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人视网膜色素上皮细胞吞噬过程中MERTK基因mRNA表达水平与蛋白激酶C关系的研究被引量：2: 2010年; 目的探讨人视网膜色素上皮（hRPE）细胞吞噬过程中MERTK基因mRNA表达水平与蛋白激酶C（PKC）的相互作用。方法对照实验研究。采用1×10^10个／L视细胞外节膜盘（ROS），于37℃下孵育体外培养的正常hRPE细胞，在孵育的不同时间终止吞噬反应。用双重荧光标记法，检测hRPE细胞的吞噬能力。用液闪记数γ-^32P放射活性法，检测不同吞噬时间点的PKC活性。以逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法，检测MERTK基因的mRNA水平变化情况。以PKC激活剂和拈抗剂处理hRPE细胞后，再行MERTK基因mRNA表达水平检测。采用SPSS13．0统计学软件进行数据分析，实验组与对照组hRPE细胞吞噬ROS能力、PKC活性比较采用Student’t检验，MERTK基因mRNA表达水平比较采用单因素方差分析。结果ROS孵育后的hRPE细胞结合及吞入ROS的数量逐渐增多，至24h时，hRPE细胞吞噬ROS的数量达到高峰，为（2．85±0．11）×10^5个，与对照组（0．00±0．00）×10^6个比较，差异有统计学意义（t=47．64，P〈0．05）。ROS孵育后的hRPE细胞胞质PKC活性降低，至24h时，PKC活性降至最低，细胞质的PKC活性为（151．13±17．67）nmol·g^-1·min^-1，细胞膜的PKC活性为（152．45±64．83）nmol·g^-1·min^-1；对照组细胞质的PKC活性为（329．63±14．26）nmol·g^-1·min^-1，细胞膜的PKC活性为（467．67±68．87）nmol·g^-1·min^-1；两组间PKC活性比较，差异有统计学意义（细胞质：t=89．66，P〈0．05；细胞膜t=10．31，P〈0．05）。在hRPE细胞与ROS不同时段的孵育过程中，MERTK基因mRNA均呈现出高表达状态，孵育至90min时，MERTK基因mRNA表达灰度值为1．8853±0．0077，与对照组灰度值0．7246±0．0062相比，差异有统计学意义（F=16060．2167，P〈0．05）；孵育至24h时，MERTK基因mRNA表达灰度值为0．5946±0．0082，与对照组灰度值0．3343±0．0064比较，差异有统计学意义（F=919．8421; 孙昱昭洪晶; 关键词：蛋白激酶C 受体蛋白质酪氨酸激酶类

细胞内Ca^2＋及MERTK基因在人视网膜色素上皮细胞吞噬功能中的作用: 2009年; 目的观察细胞内Ca^2＋及MERTK基因在人视网膜色素上皮（RPE）细胞的吞噬功能中所起的作用及二者的相互关系。方法用视细胞外节膜盘（ROS）于37℃孵育培养的RPE细胞，在孵育不同终止吞噬反应。双重荧光标记法检测RPE细胞吞噬动力学；钙离子荧光探针负载法在荧光显微镜下测定RPE细胞内Ca^2＋的变化；半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测相应时间点MERTK基因表达的变化及施加Ca^2＋激活剂（A23187载体）或拮抗剂（verapamile）后MERTK基因表达的变化。结果RPE细胞与ROS孵育过程中，ROS结合于RPE细胞表面发生在15min时，RPE细胞吞噬ROS在24h时达到饱和。细胞内Ca^2＋在孵育15min时升高，并在24h内保持高水平；MERTK基因表达在RPE细胞与ROS孵育5min时增强，并在全部孵育过程中呈现出高表达状态；以A23187载体开放钙通道升高RPE细胞内Ca^2＋后，MERTK基因信使核糖核酸（mRNA）水平升高，并呈剂量依赖性。经A23187预处理后的孵育实验中所检测到的MERTK mRNA水平除3h这一时间点外均高于对照组；verapamile拮抗RPE细胞内Ca^2＋后，MERTK基因表达明显下降并呈剂量依赖性；以verapamile预处理后继续与ROS孵育，所检测到的MERTK基因在24h内均低于对照组。结论MERTK基因及细胞内Ca^2＋发挥着维持RPE细胞吞噬过程的重要作用，MERTK作为上游调控信号启动下游的细胞内Ca^2＋信号来维持RPE细胞对ROS的摄入过程。; 孙昱昭洪晶安刚; 关键词：CA^2+

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国家教育部博士点基金(20040159010)

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