国家自然科学基金(30872426)
- 作品数：11 被引量：33H指数：4
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- 细胞穿透肽PEP-1介导血红素加氧酶-1对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响被引量：4
- 2010年
- 目的 探讨细胞穿透肽PEP-1介导血红素加氧酶-1（HO-1）对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性SD大鼠,体重220～280g,制备Langendorff离体心脏灌注模型,选取模型制备成功的离体心脏18个,随机分为3组（n=6）：假手术组（S组）、缺血再灌注组（IR组）和PEP-1/HO-1处理＋缺血再灌注组（HO-1组）.IR组K-H液平衡灌注30 min后,采用停灌40 min再灌注50 min的方法制备缺血再灌注模型.HO-1组在停灌前用含50 μmol/L融合蛋白PEP-1/HO-1的K-H液平衡灌注15 min,S组采用K-H液持续灌注120 min.再灌注50 min时,收集冠脉流出液,测定肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）的活性;取心肌组织,采用Western blot法测定HO-1蛋白表达水平,采用硫代巴比妥酸比色法测定MDA含量,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性.结果 HO-1组心肌组织HO-1蛋白表达水平较IR组升高（P＜0.01）.与S组比较,IR组和HO-1组冠脉流出液CK和LDH活性及心肌组织MDA含量升高,心肌组织SOD活性降低（P＜0.01）;与IR组比较,HO-1组冠脉流出液CK和LDH活性及心肌组织MDA含量降低,心肌组织SOD活性升高（P＜0.01）.结论细胞穿透肽PEP-1可将HO-1蛋白成功导入心肌组织,并减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.
- 何祥虎王焱林颜学滔王成夭张宗泽饶艳
- 异丙酚对大鼠心肌缺血再灌注时Pim-1表达的影响被引量：2
- 2011年
- 目的探讨异丙酚对大鼠心肌缺血再灌注时Pim-1表达的影响。方法健康雄性sD大鼠40只，体重220～250g，采用随机数字表法，将其随机分为5组（n=8）：假手术组（s组）、缺血再灌注组（I／R组）、脂肪乳剂组（I组）、低剂量异丙酚组（P1组）和高剂量异丙酚组（P2组）。I／R组、I组、P1组和P2组和采用结扎左冠状动脉前降支30min再灌注的方法制备心肌缺血再灌注损伤模型。P1组和P2组于缺血前10min经股静脉输注异丙酚6、12mg·kg^-1·h^-1至再灌注120min，I组给予脂肪乳剂1．2ml·kg^-1·h^-1。再灌注120min时，取心肌组织，测定心肌梗死面积、细胞凋亡、Pim-1表达和caspase-3活性。结果与s组比较，I／R组和I组心肌梗死面积、凋亡指数和caspase-3活性升高，心肌组织Pim-1表达下调（P〈0．01）；与I／R组比较，P1组和P2组心肌梗死面积、凋亡指数和caspase-3活性降低，心肌组织Pim-1表达上调（P〈0．01），I组上述指标差异无统计学意义（P〉0．05）。结论异丙酚可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤，其机制与上调Pim-1表达有关。
- 王赟付泉源武海崟张婧婧王焱林
- 关键词：二异丙酚心肌再灌注损伤PIM-1
- PEP-1-血红素加氧酶-1融合蛋白转导对大鼠H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的影响
- 2010年
- 目的 探讨PEP-1-血红素加氧酶（HO）-1融合蛋白转导对大鼠H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的影响.方法 构建含人HO-1基因的原核表达质粒pETl5b-PEP1-hHO-1,质粒转化后诱导目的 蛋白PEP-1-HO-1表达.用含15%胎牛血清高糖DMEM培养基培养H9c2心肌细胞,随机分为4组（n=4）：正常对照组（C组）常规培养;缺氧复氧组（H/R组）细胞缺氧22 h,复氧8 h;低浓度融合蛋白组（L-HO组）缺氧前用终浓度为1.0 μmol/L PEP-1-HO-1融合蛋白孵育细胞;高浓度融合蛋白组（H-HO组）缺氧前即刻用终浓度为2.0 μmol/L PEP-1-HO-1融合蛋白孵育细胞.复氧结束后收集细胞及培养液上清,采用2,4-二硝基苯肼显色法检测培养液乳酸脱氢酶（LDH）活性,硫代巴比妥酸比色法检测细胞MDA含量,黄嘌呤氧化酶法检测细胞SOD活性.结果 与C组比较,H/R组、L-HO组、H-HO组心肌细胞SOD活性降低,MDA含量升高,培养液LDH活性升高（P＜0.05）;与H/R组比较,L-HO组和H-HO组心肌细胞SOD活性升高,MDA含量降低,培养液LDH活性降低（P＜0.05）;与L-HO组比较,H-HO组心肌细胞SOD活性升高,MDA含量降低,培养液LDH活性降低（P＜0.05）.结论 PEP-1-HO-1融合蛋白转导入大鼠H9c2心肌细胞可减轻细胞缺氧复氧损伤.
