国家自然科学基金(81370173)
- 作品数：9 被引量：15H指数：3
- 相关作者：黄文杰袁伟锋李理郭振辉黄云更多>>
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- 双重氧化酶与呼吸系统关系的研究进展
- 2016年
- 氧化应激是导致呼吸系统疾病的一个主要原因。近来越来越多的证据表明NADPH氧化酶在呼吸系统产生活性氧（ROS）过程中发挥重要作用。NADPH氧化酶体系现在已基本确定7种氧化酶（NOX）同源异构体,包括NOX1-5、DUOX1、DUOX2,两种组织亚基（p47phox、NOXO1）,两种激活亚基（p67phox、NOXA1）,以及两种双重氧化酶（DUOX）特定的成熟因素（DUOXA1和DUOXA2）-[1]。
- 黄云黄文杰
- 关键词：气道上皮细胞NADPH呼吸道病毒感染呼吸道上皮细胞肺癌细胞异常甲基化
- 肿瘤坏死因子-α可诱导GSTM5核转位
- 2017年
- 目的构建稳定表达谷胱甘肽S转移酶mu5(GSTM5)的人支气管上皮16HBE细胞株,探讨诱导GSTM5核转位的关键因素。方法构建表达GSTM5基因的重组慢病毒载体(PLVX-puro-GSTM5-SBP-3*flag-N、PLVX-puro-3*flag-SBP-GSTM5-C)并制备出相应的慢病毒,感染人支气管上皮16HBE细胞后,经嘌呤霉素筛选获得细胞克隆;实时荧光定量PCR和蛋白印迹法(Western blot)分别检测细胞株中GSTM5的mRNA、蛋白表达水平;以肿瘤坏死因子-α(TNF-α;10ng/ml)刺激稳定转染细胞株(稳转株)0.5h,共聚焦荧光显微镜检测GSTM5核转位。结果成功构建稳定表达GSTM5人支气管上皮细胞株(16HBE-GSTM5-SBP-3*flag-N、16HBE-3*flagSBP-GSTM5-C);荧光共聚焦显微镜显示稳转株在TNF-α刺激诱导后,GSTM5由胞浆转入胞核,以16HBEGSTM5-SBP-3*flag-N稳转株更显著。结论 TNF-α刺激可诱导GSTM5人支气管上皮细胞株中GSTM5发生核转位,可能与其N端含有非经典核定位信号密切相关。
- 曾燕婷李理袁伟锋郭振辉黄文杰
- 关键词：核转位肿瘤坏死因子-Α
- TNFR-Fc对急性肺损伤炎症失衡中MAPK通路的影响
- 2022年
- 目的评价在脂多糖(LPS)导致的炎症反应失衡中,肿瘤坏死因子受体Fc段融合蛋白(TNFR-Fc)对丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)磷酸化水平的影响。方法24只BALB/c小鼠随机平均分为LPS组与TNFR-Fc+LPS组。气管内滴入LPS复制急性肺损伤(ALI)的炎症失衡小鼠模型,腹腔内注射TNFR-Fc中和肿瘤坏死因子(TNF-α),2小时后收集标本,ELISA法检测血清/支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-10、干扰素-γ(IFN-γ)浓度,RT-PCR法检测肺组织TNF-α与核因子-κB(NF-κB)基因转录强度,Western Blot检测肺组织MAPKs(包括Erk1/2、p38与JNK)磷酸化水平。结果两组小鼠在气管内滴入LPS后血清与BALF中IL-6浓度显著增高,TNF-α转录水平增高,MAPKs磷酸化水平增高;TNFR-Fc+LPS组小鼠血清与BALF中IL-6浓度较LPS组显著降低,TNF-α转录水平下降,MAPK磷酸化水平下降。结论TNFR-Fc中和TNF-α能下调炎症反应信号通路中MAPKs磷酸化水平,下调炎症反应强度,恢复ALI小鼠的炎症反应失衡。
- 袁伟锋李理黄文杰郑燕列
- 谷胱甘肽-S-转移酶系研究进展及其与肺部疾病的相关性被引量：2
- 2015年
- 谷胱甘肽-S-转移酶系是由多个基因编码,具有多种功能的一个Ⅱ相反应代谢的超家族酶系。它催化还原型谷胱甘肽与多种亲电子化合物结合,使其功能失活,通过尿液或胆汁排出体外,在解毒、防御氧化应激,防止细胞损害等过程中起重要作用。近年来研究发现,谷胱甘肽-S-转移酶系以多种毒性物质、活性氧及其产物作为底物,进行生物转化代谢,参与了肺部的多种抗氧化过程,且谷胱甘肽-S-转移酶系的基因多态性与COPD、哮喘、肺癌等疾病相关。现就谷胱甘肽-S-转移酶系的分子生物学研究进展及其与多种肺部疾病之间的关系进行综述。
- 先俊李理袁伟锋张安兵黄文杰
- 关键词：基因多态性肺部疾病
- 谷胱甘肽S转移酶mu5对肿瘤坏死因子α诱导人支气管上皮细胞氧化损伤的调节作用研究被引量：5
- 2016年
