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多重PCR诊断猪细小病毒、伪狂犬病毒和圆环病毒Ⅱ型方法的建立和应用被引量：2: 2010年; 根据GenBank中已发表的猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)和猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)等3种病毒基因序列,对各病毒基因区进行同源性分析,确定PPV VP2、PRVgB、PCV2ORF1基因的保守区为各病毒的诊断靶序列。在建立各病毒单重PCR技术的基础上,优化多重PCR反应条件,建立了三种病毒的多重PCR技术。用78份临床病料对本研究多重PCR技术和单重PCR技术进行对比验证,结果显示,总符合率为97.4%以上。该方法特异性强、敏感性高,为PPV、PRV和PCV2临床诊断和流行病学调查等研究提供了新手段。; 刘洋李俊时建立孙文博徐绍建吴家强李坤于江王金宝周顺; 关键词：PPV PRV PCV2

山东省猪群TTV感染情况及分子流行病学分析被引量：6: 2011年; 为了确定Torque teno virus(TTV)在山东省猪群中是否存在及其感染情况,本研究利用套式PCR方法检测了来自山东省不同地区10个猪场的230份血液样品和组织样品。结果表明猪群中TTV1和TTV2感染总阳性率分别为45.2%和85.7%。两者的混合感染率为39.3%。用套式PCR引物扩增出TTV1和TTV2的部分片段,并将扩增出的部分基因与已报道的TTV1和TTV2病毒序列进行比较分析。分析结果显示TTV可分为TTV1和TTV2两大分支,其TTV1和TTV2与参考株相比同源性分别为88.0%～92.8%和91.9%～94.1%。本研究证实在山东省猪群中存在TTV感染,由于TTV可以感染人,其在公共卫生学方面的意义应当引起我们的重视。; 李俊时建立刘洋吴家强丛晓燕徐绍建孙文博王金宝; 关键词：TTV

猪圆环病毒2型特异性荧光定量PCR检测方法的建立与应用被引量：6: 2011年; 研究旨在建立基于SYBR Green I荧光定量PCR检测PCV 2的技术方法。根据GenBank中的猪圆环病毒2型(PCV 2)的基因序列(HQ148879),设计一对特异性引物,利用普通PCR技术扩增出PCV 2的ORF2基因702bp片段,并克隆到pVAX1载体,以纯化的质粒作为PCR检测的标准模板,以10倍梯度稀释质粒为阳性标准品,摸索荧光定量PCR试验,并绘制标准曲线,以此建立一种荧光定量PCR特异性检测猪圆环病毒的方法。结果表明,该方法对PCV 2有很好的特异性,其敏感性比常规PCR高100倍,批间与批内重复试验变异系数均小于2.5%。经临床应用表明荧光定量PCR方法的建立实现了对PCV 2特异性的快速诊断和定量检测。; 吴晓燕刘涛李俊时建立韩偲刘洋吴家强周顺王金宝; 关键词：猪圆环病毒2型 SYBR I 荧光定量PCR 特异性

山东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒分子特征被引量：1: 2011年; 为揭示2009~2010年山东地区流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的分子特征,通过RT-PCR扩增采自山东地区不同猪场病猪组织样本中PRRSV的Nsp2、ORF5、ORF6、ORF7序列,用DNAStar软件分析所测序列,并与北美洲型VR-2332株、欧洲型LV株及国内分离株进行核苷酸和推导的氨基酸同源性比较。结果表明,Nsp2、ORF5、ORF6、ORF7核苷酸与北美洲型VR-2332的同源性分别为77%~79.9%、88.3%~89.6%、94.9%~95.8%、93.3%~94.1%,与欧洲型LV株的同源性分别为29.6%~31.6%2、64.1%~64.8%、68.3%~68.6%、66.2%~67.3%,证明山东地区的PRRSV毒株仍属北美洲型。系统进化分析表明它们与国内2006~2010年间的分离株（变异株）亲缘关系较近,而与更早的分离株和疫苗MLV株亲缘关系较远,未发现传统毒株。在Nsp2、ORF5、ORF6、ORF7基因上均有不同程度的点突变。本研究揭示了山东地区流行的PRRSV各基因的变异特征,为PRRSV的综合防控提供理论依据。; 战翔李娟张熙艳刘洋李俊; 关键词：PRRSV NSP2基因 ORF5基因 ORF6基因 ORF7基因

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