国家高技术研究发展计划(2009AA064401)
- 作品数：20 被引量：138H指数：8
- 相关作者：张成武李爱芬桑敏黄旭雄周志刚更多>>
- 相关机构：上海海洋大学暨南大学新奥科技发展有限公司更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金上海市教育委员会创新基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学动力工程及工程热物理天文地球更多>>
- 莱茵衣藻“细菌型”pepc2基因叶绿体表达及其对油脂蛋白质含量的影响
- 2017年
- 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(Phosphoenolpyruvate carboxylase,PEPC,EC 4.1.1.31)在植物碳代谢中有重要作用,高等植物中PEPC可以调控蛋白质和脂肪酸含量,但是对绿藻PEPC的研究还较少。莱茵衣藻是绿藻中的模式生物,其基因工程中外源基因的转化以叶绿体转化效率最高,为了提高外源蛋白表达和获得高产油莱茵衣藻,利用叶绿体转化法能进一步提高表达效率。因此,本研究首先克隆了莱茵衣藻"细菌型"PEPCCSⅠ(conserved sequenceⅠ)的639 bp,构建了p ASap I-reve-Crpepc2和p ASap I-forw-Crpepc2正反向叶绿体表达载体,并用基因枪法转化莱茵衣藻cc-400获得了空质粒型,正向型和反向型转基因藻株。其次,应用RTq PCR方法检测Crpepc2的相对表达量,结果表明反向型Crpepc2的表达量减少了89.97%,而正向型增加了201.16%。最后,检测了总蛋白和脂质含量的变化,正向型突变株的总蛋白增加了37.03%;而反向型突变株的脂质含量增加了70.32%,且不饱和脂肪酸含量明显增加。以上结果证明莱茵衣藻"细菌型"PEPC的叶绿体表达不仅可以进一步提高蛋白质与脂肪酸含量,也可为今后外源蛋白的表达和高产油工程藻的应用做贡献。
- 冯思豫施定基贾晓会朱嘉诚米华玲贾睿何培民
- 关键词：莱茵衣藻蛋白质
- 氮、磷对缺刻蚁形藻生长、总脂及花生四烯酸积累的影响被引量：3
- 2011年
- 目的:研究缺刻蚁形藻(Myrmecia incisa)在4种氮、磷质量浓度条件下的生长和总脂(TL)及花生四烯酸(AA)含量,以及在低氮和低磷条件下的脂肪酸组成。方法:采用BG-11培养基和Φ6×60cm柱状光生物反应器培养缺刻蚁形藻,利用有机溶剂提取脂类物质,通过气相色谱-质谱仪分析脂肪酸的组成。结果:在300～1500mg/L的硝酸钠质量浓度范围内,氮质量浓度的改变对缺刻蚁形藻的生物量影响不明显,不同氮质量浓度条件下的最终生物量在2.10～2.40g/L之间。低氮质量浓度条件下TL和AA含量最大,分别为藻粉干质量的27%和总脂肪酸(TFA)的9.04%,其中AA占藻体干质量的3.16%。不同磷质量浓度对缺刻蚁形藻的生长影响显著,低磷质量浓度明显抑制藻的生长,其最终生物量在0.98～2.47g/L之间。在质量浓度8～20mg/L的磷酸氢二钾条件下,藻的TL含量没有明显变化,为20%左右。结论:TL与氮、磷质量浓度呈明显负相关关系,低氮比低磷条件更有利于AA的积累。
- 张成武马晓琴罗梦柳桑敏李爱芬
- 关键词：氮浓度磷浓度脂肪酸总脂花生四烯酸
- 链霉素对蛋白核小球藻Chlorella pyrenoidosa产氢及其生长的影响被引量：1
- 2011年
- 以蛋白核小球藻Chlorella pyrenoidosa为材料,研究不同链霉素浓度对其生长及其产氢过程的影响。结果表明,添加600 mg/L的链霉素对蛋白核小球藻的产氢具有最大促进作用,产氢时间可持续8 d,比对照组延长近6 d,总产氢量为354.54μL/mg,分别是对照组、200 mg/L和1 000 mg/L试验组的18.44,5.85和1.35倍;通过比较不同条件下蛋白核小球藻的光合及生长状况,证实链霉素明显抑制了蛋白核小球藻的光合放氧,对藻细胞产氢后期的生长也有一定抑制作用。
