国家自然科学基金(81173580)
- 作品数：23 被引量：154H指数：8
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- 蛇床子素延缓叔丁基过氧化氢诱导的神经干细胞衰老被引量：6
- 2015年
- 目的通过建立神经干细胞(NSC)体外衰老模型,探讨蛇床子素(Ost)延缓NSC衰老的作用,并探讨其可能调控机制。方法体外培养NSC,在增殖培养基中传代纯化培养至第3代,用于细胞实验。利用叔丁基过氧化氢(t-BHP)50,100和150μmol·L-1分别与NSC孵育1,2和3 h,CCK-8法检测细胞存活率,确定t-BHP 100μmol·L-1与NSC孵育2 h为制备细胞衰老模型的最佳条件。再加入Ost 50,100和150μmol·L-1作用1,2和3 h,CCK-8法检测细胞存活率,选择Ost促进细胞存活的最佳作用浓度和作用时间。实验分为细胞对照组、衰老模型组(NSC与t-BHP 100μmol·L-1作用2 h)和模型+Ost组(NSC与t-BHP 100μmol·L-1作用2 h后,再与Ost 100μmol·L-1作用2 h),用Ki67染色法检测NSC细胞增殖能力,免疫组化法检测NSC分化能力,衰老β-半乳糖苷酶(Sa-β-gal)法检测衰老细胞百分率,RT-PCR法检测p53,p21,p19和p16基因表达,Western蛋白印迹法检测P16、细胞周期蛋白依赖性激酶D1(CDKD1)和磷酸化成视网膜细胞瘤蛋白(p Rb)蛋白表达。结果 Ost 100μmol·L-1作用2 h可明显促进NSC存活(P<0.01)。与细胞对照组相比,模型组NSC增殖能力明显下降(P<0.05),分化为星形胶质细胞、神经元和少突胶质细胞的能力亦明显下降(P<0.05),Sa-β-gal阳性衰老细胞百分率升高(P<0.01)。与模型组相比,模型+Ost 100μmol·L-1组NSC增殖能力升高(P<0.05),分化为星形胶质细胞、神经元和少突胶质细胞的能力亦明显提高(P<0.05),Sa-β-gal阳性衰老细胞百分率下降(P<0.01)。RT-PCR结果显示,与模型组相比,模型+Ost100μmol·L-1组p16和p53 m RNA表达水平降低(P<0.05),p19和p21 m RNA表达无显著性变化;与模型组相比,模型+Ost 100μmol·L-1组P16蛋白表达降低,同时CDKD1和p Rb蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论 Ost具有延缓t-BHP造成NSC衰老的作用,其延缓NSC衰老作用机制可能与调控P16-p Rb信号通路有关。
- 姚璎珈孔亮教亚男李少恒陶震宇闫宇辉杨静娴
- 关键词：神经干细胞蛇床子素
- 蛇床子素对机械性脑损伤小鼠的抗炎抗凋亡作用研究被引量：20
- 2015年
- 目的研究蛇床子素(osthole,Ost)对小鼠机械性脑损伤后细胞凋亡及炎症细胞浸润的影响。方法建立针刺伤小鼠机械性脑损伤模型,随机分为假手术组、模型组、蛇床子素10、20、30 mg·kg-1治疗组。主要检测各组小鼠脑组织含水量;RT-PCR法检测皮层损伤灶凋亡因子Bax,Bcl-2,活化半胱胺酸蛋白酶蛋白-3(Caspase-3)mRNA的表达变化;免疫组织化学染色法检测损伤灶周围中性粒细胞(MPO)及小胶质细胞(Iba-1)浸润情况以及Caspase-3阳性细胞表达情况。结果蛇床子素20,30 mg·kg-1治疗组能够明显降低脑组织含水量;提高Bax/Bcl-2比值,降低凋亡因子Caspase-3 mRNA表达;蛇床子素30 mg·kg-1治疗组能够明显减少大脑皮层损伤灶周围中性粒细胞及小胶质细胞的浸润,并且明显减少凋亡细胞数量。结论蛇床子素对开放性脑损伤的小鼠具有一定的治疗作用,可能是通过减少炎症细胞浸润,并且减少细胞凋亡发挥治疗作用。
- 孔亮姚璎珈教亚男李少恒陶震宇闫宇辉杨静娴
- 关键词：蛇床子素脑损伤神经功能脑水肿
- 独活香豆素对Aβ所致神经元损伤的神经保护作用研究被引量：4
- 2016年
