云南省教育厅科研基金(07C10700) 作品数:3 被引量:10 H指数:2 相关作者: 郭丽红 刘开庆 袁燕 张乐民 王定康 更多>> 相关机构: 昆明学院 云南大学 更多>> 发文基金: 云南省教育厅科学研究基金 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 更多>>
拟南芥热激蛋白HSP70基因片段克隆实验体系的建立 被引量:1 2009年 以拟南芥为材料,对热激蛋白HSP70基因片段进行了克隆研究,获得了最佳的分子克隆实验体系.首先提取拟南芥总DNA,接着在热激蛋白HSP70编码区设计引物,扩增出HSP70编码区的片断,再将HSP70编码区的片断加上具有EcoR I酶切位点双链的人工接头,通过EcoR I对其进行酶切.再与经过EcoR I酶切并已经去磷酸化的PUC19载体通过T4连接酶进行连接,然后将连接产物置入到感受态大肠杆菌细胞中(即转化),并让这种细胞在含有Amp+/IPTG/X-Gal的LB培养基上生长.挑取培养基上蓝白斑中的白斑,进行质粒DNA提取,通过酶切质粒DNA,从而初步判断目的片段已被克隆. 郭丽红 杨晓虹 刘开庆 袁燕关键词:拟南芥 基因片段 克隆 拟南芥热激因子HsfA1a部分氨基酸的表达与纯化 被引量:2 2009年 以构建的表达拟南芥热激因子HsfA1 a C端氨基酸331到氨基酸486(简称ΔHsfA1 a)的大肠杆菌E coliM15为材料,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达ΔHsfA1 a,再通过N i-NTA-Agarose亲和层析纯化表达的ΔHsfA1 a,通过SDS-PAGE电泳分析表达蛋白和纯化蛋白,获得了表达纯化的ΔHsfA1 a. 郭丽红 王定康 袁燕 刘开庆 张乐民关键词:纯化 拟南芥热激因子HSF1的表达与纯化 被引量:8 2009年 [目的]表达和纯化拟南芥热激因子HSF1。[方法]以构建的能表达热激因子HSF1的大肠杆菌Escherichia coliM15(pQE32/His6-HSF1,pREP4)为材料,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达HSF1,再通过镍亲和层析纯化表达的HSF1,通过变性的聚丙酰胺(SDS-PAGE)电泳分析表达蛋白和纯化蛋白。[结果]试验获得了表达的HSF1,并且进一步获得了纯化的HSF1。[结论]该研究为探讨拟南芥HSF1在基因组的结合位点提供了试验材料,为全面认识HSF1作用机理和生理功能奠定了基础。 郭丽红 王定康 袁燕 刘开庆 张乐民关键词:纯化