- 张磊桑敏李爱芬张成武
- 关键词：链霉素蛋白核小球藻产氢
- 硒对紫球藻抗氧化酶活性及丙二醛含量的影响被引量：11
- 2011年
- 利用添加0.5mg.L-1硒的人工海水(ASW)培养基培养紫球藻Porphyridium sp.UTEX 637,并采用试剂盒、氯化硝基四氮唑蓝(NBT)光化学还原反应法、紫外分光光度法、硫代巴比妥酸(TBA)分析法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性及丙二醛(MDA)的含量,着重探讨硒对紫球藻抗氧化酶活性及丙二醛含量的影响。结果表明,硒明显促进紫球藻细胞的GSH-Px活性(p<0.05)。加硒处理组和未加硒对照组紫球藻的GSH-Px活性均在第15天达到最高;加硒组紫球藻的最大酶活性达到4.31个酶活力单位(U),为对照组的1.31倍。SOD和CAT的活性分别在第18天和15天达到最大值,但加硒组与对照组之间差异不显著(p>0.05),说明0.5mg.L-1硒对紫球藻的SOD和CAT活性影响不明显。加硒能明显降低藻细胞丙二醛的含量,加硒组藻细胞的丙二醛含量比对照组藻细胞的丙二醛含量降低了15.21%。
- 王江宏刘艳桑敏李爱芬张成武
- 关键词：紫球藻硒抗氧化酶丙二醛
- 缸内直喷天然气发动机时序控制策略研究被引量：3
- 2011年
- 针对缸内直喷天然气发动机,在研究发动机电控单元(ECU)软件与发动机运转同步策略的基础上,设计开发了"零整结合"式的高精度点火与喷射时序控制策略。仿真和台架试验表明:控制策略和设计方案可行,发动机运转平稳可靠,且燃气缸内直喷较进气道喷射有较大的性能提升。
- 邹博文李静波葛晓成刘俊刚王国华
- 关键词：天然气发动机
- 微藻自絮凝采收及培养液回收再利用研究
- 在本研究中,通过调节微藻藻液的pH值实现了微藻细胞的自絮凝采收,并考察了自絮凝后培养液的回收再利用情况。在海水微藻(Nannochloropsis oculata,Phaeodactylum tricornuum)培养体...
- 吴泽臣朱毅黄薇雅张成武李涛李爱芬张渊明
- 关键词：微藻
- 文献传递
- 缺刻缘绿藻FAD基因的序列特征及其相对转录量对氮饥饿的响应被引量：3
- 2012年
- 为探讨缺刻缘绿藻(Myrmecia incisa)花生四烯酸(20:4 6,AA)合成过程中一系列脂肪酸去饱和酶(FAD)的作用,本研究克隆了12、6及5 FAD基因的cDNA全长序列(GenBank登录号分别为JN205757、JN205755和JN205756)及其相应的DNA序列。它们的cDNA全长分别为1 806 bp、2 674 bp及2 318 bp,其中ORF长为1 137bp、1 443 bp和1 446 bp,分别编码由378、480和481个氨基酸组成的蛋白;通过其cDNA与DNA序列的比对,发现12、6及5 FAD基因分别具有4、5和7个内含子,其剪切位点均符合"GT-AG"规则。Δ12、Δ6和Δ5 FAD编码蛋白均富含疏水性氨基酸,约占各自氨基酸组成的52.8%、46.6%及50.9%。密码子的偏好性与缺刻缘绿藻其他基因保持一致。推测这3个FAD基因编码蛋白都存在4个跨膜区,而12和5 FAD还各有一个明显不跨膜的疏水区;都具有FAD家族各自相对保守的3个组氨酸簇基序。基于缺刻缘绿藻和其他物种相应的FAD基因编码蛋白序列所构建的Neighbor-joining(NJ)系统进化树,表明Δ12、Δ6、Δ5及ω3 FAD分别隶属于各自的分支,其中,Δ12与ω3 FAD的亲缘关系较近,而Δ6与Δ5 FAD具有较近的亲缘关系。利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,Q-RT-PCR)分析这3个FAD基因在缺刻缘绿藻缺氮培养96 h后又恢复氮培养72 h过程中的相对转录量,结果表明这3个基因的相对转录量都受到氮信号的调控,它们随着氮饥饿培养时间延长明显上升,而氮恢复培养后迅速并显著地下降到氮饥饿胁迫前的水平。结合已知脂肪酸成分在此过程中的变化,推测这3个基因对缺刻缘绿藻AA的合成和积累都起着重要的作用,而Δ6 FAD的作用可能更关键。