- 颜学滔王焱林王成夭何祥虎饶艳
- 关键词：重组融合蛋白质类血红素加氧酶-1细胞低氧
- 异丙酚对高糖诱导心肌细胞肥大时血红素加氧酶-1表达的影响被引量：1
- 2012年
- 目的:观察血红素加氧酶-1在高糖诱导的心肌细胞肥大中的表达,以及异丙酚对其表达的影响。方法:体外培养乳鼠心肌细胞,分组给药后,用BCA法测心肌细胞的蛋白质含量;用计算机图像分析系统检测心肌细胞表面积;用DCFH-DA活性氧检测试剂盒检测细胞内氧自由基的产生;用RT-PCR和Western blot分别检测心肌细胞中HO-1mRNA及蛋白表达。结果:高糖组心肌细胞表面积、细胞蛋白含量及氧自由基产生均升高。50μmol/L浓度的异丙酚对高糖诱导的肥大心肌细胞表面积、细胞蛋白含量及氧自由基的产生均有显著的抑制作用,而给予HO-1抑制剂后其作用明显减弱。结论:HO-1可能参与了异丙酚抑制心肌细胞肥大的作用。
- 徐金金雷少青刘志刚吴洋夏中元
- 关键词：血红素加氧酶-1高糖心肌异丙酚
- 细胞穿透肽PEP-1介导血红素加氧酶-1对大鼠缺血心肌的转导及影响被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨细胞穿透肽PEP-1介导血红素加氧酶-1(HO-1)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响。方法:制备融合蛋白PEP-1/HO-1,通过酶联免疫吸附法检测给予融合蛋白后各时间点血清HO-1水平,探讨动物实验给予融合蛋白的最佳时间点。健康雄性SD大鼠18只,体重220-280g,随机分为3组:正常对照组(C组,n=6)、缺血再灌注组(IR组,n=6)和PEP-1/HO-1处理+缺血再灌注组(HO组,n=6)。制备心肌缺血再灌注损伤模型,于再灌注结束后,测定血清肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性及心肌梗死面积。结果:给予融合蛋白后,血清HO-1蛋白浓度在1h和3h达峰值。与C组比较,IR组血清CK和LDH活性升高,心肌梗死面积增加(P<0.05);与IR组比较,HO组血清CK和LDH活性降低,心肌梗死面积减少(P<0.05)。结论:细胞穿透肽PEP-1介导的HO-1对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。
- 何祥虎王焱林王成夭颜学滔江海星
- 关键词：细胞穿透肽
- 腺苷后处理对大鼠心肌缺血再灌注时血清IL-10和TNF-α浓度的影响被引量：4
- 2010年
- 目的 探讨腺苷后处理对大鼠心肌缺血再灌注时血清IL-10和TNF-α浓度的影响.方法 雄性SD大鼠24只,体重180～250 g,随机分为4组（n=6）：假手术组（S组）、缺血再灌注组（IR组）、缺血后处理组（IP组）和腺苷后处理组（AP组）.IR组、IP组和AP组结扎冠状动脉左前降支30 min后恢复再灌注.IP组缺血30 min时进行再灌注30 s缺血30 s,循环3次,然后再灌注120 min;AP组缺血30 min时静脉输注腺苷40 μg·kg-1·min-1,剂量1.5 mg/kg,然后再灌注120 min.于缺血前（基础状态）、缺血30 min、再灌注30、120 min时记录HR、SP和DP.再灌注120 min时采集动脉血样,测定血清IL-10和TNF-α的浓度.采集血样后,取心肌组织,测定MDA含量及心肌梗死面积,光镜下观察心肌病理学结果.结果 与S组比较,IR组HR、SP和DP降低,IP组和AP组SP降低,IR组、IP组和AP组血清IL-10、TNF-α浓度和心肌MDA含量升高,心肌梗死面积增加（P〈0.05）;与IR组比较,IP组和AP组HR、SP和DP升高,血清TNF-α浓度和心肌MDA含量降低,心肌梗死面积减小,血清IL-10浓度升高（P〈0.05）;IP组和AP组上述指标差异无统计学意义（P〉0.05）.IP组和AP组心肌病理学损伤程度轻于IR组.结论 腺苷后处理可促进IL-10生成,抑制TNF-α生成,从而减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.
