国家重点实验室开放基金(SKLVBF201002)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：李红梅廖明亓文宝田大勇陈孝明更多>>
- 相关机构：华南农业大学中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家重点实验室开放基金广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 日本乙型脑炎病毒SA14-14-2株NS1-Flag蛋白在293T细胞中的表达被引量：1
- 2011年
- 通过RT-PCR方法扩增出日本乙型脑炎病毒SA14-14-2株的NS1基因,利用HindⅢ和HpaⅠ双酶切克隆到带有Flag标签的pcDNA3.1载体上,重组质粒命名为pcDNA3.1-NS1-Flag。脂质体法转染293T细胞后,经间接免疫荧光(IFA)和化学荧光Western blotting检测,证明带有Flag标签的NS1基因在293T细胞中得到高效表达。
- 臧富玉亓文宝陈孝明刘国乾李红梅廖明
- 关键词：日本乙型脑炎真核表达293T细胞
- 腺病毒/日本脑炎病毒复制子嵌合载体的构建被引量：1
- 2013年
- 为解决日本脑炎病毒(JEV)复制子DNA疫苗载体不稳定和递送效率低的缺点,本研究利用具有高效递送效率的人5型复制缺陷性腺病毒(AdV)来递送JEV复制子,构建嵌合载体。本研究将已构建的含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的JEV复制子克隆至经过改造的带有SwaⅠ酶切位点的pShuttle-CMV载体中,再将来自pCI载体的嵌合内含子插入JEV复制子中,得到转移载体pSh-JEV-In-EGFP,经SwaⅠ线性化后电转化至含有腺病毒骨架载体AdEasy-1的BJ5183感受态细胞,将所得重组腺粒经PacⅠ线性化后转染HEK293细胞,传代直至出现细胞病变,得到含有表达EGFP的JEV复制子的重组腺病毒,命名为rAdV-JEV-In-EGFP。结果表明,pSh-JEV-In-EGFP在细菌中传20代仍然保持稳定,而且在rAdV-JEV-In-EGFP感染的HEK293细胞中,JEV复制子能够自我复制,并启动EGFP蛋白稳定、高效地表达。本研究为进一步研发以腺病毒递送的JEV复制子为基础的二价新型疫苗奠定基础。
- 李红梅孙元亓文宝孟其麟田大勇廖明仇华吉
- 关键词：腺病毒内含子