- 目的建立肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导支气管上皮(16HBE)细胞炎症模型,探讨谷胱甘肽S转移酶mu5(GSTM5)在炎症诱导的氧化应激损伤中的作用。方法以TNF-α(10 ng/m L)刺激16HBE细胞,运用真核细胞表达载体技术,增强GSTM5基因表达,比色法检测细胞内丙二醛(MDA)及总抗氧化能力(T-AOC);MTT法检测细胞存活率;RT-PCR法检测NADPH氧化酶(NOX)家族NOX1、NOX2、NOX3、NOX4、NOX5、双重氧化酶1(DUOX1)、DUOX2相关基因转录水平;蛋白质印迹法检测NOX1和NOX2蛋白表达水平。结果 TNF-α刺激16HBE细胞后,细胞内MDA水平增高,T-AOC能力减低,细胞存活率明显降低。预转染GSTM5质粒可有效降低TNF-α诱导的细胞内MDA的增高(P<0.05),显著增强T-AOC能力(P<0.05),同时增加16HBE细胞存活率(P<0.05)。GSTM5质粒组NOX1、NOX2基因转录强度以及蛋白表达水平与TNF-α组及阴性对照组相比显著降低(P均<0.05),而NOX3、NOX4、NOX5、DUOX1、DUOX2基因表达强度比较,差异无统计学意义(P均>0.05)。结论增强GSTM5表达对炎症诱发的人支气管上皮细胞氧化应激损伤有保护性调节作用,其机制与下调NOX1、NOX2基因表达密切相关。
- 赵艳雪李理袁伟锋郭振辉黄文杰
- 关键词：真核细胞表达载体
- GSTM5参与的氧化／抗氧化失衡对支气管上皮细胞炎症的调节作用
- 2018年
- 目的沉默人支气管上皮细胞谷胱甘肽硫转移酶mu5（GSTM5）的表达，探讨GSTM5参与的氧化／抗氧化失衡对支气管上皮细胞炎症的调节作用。方法肿瘤坏死因子α（TNF-α）（10μg／L，24h）刺激建立人支气管上皮细胞炎症损伤模型，转染小干扰RNA（siRNA）沉默人支气管上皮细胞GSTM5的表达，反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶（NOX）家族NOXl、NOX2、NOX3、NOX4、NOX5、双重氧化酶1（DUOXl）、DUOX2相关基因转录水平；蛋白质印迹法检测NOX1和NOX2蛋白表达水平；比色法检测细胞内丙二醛（MDA）及总抗氧化能力（T-AOC）；酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测细胞培养上清液中自介素1β（IL-1β）、IL-6、IL-10、γ干扰素（IFN-γ）浓度；噻唑兰（MTT）法检测细胞存活率。结果合成的siRNA～GSTM5序列2组可明显下调人支气管上皮细胞GSTM5mRNA的表达（P〈0．05）；沉默GSTM5组NOXl、NOX2基因转录强度与蛋白表达水平较TNF-α组及阴性对照组相比均增高（P〈0．05），而NOX3、NOX4、NOX5、DUOXl、DUOX2基因表达强度差异无统计学意义（P均〉0．05）；沉默GSTM5组较TNF-α组细胞内MDA的增高（P〈O．05），T-AOC能力减弱（P〈0．05），上清液中IL-18、IL-6、IL-10、IFN-γ浓度均较TNF-α组升高（P均〈0．05），细胞存活率降低（P〈O．05）。结论GSTM5对炎症诱导的支气管上皮细胞炎症损伤有保护作用，下调GSTM5加剧支气管上皮细胞氧化／抗氧化失衡，上调细胞炎症水平，加重细胞损伤。
- 张佳坷李理袁伟锋郭振辉黄文杰
- 关键词：RNA干扰炎症
- 谷胱甘肽硫转移酶M5通过p38MAPK/NF-κB途径下调肿瘤坏死因子α介导的人支气管上皮细胞炎症水平被引量：3
- 2016年
- 目的探讨急性肺损伤炎症状态下谷胱甘肽硫转移酶M5(GSTM5)对人支气管上皮细胞16HBE炎症水平的影响及其可能的分子机制。方法肿瘤坏死因子α(TNF-α;10 ng/m L)诱导16HBE,建立急性肺损伤细胞炎症模型,分组处理如下:空白对照组、TNF-α组(TNF-α)、GSTM5组(GSTM5+TNF-α)、阴性对照组(阴性对照质粒+TNF-α)。GSTM5组及阴性对照组分别采用脂质体Lipofectamine2000转染导入GSTM5-GFP质粒及阴性对照质粒;酶联免疫吸附试验检测各组细胞上清液中IL-6、IL-8、IL-10的含量,反转录聚合酶链反应检测NF-κB mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测NF-κB、P-NF-κB、p38、P-p38蛋白表达水平。结果荧光显微镜检查证实成功构建GSTM5-GFP真核表达质粒并转染成功。TNF-α诱导后,细胞培养上清液中IL-6、IL-8、IL-10浓度较空白对照组升高(P<0.05),GSTM5组细胞上清液中IL-6、IL-8、IL-10均较TNF-α组降低(P<0.05),差异有统计学意义;同时,TNF-α刺激后各组细胞总NF-κB mRNA转录水平、NF-κB、p38磷酸化水平均较空白对照组增高(P<0.05),而GSTM5组较TNF-α组与阴性对照组降低(P<0.05)。结论过表达GSTM5可下调TNF-α诱导的人支气管上皮细胞16HBE炎症水平,其机制与GSTM5抑制p38MAPK、NF-κB磷酸化密切相关。
