广东省医学科学技术研究基金(B2009249)
- 作品数：6 被引量：17H指数：3
- 相关作者：原向伟黄秀芳陈忠羡秦英范全更多>>
- 相关机构：江门市中心医院中山大学中山大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：广东省医学科学技术研究基金江门市科技计划项目广东省江门市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- α干扰素增强骨肉瘤细胞对依托泊苷敏感性的实验研究被引量：4
- 2014年
- 目的探讨α干扰素(IFN-α)在人骨肉瘤U2OS和MG63细胞中对依托泊苷敏感性的作用及其机制。方法采用IFN-α和依托泊苷单独或联合处理骨肉瘤U2OS和MG63细胞72 h,应用流式细胞术和DNA Ladder检测细胞凋亡的变化,Western blot法检测PARP、p53、MDM2、Bax、Bcl-2的表达。结果流式细胞术表明IFN-α在p53正常的U2OS细胞中明显增强依托泊苷诱导的凋亡(P<0.05),却对依托泊苷诱导p53突变的MG63细胞凋亡无明显影响(P>0.05);DNA Ladder表明与单药组相比,IFN-α与依托泊苷联用72 h在U2OS细胞出现明显的DNA梯形条带,而在MG63细胞中无此现象;Western blot结果表明在U2OS细胞中联合用药组出现PARP的明显裂解活化,并且IFN-α明显增强依托泊苷引起的p53信号通路p53、MDM2、Bax等凋亡基因的表达,并抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达,而在MG63细胞中则无此现象。结论 IFN-α能够通过激活p53依赖性信号通路增强依托泊苷诱导的骨肉瘤U2OS细胞凋亡,联合应用IFN-α和传统化疗药物如依托泊苷可能成为提高骨肉瘤化疗敏感性的有效途径。
- 黄秀芳原向伟
- 关键词：Α干扰素依托泊苷骨肉瘤P53
- 抑癌基因p14ARF对顺铂诱导的骨肉瘤细胞凋亡的影响被引量：1
- 2015年
- 目的 探讨抑癌基因p14ARF对顺铂诱导的骨肉瘤细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 在不表达p14ARF的MG63细胞（p53突变）中稳定转染pcDNA3.1-p14ARF质粒,构建稳定表达株MG63-ARF;经反向聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹法鉴定;使用顺铂处理MG63和MG63-ARF细胞,通过MTT法测定细胞生长抑制和IC50;采用流式细胞术和Hoechst 33258荧光染色检测细胞凋亡;采用免疫印迹检测p53、Bax、p21、Mdm2、Fas、Caspase-3、Caspase-9、PARP的表达;通过RNA干扰进行p53的表达沉默.采用Caspase-9抑制剂Z-LEHD-FMK预处理各组细胞,检测该作用是否依赖Caspase-9.结果 mRNA和蛋白水平,MG63和MG63-vec细胞未见p14ARF表达,MG63-ARF细胞可见p14ARF的高表达.经顺铂处理72 h后,细胞活力在MG63、MG63-vec和MG63-ARF组为84.2％±4.3％、80.8％±4.3％和58.9％±5.4％,IC50值为（11.1±0.6）、（10.7±0.9）、（7.2±0.7） μmol/L,（P＜0.05）.流式细胞术显示MG63、MG63-vec和MG63-ARF组经顺铂处理72 h的凋亡率为：13.6％、18.5％和35.9％.荧光染色表明MG63-ARF细胞相对出现更多更明显的凋亡,在MG63-ARF还出现了更明显的Caspase-3,9和PARP的活化裂解.在顺铂处理的MG63-vec和MG63-ARF细胞中,p53、Bax、p21、Mdm2、Fas的表达无任何改变.在U2OS-vec和U2OS-ARF细胞中转染p53-siRNA明显减弱了p53的表达,再经顺铂处理72 h后,U2OS-vec细胞的转染空白组、转染对照siRNA组和转染p53-siRNA组细胞活力差异无统计学意义（P＞0.05）,U2OS-ARF细胞的转染空白组、转染对照siRNA组和转染p53-siRNA组细胞活力差异无统计学意义（P＞0.05）.Caspase-9抑制剂Z-LEHD-FMK预处理后,Z-LEHD-FMK、顺铂、顺铂＋Z-LEHD-FMK组细胞活力为：96.8％±3.6％、54.1％±5.8％和89.5％±5.1％.结论 p14ARF可通过p53非依赖Caspase-9依赖性途径增强顺铂诱导的骨肉瘤MG63细胞凋亡,该作用与内源性线粒体凋亡通路有关.