- 目的:探究独活香豆素(TCA)对Aβ所致的小鼠海马神经元损伤的神经保护作用及其作用机理。方法:从胎鼠大脑海马中分离出神经元细胞,培养9 d待神经元成熟后将细胞分为正常组(control)、模型组(30 mmol/L Aβ孵育24 h)和给药组(经Aβ处理后给予不同浓度TCA处理的细胞)。MTT法和LDH法检测各组海马神经元的活性,RTPCR法检测环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA表达的变化,免疫组织化学染色法检测突触素-1(synapsin^(-1))、磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(p-CREB)和BDNF蛋白表达的变化。结果:孵育Aβ的海马神经元显现较强神经毒性。与模型组比较,TCA组明显增强神经细胞的存活能力,增加synapsin^(-1)的表达量,提高BDNF mRNA的表达,增强p-CREB和BDNF蛋白的表达。结论:TCA对Aβ所致的海马神经元损伤具有保护作用,此神经保护作用可能是与促进CREB的磷酸化使p-CREB表达增多,并刺激神经营养因子BDNF的生成增多有关。
- 闫宇辉李少恒孔亮教亚男姚璎珈陶震宇宋捷杨静娴
- 关键词：阿尔茨海默病海马神经元脑源性神经营养因子
- 蛇床子素可促进体外培养神经干细胞的增殖被引量：14
- 2014年
- 背景:神经干细胞具有自我更新和多向分化潜能,但正常情况下,神经干细胞数目太少,且大部分处于静息状态,促进其增殖是神经干细胞治疗神经退行性疾病的关键。目的:观察蛇床子素对体外培养的神经干细胞增殖作用的影响,分析其促进增殖能力的作用机制。方法:体外培养神经干细胞,在增殖培养基中培养至第3代,加入不同浓度的蛇床子素(10,50和100μmol/L)作用24 h用CCK-8法检测细胞活力,再培养3,5,7 d后测量神经球半径,用免疫荧光组化法计数Ki67阳性细胞数目;再培养3 d后利用RT-PCR技术检测神经干细胞中Notch 1、Hes 1和Mash 1基因表达的情况。结果与结论:与正常组比较,50,100μmol/L的蛇床子素具有明显促进神经干细胞增殖能力的作用,100μmol/L作用最为显著,可引起Notch 1基因、Hes 1基因上调表达,对Mash 1基因基本无影响,说明蛇床子素对体外培养的神经干细胞具有促进增殖作用,其作用机制可能与激活Notch信号通路上的Notch 1、Hes 1基因有关。
- 姚璎珈胡昱李少恒教亚男孔亮陶震宇杨静娴
- 关键词：独活NOTCH信号通路NOTCH1HES1
- 蛇床子素上调miRNA-107减少APP_(595/596)转基因神经元Aβ的生成被引量：6
- 2017年
- 目的考察蛇床子素(osthole,Ost)对转染APP_(595/596)基因的小鼠神经元的保护作用,并探讨其作用机制。方法原代培养小鼠神经元,转染APP_(595/596)基因构建AD细胞模型;采用CCK-8法检测神经元存活率;试剂盒法检测乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)释放量,评价神经元的损伤程度;TUNEL染色法检测神经元凋亡;免疫荧光化学法检测β-淀粉样蛋白(beta-amyloid peptide,Aβ)和β-分泌酶1(β-site APP cleaving enzyme 1,BACE1)的蛋白表达;RT-PCR检测miRNA-107的表达。结果与模型组比较,Ost干预组神经元的存活率明显升高,LDH释放量明显降低,凋亡率明显降低,Aβ和BACE1的蛋白表达均明显降低,而miRNA-107的表达明显升高。结论 Ost对转染APP_(595/596)基因的小鼠神经元具有良好的保护作用,其机制可能与上调miRNA-107表达,抑制BACE1表达,进而减少Aβ生成有关。
- 肖洪贺教亚男闫宇辉李红艳杨静娴
- 关键词：独活蛇床子素神经保护Β-淀粉样蛋白
- 基于网络药理学的人参二醇对阿尔茨海默病细胞保护作用的研究被引量：5
- 2018年
- 目的运用网络药理学预测及体外验证方法,研究人参二醇(PD)对阿尔茨海默病(AD)细胞的保护作用。方法运用网络药理学技术,筛选出107个治疗AD的方剂,筛选出现频率最高的人参及其AD作用的靶点,利用分子对接技术,寻找与非受体酪氨酸激酶(FYN)对接评分最高的成分。体外建立APP-N2a细胞模型,采用MTT法检测细胞存活率;LDH方法检测细胞的损伤程度;流式细胞技术检测细胞凋亡及细胞内Ca^(2+)浓度变化情况;Western blot检测磷酸化FYN蛋白表达情况。结果通过网络药理学方法筛选出人参中18个活性成分和29个AD相关靶点,分子对接结果显示,PD与FYN有较强的结合性。实验证明,PD可增加细胞的存活率,降低LDH的释放,且可明显减少细胞凋亡,减轻AD细胞内Ca^(2+)超载,降低FYN-Y416蛋白的表达。结论通过实验验证了网络药理学的预测结果,PD对AD的保护作用可能与抑制FYN磷酸化有关。