- 柯剑娟王焱林吴云饶艳张力
- 关键词：腺苷白细胞介素10心肌再灌注损伤
- 缺血预处理对大鼠缺血再灌注心肌HIF-1α和HO-1的影响被引量：7
- 2010年
- 目的探讨缺血预处理对大鼠缺血再灌注心肌低氧诱导因子1α（HIF-1α）和血红素加氧酶1（HO-1）的影响。方法健康雄性SD大鼠48只，体重220～280g，随机分为4组（n=12）：假手术组（S组）、缺血再灌注组（IR组）、缺血预处理＋缺血再灌注组（IP组）和缺血预处理＋缺血再灌注＋HO-1抑制剂组（HI组）。采用结扎左冠状动脉前降支30min再灌注120min的方法建立心肌缺血再灌注模型。S组仅在冠状动脉下穿线；IP组于缺血前采用结扎，放松左冠状动脉前降支各5min，重复3次的方法行缺血预处理；HI组于缺血预处理前1d腹腔注射锌原卟啉Ⅸ10mg／kg，其余同IP组。于再灌注结束时测定心肌HIF-1α、HO-1的mRNA和蛋白表达、HO-1活性、SOD活性及MDA含量，计算心肌梗死面积，取动脉血样测定血清TNF-α和IL-6的浓度。结果与S组比较，IR组、IP组和HI组心肌SOD活性降低，MDA含量升高，血清TNF-α和IL-6的浓度升高（P〈0．01）；与IR组比较，IP组心肌SOD活性升高，MDA含量降低，血清TNF-α和IL-6浓度降低，心肌HIF-1α和HO-1的mRNA和蛋白表达上调，HO-1活性升高，心肌梗死面积减小（P〈0．01）；与IP组比较，HI组心肌SOD活性降低，MDA含量升高，血清TNF-α和IL-6浓度升高，心肌HO-1的mRNA和蛋白表达下调，HO-1活性降低，心肌梗死面积增加（P〈0．05或0．01），心肌HIF-1α的mRNA和蛋白表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论缺血预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制与HIF-1α诱导HO-1活性增强有关。
- 何祥虎王焱林王成天张宗泽饶艳颜学滔李卉
- 关键词：缺血预处理心肌再灌注损伤缺氧诱导因子1
- 血红素加氧酶-1融合蛋白PEP-1-HO-1的制备及在大鼠H9c2心肌细胞的转导被引量：10
- 2010年
- 目的:制备血红素加氧酶-1(HO-1)融合蛋白PEP-1-HO-1,观察融合蛋白在大鼠H9c2心肌细胞的转导。方法:设计合成hHO-1 PCR引物,扩增hHO-1 cDNA片段;采用PCR靶向克隆法将扩增产物与含有相同酶切位点载体质粒pET15b-PEP-1进行重组,扩增质粒,双酶切鉴定和DNA测序;将测序和鉴定结果正确的重组质粒转化宿主菌Rosetta(DE3)pLysS,诱导表达融合蛋白PEP-1-HO-1,利用表达蛋白N端的组氨酸"标签"(His-tag)进行亲和层析纯化融合蛋白;SDS-PAGE和Western blotting对融合蛋白进行定性检测,Bradford法定量检测纯化后蛋白;融合蛋白孵育大鼠H9c2心肌细胞,免疫组化法观察融合蛋白在H9c2细胞的转导和分布,分光度法检测蛋白转导后的活性。结果:hHO-1 cDNA与pET15b-PEP-1重组成功,重组质粒pET15b-PEP-1-hHO-1经酶切鉴定含有hHO-1 cDNA,测序分析证实与GenBank提供的原始序列完全一致;重组质粒转化后经诱导和纯化得到了融合蛋白PEP-1-HO-1,浓度达到1.0 g/L;融合蛋白可以穿透H9c2心肌细胞胞膜,进入细胞后主要分布在胞质和胞核内并具有天然活性。结论:成功地构建了pET15b-PEP-1-hHO-1原核表达质粒,获得了可穿透H9c2心肌细胞膜的血红素加氧酶-1融合蛋白PEP-1-HO-1,为应用HO-1治疗缺血性疾病的研究奠定了基础。
