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天津市应用基础与前沿技术研究计划项目(09JCZDJC17600)
作品数:
2
被引量:2
H指数:1
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宋云朋
刘哲
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康春生
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2010
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Ad-PTEN增强LY294002对人胶质瘤细胞系U251的生长抑制作用
被引量:2
2010年
目的在体外实验中,利用携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad—PTEN)和P13K的小分子抑制剂LY294002联合抑制P13K/AKT信号通路,观察两者联合对人胶质瘤细胞系U251生长有无正向协同作用及探讨产生这种作用的机制。方法15251细胞按处理方式不同分为4组:DMSO对照组、空载病毒对照组、LY294002组和联合组(LY294002+Ad—PTEN组)。在U251细胞系中导入LY294002并转染Ad—PTEN病毒后,提取总蛋白,用Westernblotting检测PTEN表达状态及P13K、AKT表达情况;用MTT法检测Ad—PTEN和LY294002对U251生长抑制率、流式细胞仪检测细胞周期、AnnexinV法检测细胞凋亡,观察导人LY294002和转染Ad—PTEN后U251增殖能力的改变;用划痕实验、Transwell实验观察LY294002及Ad—PTEN对U251迁移和侵袭能力的影响;Westernblotting检测P13K/AKT信号通路下游相关蛋白表达水平变化。结果Westernblotting显示:与DMSO组和空载病毒组相比,LY294002组P13K、AKT蛋白表达水平明显降低,联合组(LY294002+Ad—PTEN)的WEN蛋白明显上调,而P13K、AKT蛋白下降水平比LY294002组更为显著。联合组与LY294002组、空载病毒组、DMSO组相比细胞周期阻滞在G0/G1期;联合组凋亡率比其他三组明显增加;自培养第2天起,联合组细胞增殖速率呈下降趋势。联合组侵袭和迁移细胞的相对数少于LY294002组、空载病毒组和DMSO组。Westernblotting结果证明位于P13K/AKT下游的MMP-2、MMP-9、PCNA、Bcl-2、CyclinD1、NF—KB、FAK蛋白表达水平显著下调。结论小分子抑制剂LY294002能够有效抑制U251中P13K、AKT蛋白的表达,联合转染Ad—PTEN后不仅能提高PTEN蛋白的表达水平,对P13K、AKT的抑制更为显著。在体外实验中,联合Ad—PTEN和LY294002能够有效地通过阻滞细胞周期、减少细胞凋亡来抑制U251的增殖能力,并能够抑制细胞的侵袭和迁移能力,两者联合使用具有正向协同作用
刘哲
李文良
康春生
宋云朋
韩磊
张安玲
关键词:
LY294002
P13K/AKT
胶质瘤
Ad-PTEN对乳腺癌细胞系MCF-7生长抑制作用的影响及机制
2010年
目的探讨携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)和LY294002对乳腺癌细胞系MCF-7生长抑制作用的影响及机制。方法在MCF-7中导入Ad-PTEN和PI3K抑制剂LY294002。Western blotting法检测PTEN/PI3K/AKT及其下游相关蛋白表达,MTT法检测MCF-7细胞存活率,流式细胞仪检测细胞周期,Annexin V法检测细胞凋亡率。结果与DMSO组、空载病毒和LY294002组相比,联合组(LY294002+Ad-PTEN)PTEN蛋白明显上调,而PI3K/AKT及下游蛋白水平显著下降;联合组细胞阻滞于G0/G1期;细胞凋亡率增加明显;自培养第2天起,联合组细胞生存率呈下降趋势。结论Ad-PTEN联合LY294002通过阻滞细胞周期、促进细胞凋亡抑制MCF-7的增殖能力,两者具有正向协同作用;其机制可能与下调PI3K/AKT信号通路下游蛋白有关。
刘哲
李文良
宋云朋
许朋
韩磊
关键词:
PI3K抑制剂
乳腺癌细胞
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