- 黄云袁伟锋李理黄文杰
- 关键词：核因子-ΚBP38丝裂原活化蛋白激酶
- 气管内滴入与腹膜腔注射脂多糖致肺组织炎症损伤的动态变化比较被引量：6
- 2017年
- 目的比较气管内滴入脂多糖与腹膜腔注射脂多糖两种不同方法复制的急性肺损伤小鼠模型的生理、病理特点及动态变化。方法 BALB/c小鼠麻醉后分别经气管内滴入脂多糖(5 mg/kg)和经腹膜腔内注射脂多糖(5 mg/kg)。在脂多糖处理后第1、2、6、12、18、24、48 h处死小鼠,通过检测支气管肺泡灌洗液(BALF)蛋白含量、肺湿/干重比值和肺组织病理半定量评分评价呼吸系统损伤程度,ELISA法检测血清与BALF上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度以了解全身与肺局部炎症反应程度。结果两组脂多糖处理小鼠的BALF中蛋白含量、肺湿/干重比值、血清/BALF中TNF-α浓度均增高。腹膜腔注射脂多糖小鼠肺湿/干重比值较气管滴入脂多糖小鼠高,其余上述指标在两组间无显著差异。两组小鼠在脂多糖处理后肺组织炎症细胞浸润、肺泡间隔增宽、肺组织病理半定量评分均明显增高,以气管内滴入组病理损伤较显著。结论气管内滴入脂多糖与腹腔注射脂多糖均可引起肺局部炎症与组织损伤,两种模型病理损伤程度差异较大,自身好转趋势不同,应根据实验目的选择合适的模型复制方法。
- 袁伟锋李理徐虹胡玉洁黄文杰
- 关键词：脂多糖
- TNFR-Fc上调Nrf2表达改善小鼠急性肺损伤氧化损伤的作用
- 2021年
- 目的探讨肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白(tumor necrosis factor receptor-Fc fusion protein,TNFR-Fc)逆转急性肺损伤(acute lung injury,ALI)过程中受抑制的红系衍生的核因子2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2)表达,并纠正肺组织氧化损伤的作用。方法小鼠分为对照组、ALI组、干预组,以气管内滴入脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)复制ALI小鼠模型,干预组小鼠腹腔内注射TNFR-Fc,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清/支气管肺泡灌洗液(broncheo-alveolar lavage fluid,BALF)中白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)与IL-10浓度。Western blot检测肺组织Nrf2表达水平,比色法检测肺组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)与总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)。实时荧光逆转录定量聚合酶链反应(real-time reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测肺组织氧化酶转录水平。结果干预组小鼠血清与BALF的IL-6浓度较ALI组显著下降(血清:1073.48±156.062 vs.1739.03±423.206,P<0.05;BALF:468.37±123.615 vs.1440.15±184.585,P<0.05),BALF中IL-10浓度与ALI组相仿(P>0.05)。干预组小鼠肺组织Nrf2相对表达水平(11.66±1.317 vs.3.00±0.184,P<0.001)与T-AOC(0.26±0.015 vs.0.22±0.020,P=0.034)高于ALI组,MDA浓度稍低于ALI组(22.51±3.875 vs.25.40±3.239,P=0.288)。干预组黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XO)基因转录强度显著低于ALI组(1.09±0.361 vs.2.46±0.650,P=0.008),而超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)基因转录水平相仿(P>0.05)。结论LPS致ALI时Nrf2表达水平下降,伴随肺组织氧化损伤,而通过TNFR-Fc降低炎症反应强度后,Nrf2表达水平增高,逆转ALI的肺组织氧化损伤。
- 袁伟锋李理黄文杰徐虹郑燕列
- 关键词：急性肺损伤
