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hsa-miR-100-3p抑制剂慢病毒表达载体稳定感染BEAS-2B细胞株的建立被引量：2: 2016年; 目的建立稳定感染人hsa-miR-100-3p抑制剂慢病毒表达载体的人支气管上皮(human bronchial epithelial,BEAS-2B)细胞株,为研究miR-100的功能奠定基础。方法根据hsa-miR-100-3p的成熟序列,设计其反向互补序列,用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的方法扩增目的基因,将目的基因与慢病毒载体GV280经双酶切后,进行定向连接,产生GV280-hsa-miR-100-3p-inhibitor慢病毒表达载体。将制备好的重组慢病毒质粒与两种辅助包装原件载体质粒共转染人胚肾上皮细胞293(human embryo kidney epithelial cell,HEK-293)T细胞,包装产生病毒颗粒并以最适滴度感染BEAS-2B细胞以获得稳定感染的细胞株。倒置荧光显微镜观察感染效率,用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)的方法检测重组慢病毒感染后BEAS-2B细胞中miR-100的相对表达量。结果测序结果表明,目的基因成功的连接到慢病毒载体上,重组慢病毒高效的感染了BEAS-2B细胞。RT-PCR检测发现,BEAS-2B细胞中miR-100的相对表达明显的下调了。结论稳定感染hsa-miR-100-3p抑制剂的BEAS-2B细胞株构建成功,敲低了细胞中内源性miR-100的表达。; 董伟刘媛媛陈志军姜玉朱其苹汪思应; 关键词：聚合酶链式反应慢病毒属微RNAS

Gab2在SHP-2激活突变导致的小鼠肥大细胞异常增殖活化及其导致器官损伤中的作用: 2013年; 目的观察接头蛋白Gab2对激活突变SHP-2导致的肥大细胞异常增殖活化是否具有调控作用,对激活突变SHP-2小鼠器官损伤有无影响.方法用Gab2-/-、SHP-2D61G/＋小鼠杂交建立四种基因型（SHP-2＋/＋、Gab2-/-、SHP-2D61G/＋、SHP-2D61G/＋/Gab2-/-）小鼠为研究对象;取小鼠骨髓细胞用IL-3诱导建立肥大细胞,用MTS法检测不同基因型小鼠肥大细胞对细胞因子刺激增殖反应性;用ELISA法检测小鼠血清及肥大细胞分泌炎症因子水平,放射免疫法检测小鼠血清中丙氨酸转氨酶（ALT）和心肌肌钙蛋白I（cTnI）的水平;用病理组织学技术检测小鼠组织白细胞浸润及器官损伤情况.结果 Gab2缺失后,SHP-2激活突变导致的小鼠肥大细胞异常增殖及活化现象明显改善,对细胞因子增殖反应性下降,相应细胞因子分泌减少,心脏及肝脏组织损伤减轻.结论 Gab2缺失降低了SHP-2激活突变导致的小鼠肥大细胞异常增殖活化和心脏及肝脏组织损伤.; 陈吉陈卓汪心怡郑红瞿成奎汪思应; 关键词：SHP-2 器官损伤

TET2通过miR-22-3p的调控抑制肝癌细胞的干性和转移: 【研究背景】　　肝癌在恶性肿瘤中，发病率高，主要集中在亚洲。肝癌在中国恶性肿瘤的死亡率中高居第二。肝癌具有恶性程度高，容易复发和转移等特点，导致肝癌病人差的临床预后。但是引起肝癌高复发率，高转移率的机制仍然不是很清楚。近...; 陈丹蕾; 关键词：肝癌甲基转移酶; 文献传递

环境污染物As及SHP2D61G/＋激活对小鼠成纤维母细胞miRNA表达谱的影响被引量：3: 2013年; 目的建立环境致癌物与基因突变联合因素影响下的miRNA表达谱,为肿瘤发生机制的进一步研究提供新线索。方法同等条件下,首先制备SHP2+/+野生型(wild type,Wt)及SHP2D61G/+激活突变(gain-of-function mutation,GOF mutation)小鼠永生化的成纤维母细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)细胞,之后以0.5μmol/L的三氧化二砷急性处理MEFs细胞48 h后提取细胞总RNA,用小鼠miRNA芯片杂交/分析,建立miRNA(microRNA,miRNA,miR)表达谱,筛选差异表达显著者,用RT-PCR进行验证。结果重金属化合物三氧化二砷处理SHP2+/+野生型和SHP2D61G/+突变的MEFs细胞48h后,数十个miRNAs出现差异性表达,miRNA在三氧化二砷诱导前后的细胞或SHP2激活突变与否的细胞出现表达增加或减少,且发现受三氧化二砷和SHP2激活突变影响变化一致的miRNAs,如mmu-miR-100(表达下降)、mmu-miR-1907(表达升高)等,RT-PCR检测发现mmu-miRNA-100、mmu-miRNA-1907的表达趋势与芯片结果是一致的。结论基因突变与环境污染可以影响MEFs细胞的miRNA表达谱出现明显改变,这些改变可能是细胞恶性转化及肿瘤发生的基础。; 崔花芹汪心怡陈吉陈卓赵华瞿成奎汪思应; 关键词：环境污染基因突变

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