国家自然科学基金(30472109)
- 作品数：6 被引量：14H指数：2
- 相关作者：钱元恕卓超彭青李文芳姚芬更多>>
- 相关机构：汕头大学汕头大学医学院第一附属医院重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 嗜麦芽窄食单胞菌所产金属β-内酰胺酶基因的克隆及表达被引量：3
- 2004年
- 目的 探讨嗜麦芽窄食单胞菌所产金属 β 内酰胺酶的酶学特性及分子生物学特征。方法 以MBL E试验筛查到的一株产金属 β 内酰胺酶 (MBL)嗜麦芽窄食单胞菌 75 0为研究对象 ;MBL的等电点、对酶抑制剂的酶稳定性及抗生素的水解率按常规测定 ;抽提细菌染色体、PCR扩增blaMBL全基因并进行测序 ;构建blaMBL pET32a( + )重组体 ,并在大肠杆菌BL2 1(DE3)中进行表达。结果 菌株 75 0仅产一种 β 内酰胺酶 ,其pI为 6 6 ;以对亚胺培南的水解率为 10 0 %计 ,对青霉素、拉氧头孢、头孢他啶、氨曲南的相对水解率分别依次为 14 2 0 %、2 7%、9%和 1% ,酶活性可被EDTA抑制 ,但不受克拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦等 β 内酰胺酶抑制剂影响。染色体DNA模板的PCR结果显示 ,酶全基因全长为 86 7bp ,经序列分析和同源性比较 ,与已报道的金属酶L1的编码基因blaS(注册号AJ2 916 72 )和blaL1(AF0 10 2 82 )的核苷酸同源性均为 99 31% ,推定的氨基酸序列同源性分别为 99 31%和 98 96 %。大肠杆菌BL2 1(DE3)转化含酶基因的blaMBL pET32a( + )重组质粒后 ,MBL E试验为产MBL阳性 ,对亚胺培南和头孢他啶的MIC分别为 12mg/L和 2mg/L ,对亚胺培南的MIC较母株低 10倍左右 ;SDS PAGE分析发现 ,融合基因表达的蛋白为 4 8kDa 。
- 卓超钱元恕
- 关键词：嗜麦芽窄食单胞菌MBLE试验酶基因金属酶
- VIM-2型金属β内酰胺酶的序列分析、原核表达及纯化被引量：1
- 2006年
- 目的对铜绿假单胞菌所产blaVIM-2进行基因重组表达及纯化。方法以产blaVIM-2铜绿假单胞菌总基因组DNA为模板,PCR扩增blaVIM-2,将其克隆入pUCm-T载体后测定该核苷酸序列,再将blaVIM-2克隆入表达载体pET-41b(+),然后在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,表达产物再过Ni-NTA柱纯化。结果PCR扩增出大小为801bp的基因片段,与GenBank上同类酶的基因序列同源性为100%。此基因能在大肠埃希菌中大量表达,蛋白分子质量大约为56000u。结论对VIM-2金属酶的成功表达及纯化为进一步做酶动力学及酶的其他分子生物学特性研究奠定了基础。
- 林孟娴王佩芬蔡应木钱元恕
- 关键词：克隆原核表达及纯化铜绿假单胞菌
- 耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药机制研究被引量：1
- 2009年
- 目的了解汕头地区对亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌(PA)的耐药情况及其机制。方法收集临床分离耐亚胺培南的PA共141株,PCR法检测包括KPC,SME,GES,PER和VEB型超广谱β内酰胺酶(ESBLs)及PSE酶基因。结果菌株对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率较低,未发现产KPC,SME,GES,PER和VEB型ESBLs,6株菌株产PSE酶。结论ESBLs并非汕头地区铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因,可能是多种机制协同作用的结果。
- 姚芬陈淑贞钱元恕
- 关键词：亚胺培南铜绿假单胞菌耐药
- β-内酰胺类抗生素对L1型金属β-内酰胺酶的稳定性及酶动力学研究被引量：1
- 2008年
- 目的通过比较9种β-内酰胺类抗生素对L1型金属β-内酰胺酶(金属酶)的稳定性及酶动力学参数,了解金属酶L1的酶学特性。方法制备金属酶L1的纯化产物,以紫外分光光度计测定9种β-内酰胺类抗生素对L1型金属酶的稳定性及酶动力学参数。结果重组L1酶水解青霉素及碳青霉烯类抗生素的能力接近,氨曲南及头孢他啶对L1酶高度稳定。结论L1酶的稳定性及动力学研究为指导临床合理应用抗生素提供了科学的理论依据。
- 彭青李文芳钱元恕
- 关键词：Β-内酰胺类抗生素稳定性酶动力学
- 一株荧光假单胞菌的耐药研究被引量：2
- 2008年
- 目的:了解临床分离的一株荧光假单胞菌的耐药情况和机制。方法:微量稀释法测定细菌对多种抗生素的最低抑菌浓度,双纸片协同法进行金属酶检测,PCR扩增I型整合酶及金属酶基因,分光光度计测定酶粗提液对抗生素的稳定性。结果:菌株对β-内酰胺类抗生素和碳青霉烯类抗生素高度耐药,产IMP型金属β-内酰胺酶,酶的编码基因位于I型整合子上,酶粗提液对碳青霉烯类抗生素的水解能力与对青霉素的水解能力接近。结论:IMP型金属酶的产生是该菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因。
- 姚芬黄源春张娟钱元恕
- 关键词：荧光假单胞菌金属Β-内酰胺酶耐药
- 嗜麦芽窄食单胞菌所产L1型金属β内酰胺酶的序列分析及原核表达被引量：6
- 2005年
- 目的对嗜麦芽窄食单胞菌所产L1型金属β内酰胺酶基因进行测序、原核表达。方法PCR扩增L1酶的编码基因,将其亚克隆入pUCmT载体后测定核苷酸序列,将L1酶基因克隆至表达载体pET41a(+)后在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳检测表达情况,等电聚集电泳测定表达蛋白的等电点。结果本实验中L1的编码基因与国外同类酶的氨基酸同源性为92.44%。此L1酶基因可在大肠埃希菌BL21(DE3)中大量表达,等电点为6.7。结论对L1型金属β内酰胺酶的克隆测序及成功表达为进一步研究该酶的分子生物学特性奠定了基础。
- 彭青李文芳卓超钱元恕
- 关键词：嗜麦芽窄食单胞菌金属Β内酰胺酶原核表达