- 颜学滔王焱林王家宁王成夭何祥虎
- 关键词：血红素加氧酶-1融合蛋白蛋白转导H9C2细胞
- PI3K／Akt信号通路在异丙酚后处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用被引量：3
- 2012年
- 目的评价磷脂酰肌醇3-激酶／丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（PI3K／Akt）信号通路在异丙酚后处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用。方法体外培养SD乳鼠心肌细胞，接种于96孔板（细胞密度1×10^5／ml，200μl/孔）或6孔板（细胞密度5×10^5／ml，2ml／孔）中，采用随机数字表法，将细胞随机分为4组（n=24）：常规培养组（C组）细胞常规培养6h；缺氧复氧组（H／R组）细胞行缺氧2h，复氧4h；缺氧复氧＋异丙酚组（H／R＋P组）于缺氧结束时行异丙酚（终浓度50μmol／L）后处理；H／R＋异丙酚＋PI3K抑制剂组（H／R＋P＋W组）于缺氧结束时加入PI3K抑制剂渥曼青霉素（终浓度100nmol／L）和异丙酚（终浓度为50μmol／L）。复氧结束时，采用MTT法测定细胞活力，应用生化自动分析仪测定培养液LDH活性；流式细胞仪检测细胞凋亡情况；Western blot法检测心肌细胞磷酸化Akt（p-Akt）、Bcl-2及Bax表达水平。结果与C组相比，H／R组细胞活力降低，LDH活性和细胞凋亡牢升高，p-Akt和Bax表达上调，Bcl-2表达下调，Bcl-2／Bax降低（P〈0．05）。与H／R组比较，H／R＋P组细胞活力升高，LDH活性和细胞凋亡率降低，p-Akt和Bcl-2表达上调，Bax表达下调，Bcl-2／Bax升高（P〈0．05）。与H／R＋P组比较，H／R＋P＋W组细胞活力降低，LDH活性和细胞凋亡率升高，p-Akt和Bcl-2表达下调，Bcl-2／Bax降低（P〈0．05）。结论异丙酚后处理减轻心肌细胞缺氧复氧损伤的机制与激活PI3K／Akt信号通路有关。
- 王赟张宗泽吴云王焱林
- 关键词：1-磷脂酰肌醇3-激酶蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶二异丙酚细胞低氧
- 腺苷预处理对缺血再灌注心肌血红素加氧酶-1的影响被引量：2
- 2011年
- 目的:观察腺苷预处理对心肌缺血再灌注损伤的影响,探讨血红素加氧酶-1(HO-1)在其中的作用。方法:雄性SD大鼠18只,体重(250±16)g,随机分为3组,每组6只:①对照组(C组),②缺血再灌注组(IR组),③腺苷预处理+缺血再灌注组(AP组)。采用结扎/放松左冠状动脉前降支建立心肌缺血再灌注损伤模型。再灌注结束后,采用免疫组化法检测心肌HO-1变化,检测心肌梗死面积、心肌组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,及血清TNF-α水平。结果:与C组比较,IR组心肌组织MDA含量和血清TNF-α水平升高,SOD活性降低,心肌梗死面积增加(P<0.05),HO-1表达差异无统计学意义(P>0.05);与IR组比较,AP组心肌组织MDA含量和血清TNF-α水平降低,SOD活性增强,心肌梗死面积减少,HO-1表达增加(P<0.05)。结论:腺苷预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用与HO-1的表达增加有关。
- 何祥虎王焱林王成夭饶艳柯剑娟
- 关键词：预处理腺苷心肌再灌注损伤血红素加氧酶-1