- 刘凡李慧李春阳欧阳珑玲周志刚
- 关键词：缺刻缘绿藻脂肪酸去饱和酶基因克隆实时荧光定量PCR
- 氮饥饿与磷饥饿促使缺刻缘绿藻花生四烯酸含量增加的比较被引量：21
- 2011年
- 以富含花生四烯酸(AA)的缺刻缘绿藻H4301为研究对象,探讨了不同光照强度条件下氮饥饿与磷饥饿对藻生物量、AA及脂肪酸含量变化的影响。发现氮饥饿与磷饥饿均降低了藻类的生长速率与生物量,当在60μmol photons/(m2.s)的低光照强度下,磷饥饿时的藻类平均生长速率最低[0.025 g/(d.L)],不足BG-11完全培养基中该藻生长速率的一半;氮饥饿与磷饥饿均能提高藻细胞总脂肪酸及AA的含量,但在低光照强度下磷饥饿的促进效果比较差;无论是完全培养基中还是饥饿处理时,200μmol photons/(m2.s)的高光照强度都不利于藻细胞AA及多不饱和脂肪酸的合成与积累;随着饥饿时间的不断持续,AA占总脂肪酸的百分含量逐渐增加,而亚油酸的百分含量逐渐降低,但在磷饥饿时,油酸的百分含量也增加,特别在高光照强度下,以油酸为主的单不饱和脂肪酸含量在第27天时占细胞干重的5.28%,以致AA含量的增加没有氮饥饿时的显著。从脂肪酸成分的变化来分析,该藻在氮或磷饥饿过程中主要是从亚油酸到γ-亚麻酸再到20∶3ω6这个途径来合成并积累AA,其中Δ6去饱和酶是限速酶,而ω3去饱和酶催化步骤受饥饿处理的负调控对确保AA的合成与积累有较大的积极作用。氮饥饿使藻细胞蛋白质合成受阻以及磷饥饿使核酸合成、糖类与能量代谢产生障碍,从而阻止藻类的生长并迫使细胞代谢流转向不含氮和磷的脂肪酸合成代谢,以提高藻细胞总脂肪酸及AA含量。
- 童牧于水燕欧阳珑玲周志刚
- 关键词：缺刻缘绿藻生物量磷饥饿
- 单生卵囊藻(Oocystis solitaria)和月牙藻(Selenastrum sp.)的培养条件及其细胞组成被引量：10
- 2011年
- 从海滨的淡水池沼中分离得到单生卵囊藻(Oocystis solitaria)和月牙藻(Selenastrum sp.),分别研究了温度、光照强度、盐度对2种微藻生长繁殖的影响,分析了2种微藻的细胞组成、脂肪酸组成及盐度对2种微藻脂肪积累的影响。结果表明:单生卵囊藻和月牙藻的适宜生长温度分别为35.9℃～40.5℃和29.7℃～32.8℃;单生卵囊藻和月牙藻的适宜光照强度分别为46～70&mol·m-2·s-1和17～54&mol·m-2·s-1;单生卵囊藻在淡水培养液中生长最好,月牙藻在盐度为2的半咸水培养液中生长最好;在适宜培养条件下,单生卵囊藻细胞蛋白、总糖和总脂肪分别为27.61%、22.00%和3.84%;月牙藻细胞的蛋白、总糖和总脂肪分别为28.06%、21.99%和12.53%;单生卵囊藻的脂肪酸组成中含有丰富的18:3n3;月牙藻的脂肪酸组成中含有DHA;盐度影响2种微藻的总脂肪含量;单生卵囊藻和月牙藻分别在盐度4和10的半咸水培养液中细胞总脂含量最高。
- 严佳琦黄旭雄马珅俊黄征征吕为群
- 关键词：温度光照强度盐度
- 缺刻缘绿藻甘油-3-磷酸酰基转移酶基因克隆及原核表达
- 甘油-3-磷酸酰基转移酶（G3PAT）为酰基转移酶家族成员之一,主要催化甘油-3-磷酸甘油骨架sn-1的酰基化反应,可存在于内质网、叶绿体和线粒体中,在三酰甘油（TAG）和磷脂酰甘油（PG）合成中起重要作用。基于Ostr...
- 欧阳珑玲周志刚
- 文献传递
