入pET-32a表达载体T7启动子控制下的6-His·Tag编码基因上游,构建SGIVORF162原核表达质粒pET-ORF162。表达质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导,成功表达SGIV ORF162融合蛋白。对IPTG浓度、诱导温度、诱导时间等诱导表达条件进行优化后,确定在0.7mmol/LIPTG、16℃条件下诱导14h时可溶性SGIV ORF162重组蛋白占重组蛋白总量的95%。经镍琼脂糖凝胶纯化,获得纯度为90%以上的SGIV ORF162蛋白。用纯化的SGIV ORF162蛋白免疫小鼠,获得高效特异的SGIV ORF162多克隆抗体。
- 夏立群梁海鹰江韶英张尧清
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- RNA干扰技术抑制新加坡石斑鱼虹彩病毒感染细胞多肽ICP46与绿色荧光蛋白融合基因的表达被引量：3
- 2010年
- 新加坡石斑鱼虹彩病毒(singapore grouper iridovirus,SGIV)是一种严重的能引起全身性疾病的病原体,对石斑鱼养殖造成了重大的经济损失。将含有SGIV感染细胞多肽ICP46(infected cell polypeptides 46)基因的真核表达载体pEGFP-ICP46转染到胖头鲤细胞(fathead minnow cells,FHM)中进行融合表达,用荧光显微镜观察到ICP46-GFP融合蛋白主要分布于FHM细胞的细胞质中。根据SGIVICP46的序列,设计并体外化学合成了特异性干扰SGIVICP46的siRNA(siRNA-ICP46),与pEGFP-ICP46共转染到FHM细胞中,通过荧光显微镜观察不同时间点荧光强度的变化。转染后24～48h,实验细胞(共转染siRNA-ICP46和pEGFP-ICP46)和阳性对照细胞(共转染siRNA-GFP和pEGFP-ICP46)中的荧光微弱,发荧光的细胞数量较阴性对照(共转染siRNA-Negative和pEGFP-ICP46)少70%左右,但其后实验细胞和阳性对照细胞的荧光强度开始增强,在转染后72h其与阴性对照组已差别不大。说明体外化学合成的siRNA-ICP46转染后24～48h可有效抑制FHM细胞中外源导入SGIV ICP46基因的表达。
- 夏立群梁海鹰张红莲秦启伟
- 关键词：RNA干扰绿色荧光蛋白
- 用抑制消减杂交(SSH)和cDNA微阵列技术筛选和鉴定石斑鱼抗病毒新功能基因
- 石斑鱼是我国广东等南方沿海各省的名贵海水养殖鱼类。虹彩病毒是近年来全球范围内最严重的鱼类传染性病毒之一,至今已感染包括石斑鱼在内的100多种养殖鱼类,造成严重经济损失。由于缺乏养殖石斑鱼的遗传背景和基因组信息,尚不清楚石...
- 许丹崔化春赖荣晔秦启伟
- 文献传递
- 新加坡石斑鱼虹彩病毒ORF086蛋白的原核表达、纯化及抗体制备被引量：2
- 2010年
- 新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)是导致石斑鱼养殖严重经济损失的主要病原体。本研究构建了含有新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)ORF086基因的重组表达质粒载体pET32a-ORF086,将其转化到大肠杆菌中进行融合表达,经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,证实重组大肠杆菌融合表达了SGIV ORF086蛋白。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isoprophl-thio-β-D-galactopyranoside,IPTG)浓度、诱导温度、诱导时间等诱导表达条件的优化,确定在0.7 mmol/L IPTG、16℃诱导14 h时可溶性SGIV ORF086重组蛋白占重组蛋白的60%。经镍琼脂糖凝胶柱纯化重组蛋白,纯化度达95%以上。用纯化的SGIV ORF086蛋白免疫小鼠,获得了高效特异的SGIV ORF086抗血清。
- 夏立群张红莲梁海鹰刘森林
- 关键词：原核表达多克隆抗体