- 梁喜才姚璎珈王玉莹李秀丽王雅萌蔺莹时悦杨静娴
- 关键词：阿尔茨海默病分子对接人参二醇FYNCA^2+超载
- 独活治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的免疫学机制研究被引量：5
- 2012年
- 目的探究中药独活对多发性硬化(MS)模型小鼠的治疗作用及机理。方法雌性C57BL/6小鼠,按文献方法制备实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型。将造模小鼠随机分为正常,模型,独活低、中、高剂量,阳性对照药黄芩苷及醋酸泼尼松等7组。各组每日灌胃相应的药物,40天后分别进行EAE神经功能评分、淋巴细胞增殖能力检测、淋巴细胞分泌细胞因子含量测定。结果高剂量独活(36 mg/kg)能明显缓解EAE神经功能受损症状,使临床评分显著降低;能显著抑制淋巴细胞增殖;能使脾淋巴细胞分泌的IFN-γ浓度下降、IL-13浓度升高,上述结果与EAE模型组比较均差异显著(P<0.05,P<0.01)。结论独活能明显减轻EAE神经功能受损症状;显著抑制EAE小鼠脾淋巴细胞的增殖;下调Th1细胞因子IFN-γ、上调Th2细胞因子IL-13,恢复Th1/Th2的平衡,从而有效缓解MS/EAE。
- 郝海光李红艳张晓丹赵丹孙东胡昱杨静娴
- 关键词：独活实验性自身免疫性脑脊髓炎多发性硬化细胞因子
- 独活对实验性变态反应性脑脊髓炎小鼠的神经保护作用研究被引量：6
- 2013年
- 目的探讨独活对实验性变态反应性脑脊髓炎小鼠的神经保护作用。方法采用人工合成MOG35-55肽段诱发C57BL/6小鼠EAE模型,分组给药后观察神经功能变化;光镜观察组织学切片染色;ELISA检测IL-17和IL-23的含量。结果高剂量独活能明显改善EAE小鼠的临床症状,减轻脱髓鞘损伤,显著抑制其脾淋巴细胞分泌促炎细胞因子的能力。结论独活对实验性变态反应性脑脊髓炎具有神经保护作用。
- 赵丹张晓丹郝海光胡昱孙东李红艳杨静娴
- 关键词：独活实验性自身免疫性脑脊髓炎脱髓鞘神经保护
- 蛇床子素对APP/PS1双转基因AD小鼠的治疗作用被引量：7
- 2017年
- 目的:研究蛇床子素对APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠的治疗作用。方法:将6月龄的雄性APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组与蛇床子素组,同月龄的雄性C57BL/6小鼠作为阴性对照组;水迷宫法检测各组小鼠的学习记忆能力;HE及尼氏染色法检测小鼠脑组织病理损伤情况;免疫荧光组织化学法检测各组小鼠脑组织中Aβ蛋白的表达。结果:与模型组相比,蛇床子素组可以改善AD小鼠的学习记忆能力,减轻小鼠脑组织病理损伤,降低小鼠脑组织内Aβ蛋白表达。结论:蛇床子素对APP/PS1小鼠具有一定的治疗作用,其可以减轻脑内病理损伤,提高小鼠的学习与记忆能力,可能与降低Aβ表达有关。
- 王雅萌教亚男闫宇辉李少恒宋捷王玉莹李秀丽杨静娴
- 关键词：蛇床子素阿尔茨海默病学习记忆能力
- CCR5基因转染对骨髓源神经干细胞生物学行为的影响被引量：2
- 2012年
- 骨髓源神经干细胞(bone marrow-derived neural stem cells,BM-NSCs)具有自我更新和分化为神经元与神经胶质细胞的潜能,可用于修复治疗多种神经系统退变与损伤性疾病。但由于其表面缺乏趋化因子受体,移植后向中枢病变部位迁移的速度较慢,疗效欠佳。该研究构建了趋化因子受体CCR5基因,并转染BM-NSCs,用免疫荧光细胞化学法、流式细胞仪法及Boyden小室细胞趋化实验,体外研究了CCR5高表达对BM-NSCs增殖、分化与迁移能力的影响。结果表明,CCR5高表达能显著增强BM-NSCs的趋化能力,而不影响其自我更新和分化为神经元与神经胶质细胞的能力,说明其植入体内后可保持细胞替代与神经修复作用,并能快速大量迁移到病灶部位,显著增强疗效。
- 胡昱郝海光张晓丹赵丹孙东杨静娴
- 关键词：骨髓源神经干细胞趋化因子受体CCR5分化