- 黄秀芳原向伟陈忠羡梁胜根
- 关键词：骨肉瘤顺铂
- p14ARF增强顺铂诱导的骨肉瘤U2OS细胞凋亡的研究被引量：3
- 2010年
- 目的探讨p14ARF对顺铂诱导骨肉瘤U2OS细胞凋亡的影响及其机制,为提高骨肉瘤化疗敏感性提供依据。方法在不表达p14ARF的U2OS细胞中稳定转染pcDNA3.1-p14ARF质粒,构建稳定表达株;采用RT-PCR和Western blot法鉴定其表达;台盼蓝拒染法测定生长抑制作用;Hoechst33258荧光染色检测凋亡;Western blot法检测Caspase-3,9和PARP的表达和活化。结果 mRNA和蛋白水平,U2OS和U2OS-vec细胞未见p14ARF表达,U2OS-ARF细胞可见p14ARF的高表达;p14ARF单独对U2OS细胞的生长无影响,但顺铂(5μM)处理72小时后,U2OS-ARF细胞的生长抑制率明显高于U2OS和U2OS-vec细胞,相对于U2OS和U2OS-vec细胞,U2OS-ARF细胞不仅表现更为明显的凋亡形态学变化,还明显出现了Caspase-3,9和PARP的活化裂解。结论 p14ARF能够增强顺铂诱导的骨肉瘤U2OS细胞毒作用和凋亡,通过激活Caspase-PARP级联活化,提高骨肉瘤U2OS细胞对顺铂的敏感性。
- 原向伟廖威明黄秀芳梁胜根陈忠羡范全秦英朱孝峰
- 关键词：顺铂骨肉瘤细胞凋亡化疗敏感性
- 干扰素-α增强足叶乙甙介导的凋亡和细胞周期停滞
- 2018年
- 目的探讨干扰素（IFN）-α对足叶乙甙介导骨肉瘤细胞周期停滞和凋亡的影响及其分子机制。方法采用IFN-α和足叶乙甙单独或联合处理骨肉瘤U2OS细胞72 h，通过锥虫蓝法测定细胞生长抑制率，应用流式细胞术检测细胞周期停滞，通过Hochest 33258荧光染色检测凋亡，反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测p53在mRNA水平的表达，通过小干扰RNA（siRNA）干扰沉默p53的表达，采用Western blot法检测p53和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）的表达。结果药物处理72 h，IFN-α、足叶乙甙和联合用药组细胞生长抑制率为：（2.29±1.03）%、（23.85±3.09）%和（50.51±3.77）%，IFN-α增强足叶乙甙的生长抑制，差异有统计学意义（P＝0.008）。在足叶乙甙和联合用药组均出现凋亡形态学改变。足叶乙甙组和联合用药组S期细胞为（19.68±3.62）%和（11.33±2.94）%，G2/M期细胞为（65.02±2.55）%和（76.09±2.87）%，两者组间差异有统计学意义（P＝0.037）。IFN-α没有增加足叶乙甙引起的p53在mRNA水平的表达，但沉默p53表达后空白组、对照siRNA组、p53-siRNA组的生长抑制率分别为：（55.72±3.88）%、（51.63±4.36）%和（36.40±3.95）%，p53沉默减弱了联合用药引起的生长抑制，差异有统计学意义（P＝0.023），同时联合用药组的PARP裂解明显减弱。泛半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）抑制剂Z-VAD-FMK预处理后Z-VAD-FMK、足叶乙甙组、IFN-α＋足叶乙甙组、足叶乙甙＋ Z-VAD-FMK组和IFN-α＋足叶乙甙＋ Z-VAD-FMK组的生长抑制率为（3.52±1.98）%、（27.11±4.06）%、（56.44±4.78）%、（21.37±3.55）%、（23.81±4.22）%。Z-VAD-FMK减弱联合用药引起的生长抑制，差异有统计学意义（P＝0.015），并且联合用药引起的PARP裂解也被减弱。结论IFN-α在人骨肉瘤U2OS细胞中增强足叶乙甙介导的生长抑制、细胞周期停滞和凋亡，该作用依赖p53和Ca
- 原向伟黄秀芳陈忠羡梁胜根秦英向珊珊廖威明
- 关键词：干扰素-Α足叶乙甙骨肉瘤凋亡
- 经皮椎体成形术和经皮后凸成形术治疗骨质疏松性胸腰椎压缩骨折并发症分析被引量：8
- 2013年
- 目的探讨PVP和PKP治疗骨质疏松性胸腰椎压缩骨折的并发症及防治。方法对2009年1月～2011年12月本院确诊骨质疏松性胸腰椎新鲜压缩骨折患者182例共267椎进行PVP(102例)和PKP(80例)治疗,随访12～42个月,比较治疗前后视觉模拟评分(VAS)、Barthel指数等疗效指标,观察并处理手术并发症。结果 PVP组和PKP组术后胸腰背痛均获良好缓解,术后3天、术后1年VAS评分及Barthel指数较术前均明显改善,差异具有统计学意义(P<0.05)。182例发生并发症80例,发生率43.96%。其中PVP组和PKP组发生穿刺并发症各1、2例;骨水泥渗漏各40例(53椎)、13例(15椎),发生率各为36.05%和18.75%,差异具有统计学意义(P<0.05),未发生因骨水泥渗漏导致截瘫、肺栓塞等严重并发症;截至术后1年随访发生临近椎体骨折21例(11.54%),其中PVP组和PKP组各10例(9.80%)、11例(13.75%),差异无统计学意义(P>0.05)。术中发生一过性呼吸困难、呛咳3例,予加强吸氧、安抚患者后好转。结论 PVP和PKP均可明显改善患者症状和生活质量,但并发症发生率较高,在骨水泥渗漏率上PKP相对于PVP具有优越性,在相邻椎体骨折发生率二者无明显差别,完善术前检查评估、良好的手术操作以及规范的抗骨松治疗有助于预防和减少并发症的发生。
- 原向伟陈忠羡范全梁胜根赵振东秦英谢清华付朝华雷洪俊薛忠林
- 关键词：经皮椎体成形术骨质疏松性胸腰椎压缩骨折并发症
- α干扰素增强阿霉素诱导的骨肉瘤细胞凋亡被引量：1
- 2014年
- 目的探讨α干扰素（Interferonα，IFNα）联合化疗药物阿霉素诱导人骨肉瘤U20S细胞凋亡的作用及其机制，为提高骨肉瘤化疗敏感性探索新的治疗方法。方法应用台盼蓝拒染法测定IFNα和阿霉素单用以及联用对U20S细胞的生长抑制作用；Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡形态学变化；Westernblot法检测Caspase-3、PARP的活化；采用Caspase抑制剂Z—VAD—FMK预处理各组细胞，检测该作用是否依赖Caspase。结果IFNα处理24h、48h、72h对U20S细胞无抑制作用，却明显增强阿霉素诱导的生长抑制作用，具有时间依赖性；联合用药72h后U20S细胞出现更为明显的凋亡形态学变化；联合用药组的凋亡关键酶Caspase-3、PARP均发生断裂活化；Caspase抑制剂Z—VAD—FMK预处理明显减弱联合用药引起的生长抑制。结论IFNd通过Caspase依赖性凋亡通路增强阿霉素诱导的骨肉瘤U2OS细胞生长抑制和凋亡，二者联合应用可能成为提高骨肉瘤化疗敏感性的有效途径。
- 黄秀芳原向伟
- 关键词：Α干扰素阿霉素骨肉瘤凋亡天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶
